SRC信号通路

GJ-4是从中药栀子中提取出的藏红花色素类活性成分,前期研究发现GJ-4对Aβ诱发的小鼠学习记忆障碍具有明显的改善作用。本实验采用小鼠侧脑室注射冈田酸(okadaic acid, OA)建立记忆损伤模型(实验中所有操作均获得中国医学科学院北京协和医学院实验动物伦理委员会的批准,批准号:000MRTX849体外00318),探讨GJ-4对Tau蛋白过度磷酸化引起神经元病变的改善作用及其机制。小鼠OA侧脑室注射后,连续16天灌胃给予GJ-4。结果显示, GJ-4可显著改善OA诱发的小鼠学习记忆障碍,同时减少小鼠海马区神经元尼氏小体的丢失。GJ-4可提高蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A, PP2A)活性并抑制糖原合成酶激酶-3β (PLX4032研究购买glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)表达,进而降低Tau蛋白Ser396、Thr231和Ser404位点的磷酸化水平。进一步研究发现, GJ-4还可降低OA小鼠脑内氧化应激水平和海马星形胶质细胞活化介导的神经炎症而抑制神经元凋亡,最终发挥改善小鼠学习记忆障碍的作用。以H pylori infection上研究表明, GJ-4具有开发成为治疗阿尔茨海默症新药的良好前景。

目的 分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周GNE-140化学结构血长链非编码RNA AC007278.2、MX动力蛋白样GTP酶2(MX2)表达水平与疾病活动度、补体水平的关联性。方法 招募2018年11月至2020年2月武汉亚心总医院及中部战区总医院收治的SLE患者168例(SLE组)。根据患者入院24 h内进行SLE疾病活动指数-2000(SLEDAI-2000)评分，其中疾病活动度为无活动者42例，轻度活动者45例，中度活动者42例，重度活动者39例。招募同期健康人群80名作为对照组。比较不同组的临床资料，采用Pearson相关分析探讨AC007278.2、MX2水平与补体C3、C4水平及疾病活动度的相关性，采用多元线性回归分析影响SLE疾CX-5461体内病活动度的因素。结果 SLE组AC007278.2、MX2水平高于对照组，补体C3、C4及白细胞(WBC)、淋巴细胞、血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示，Shepatitis and other GI infectionsLE患者AC007278.2、MX2水平与补体C3、C4水平呈负相关(P<0.05),与SLEDAI-2000评分呈正相关(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示，AC007278.2(β=0.410)、MX2(β=0.512)与SLE疾病活动度呈正关联(P<0.05),补体C3(β=-0.362)、C4(β=-0.528)与SLE疾病活动度呈负关联(P<0.05)。结论 SLE患者外周血AC007278.2、MX2表达水平升高，与SLE疾病活动度及补体C3、C4具有关联性。

目的探讨血尿酸等指标对老年高血压人群发生认知损害的预测能力及最佳界值。方法采用MMSE(简易智能精神状态)量表对137例老年高血压患者进行认知功能测定,得出认知评分,根据受试者受教育程度及MMSE量表评分区分为认知损害组(观察组)及认知正常组(对照组),行一般资料比较后,筛选出具Liproxstatin-1浓度有统计学意义的影响因素,采用Logistic回归分析校正混杂因素,进一步筛选认知损害发生的危险因素及保护因素,建立预测模型,采用ROC曲线评价不同指标对老年高血压患者认知损害发生的预测价值及最佳界值。NSC 127716 molecular weight结果高血压年限、受教育年限、FBG、TC、SUA与老年高血压群体认知损害的发生密切相关(P<0.05)。综合了高血压年限、受教育年限、FBG、TC、SUA的认知损害预测模型的AUC为0.907(P=0.000),临界值为0.344,灵敏度(真阳性率)为88%,特异度(真阴性率)为83.7%,预测模型的AUC高于单一指标的AUC;其中,受教育年限、FBG与认知损害呈负相关,为认知功能的保护因素;受教育程度的临界值为7.5年,每增加一年,认知损害的发病风险较对照组降低14.7%(OR=0.853,95%CI:0.753～0.965,P=0.012);FBG每增加1mmol/L,认知损害的发病风险较对照组降低34.7%(OR=0.653,95%CI:0.484～0.880,P=0.005),临界值为7.57mmol/L;高血压病程、SUA、TC与认知功能呈正相关,为认知损害发生的危险因素,临界值分别为7.5年、5.8mg/dl、2.67mmol/L,后随着SUA每增加1mg/dl、TC增加1mmol/L、高血压年限增加1年,老年高血压群体认知损害的发病风险较对照组分别增加98.5%(OR=1.015,95%CI:1.08～1.023,P=0.000)、2.132倍(OR=2.132,95%CI:0.442～0.931,P=0.011)、87.8%(OR=1.122,95%CI:1.057～1.192,P=0.000)。结论1.高血压年限、受教育年限、FBG、TC、SUA可作为老年高血压人群发生认知损害的预测指标;2.在本研究中,老年高血压群体发生认知损害的SUA临界值为5.8mg/dl,与既往研究结论接近;3.受教育程度<7.5年、FBG>7.57mmol/L、高血压病程≥7.5年、SUA≥5.8mg/dl、TC≥2.6Normalized phylogenetic profiling (NPP)7mmol/L,符合上述条件的老年高血压患者发生认知损害的预测概率为0.907,预测价值处于高水平。

目的:研究系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematPR-171osus,SLE)影响羟氯喹(Hydroxychloroquine,HCQ)血浆浓度的因素及临床意义,HCQ血浆浓度对25-羟基维生素D[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D]水平的影响,为系统性红斑狼疮患者维持病情稳定提供个体化治疗方exercise is medicine案。方法1收集2021年2月至2022年10月就诊于安徽省立医院风湿免疫科门诊或住院部的SLE患者,符合纳入标准及排除标准,规律服用羟氯喹>6个月且病情稳定的SLE患者89例为研究对象,未服用羟氯喹初次诊治的SLE患者21例为对照。2填写《SLE患者调查表》,征得患者同意,获取SLE患者血样以备后续HCQ血浆浓度的测定。3采用超高效液相色谱-串联质谱联用(ultra performance liquid chromatography mass spectrometer/mass spectrometer,UPLC-MS/MS)方法检测SLE患者血浆中HCQ及3个代谢产物的血药浓度,并进行方法学验证。4采用电化学发光法检测SLE患者血清25(OH)D水平。5通过SPSS软件进行统计学分析,分析HCQ及代谢产物血浆浓度影响因素,以及对25(OH)D水平影响因素分析,探讨分析结果及临床意义。结果1.此次研究SLE稳定组患者共89例,HCQ血浆浓度为158.10(72.97,284.33)ng/mL,去乙基羟氯喹(desethylhydroxychloroquine,DHCQ)血浆浓度为87.80(52.39,137.61)ng/mL,乙基氯喹(desethylchloroquine,DCQ)血selleck NMR浆浓度为41.46(28.88,81.85)ng/mL,双去乙基氯喹(bisdesethylchloroquine,BDCQ)血浆浓度为10.86(4.96,19.25)ng/mL。25(OH)D血清水平为(21.79±7.06)ng/mL。2 HCQ血浆浓度的分析2.1缓解组HCQ血浆浓度179.19(104.95,292.27)ng/mL明显高于低疾病活动度组HCQ血浆浓度105.65(55.78,253.90)ng/mL水平(P<0.05)。2.2 HCQ血浆浓度对c-SLEDAI评分具有显著影响(P<0.05),行ROC曲线分析确定HCQ血浆浓度的临界值,HCQ有效血浆浓度临界值为134.42ng/mL,敏感性为68.9%,特异性为59.1%;2.3 HCQ血浆浓度≤134.42ng/mL为低浓度组40(44.9%)例,HCQ血浆浓度为>134.42ng/mL为高浓度组49(55.1%)例,HCQ低浓度组与高浓度组间比较BMI、c-SLEDAI、WBC、PLT、C3、C4、DHCQ/HCQ、DCQ/HCQ水平,具有显著差异(P<0.05)。2.4 HCQ血浆浓度与PLT(r=0.398,P<0.001),C4(r=0.25,P<0.05)呈正相关,与DHCQ/HCQ、DCQ/HCQ比值呈负相关(P<0.05);而与25(OH)D、BMI、HCQ日剂量、激素剂量、C3无明显相关性(P>0.05)。3 25(OH)D水平的影响因素分析3.1 SLE稳定组25(OH)D水平(21.79±7.06)ng/mL明显高于SLE活动组(12.89±7.69)ng/mL(P<0.001)。3.2 25(OH)D水平与日照时间、C3、C4、Cr、AST呈正相关(P<0.05),与c-SLEDAI呈负相关(P<0.05)。3.3缓解组25(OH)D水平23.53±7.75ng/mL明显高于低疾病活动组20.02±5.84ng/mL(P<0.05)。3.4行ROC曲线分析确定25(OH)D水平的临界值,最佳诊断阈值为25.5ng/mL,敏感性为37.8%,特异性为93.2%。3.5 25(OH)D水平≤25.5ng/mL为低水平组69(77.5%)例,25(OH)D水平>25.5ng/mL为正常水平组20(22.5%)例,两组间c-SLEDAI、C3、C4、Cr差异性显著(P<0.05),但与血浆HCQ、DHCQ浓度,日照时间、激素剂量等无明显差异性(P>0.05)。4在缓解组中,25(OH)D、C3、C4、ALP与低疾病活动度组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1监测羟氯喹血药浓度有助于判断服药依从性、提高SLE缓解达标率,降低疾病活动度、提高血小板水平。2 SLE中25(OH)D水平低下常见,但HCQ的遮光作用并不会导致血25(OH)D水平下降。3疾病活动的SLE应该检测血维生素D水平,及时补充维生素D有助于降低疾病活动度。

目的 探讨氧化铈(CeO_2)纳米酶对环磷酰胺所致斑秃小鼠模型毛发生长的影响。方法 将雌性C57BL/6J小鼠30只随机分为空白组、模型组和CeO_2纳米酶组(300μg/RP56976采购mL),每组10只。模型组和CeO_2纳米酶组小鼠采用单次腹腔内注射环磷酰胺注射液,构建斑秃小鼠模型。CeO_2纳米酶组小鼠给予300μg/mL Ce02纳米酶外涂于小鼠背部剃毛区,空白组和模型组小鼠均予以等体积的PBS溶液外涂,1次/d,连续27d。实验结束后(第28天)肉眼观察小鼠背部秃发区毛发生长情况并进行评分;HE染色小鼠背部经处理的皮肤组织计算单位视野内毛囊数量;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)及内皮细胞白细胞黏附分子-1 (ELAM-1)水平;水溶性四唑盐-1法(WST-1)检测皮肤组织丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 与空白组相比,模型组小鼠毛发生长及毛发评分显著下降(P<0.05),毛囊数量明显减少(P<0.05),血清ICAM-1及ELAM-1水平升高(P<0.05),皮肤组织MDA含量升高而SOD含量降低(P<0.05);与模型组selleck化学相比,CeO_2纳米酶组毛发生长及毛发评分显著增加(P<0.05),毛囊数量明显增多(P<0.05),血清ICAM-1及ELAM-1水平降低(P<0.05),皮肤组织MDA含量降低而SOD含量升高(P<0.05)。结论 外用CeO_2纳米酶对环磷酰胺所致斑秃小鼠模型具有促进毛发再生的作intramedullary abscess用,为CeO_2纳米酶外用治疗斑秃提供了实验依据。

目的 探讨血清胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）/胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）联合肿瘤标志物对幽门螺杆菌（Hp）阳性早期胃癌的诊断价值。方法 回顾性分析2018年5月–2021年4月本院收治的109例胃癌患者（胃癌组）、115例慢性萎缩性胃炎患者（良性组）、112例低级别上皮内瘤变（低级别组）、109例高级别上皮内瘤变（高级别组）及104例体检筛查健康者（健康组）的临床资料，均行血清PGⅠ、PGⅡ、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原724(CA724)水平检测及Hp感染情况检查。对比各组上述指标，并比较各组Hp阳性者与Hp阴性者上述血清指标的差异。用受试者工作特征（ROC）曲线评估血清PGⅠ/PGⅡ联合肿瘤标志物对Hp阳性早期胃癌的诊断价值。结果 血清PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ水平在健康组、良性组、低级别组、高级别组、胃癌组依次降低（P<Panobinostat采购0.05micromorphic media）；胃癌组、高级别组、低级别组血清PGⅡ、CEA、CA199、CA724水平均高于健康组及良性组（P<0.05）；胃癌组、高级别组、LEE011研究购买低级别组、良性组的Hp阳性率均高于健康组（P<0.01）；健康组、良性组、低级别组、高级别组、胃癌组中的Hp阳性者的血清PGⅠ、PGⅡ、CEA、CA199、CA724水平均高于Hp阴性者（P<0.05）,PGⅠ/PGⅡ均低于Hp阴性者（P<0.05）。血清PGⅠ/PGⅡ、CEA、CA199、CA724联合诊断Hp阳性早期胃癌的特异度与曲线下面积（AUC）均大于各指标单独诊断（P<0.05）；胃癌组Hp阳性患者中PGⅠ/PGⅡ>2.32的占比低于Hp阴性者（P<0.05）,CEA>66.99 ng/mL、CA199>110.35 U/mL、CA724>44.20 U/mL的占比高于Hp阴性者（P<0.05）。结论 联合检测PGⅠ/PGⅡ、CEA、CA199、CA724可提高对Hp阳性早期胃癌的诊断价值。

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)作为革兰氏阳性食源性致病菌,一旦摄入被其污染的食物轻则出现胃肠炎重则导致败血症、脑膜炎等。溶菌酶作为天然的抗菌剂,已广泛应用于食品工业。但单增李斯特菌具有较强的溶菌酶抗性,且机制尚未明确。开展单增李斯特菌溶菌酶抗性机制的研究不仅有助于加深对致病菌抗菌剂抗性的认知理解,同时也为食品级高效抗菌剂的开发及李斯特菌病的临床治疗提供理论基础。因此,本学位论文主要围绕单增李斯特菌的溶菌酶抗性展开研究,利用转座子测序(Tn-seq)及转录组测序(RNA-Seq)等方法在全基因组范围内对单增李斯特菌双组分信号系统调节溶菌酶抗性的机制进行探究并对其调控网络进行分析,且进一步揭示了此类双组分信号系统在单增李斯特菌突破肠道菌群屏障以感染宿主过程中所发挥的作用。主要研究内容及结果如下:(1)通过构建单增李斯特菌高密度转座子突变体库,进行必需基因(essential gene)的挖掘与鉴定。以热敏质粒为载体,构建了单增李斯特菌mariner转座子突变库,经转座子插入测序发现,该突变库含有43,793个不同的突变株,基因组上平均67 bp就有一个转座子插入。在富营养培养基条件(BHI)下,共鉴定出637个单增李斯特菌必需基因,其功能主要集中在蛋白质翻译、物质代谢、细胞壁合成等途径以维持细菌的基础生理需求。(2)通过Tn-seq对单增李斯特菌的溶菌酶抗性相关基因进行鉴定。本研究鉴定出44个溶菌酶抗性相关基因及2个非编码RNA。进一步分析发现双组分信号系统对单增李斯特菌的溶菌酶抗性具有重要作用。借助转录组测序技术,在溶菌酶作用条此网站件下鉴定出142个差异表达基因。分析表明,单增李斯特菌暴露于溶菌酶后,通过增加细菌表面的净正电荷、减少自溶素的分泌及抑制细胞分裂,来减少细胞损伤。(3)通过同源重组及Cre-lox系统构建溶菌酶抗性相关双组分信号系统突变株(?deg U、?vir R、?ces R及?yyc I)并对其特性进行研究。结果表明,deg U、vir R、ces R和yyc I作为单增李斯特菌溶菌酶抗性必需基因,且与细胞壁完整性相关。DegU和Vir R影响溶菌酶对单增李斯特菌的双重活性(细胞壁裂解酶及阳离子抗菌肽活性),Vir R和Yyc I通过减少单增李斯特菌细胞表面净负电荷,影响其溶菌酶抗性。(4)通过不同的小鼠感染模型研究溶菌酶抗性与毒力的关系,并对单增李斯特菌感染途径中影响毒力的因素进行探究。(I)SPF小鼠口服感染作为自然感染途径模型,摄入被污染的食物后,单增李斯特菌进入宿主肠道,穿过肠道屏障,进而传播到肝脏和脾脏。在此模型中,单增李斯特菌溶菌酶抗性相关双组分信号系统突变株毒力均减弱;(II)SPF小鼠腹腔感染模型绕过胃肠道感染阶段,直接进入感染后期。在该模型中?deg U和?vir R突变体的毒力降低,?ces R突变体与野生型表现相似,?yyc I突变体毒力高于野生型,说明经胃肠道感染时存在使溶菌酶抗性相关突变株毒力衰减的因素;(III)抗生素处理(Abx)小鼠口服感染模型与SPF小鼠口服感染模型相比略有不同,前者清除了肠道菌群,即在感染过程中消除了肠道菌群对单增李斯特菌的影响。该模型感染结果与SPF小鼠腹腔感染基本一致,表明肠道菌群对单增李斯特菌突变株的入侵具有抵抗作用。随后,我们在SPF小鼠粪便中发现了可以抑制单Staurosporine研究购买增李斯特菌生长的肠球菌。更为重要的是单增李斯特菌野生型及突变株对这类肠球菌表现出了不同程度的敏感性,并且其敏感程度与其在自然感染途径中毒力减弱程度相似。以上动物模型研究结果表明,单增李斯特菌溶菌酶抗性相关双组分信号系统通过肠道菌群调节毒力。(5)最后,通过转录组测序技术探究双组分信号系统调节溶菌酶抗性及毒力的机制。研究结果表明,Dnon-medicine therapyegU、Vir R、Ces R和Yyc I通过调节不同溶菌酶抗性基因和毒力基因的表达来介导单增李斯特菌溶菌酶抗性及毒力,其中DegU调节pgd A、oat A、pbp4、pbp X等;Vir R调节dlt ABCD、mpr F、anr AB等;Ces R调节orf2420、ces K、lmo2459、lmo2522等;Yyc I调节spo VG、inl A、inl B、inl H、act A等。且DegU、Vir R、Ces R和Yyc I均可以调节鞭毛合成相关基因,4个溶菌酶敏感突变株的生物膜形成能力皆下降。

为探究人为噪音对瘤背石磺(Onchidium reevesii)氧化应激和免疫应答的影响，将瘤背石磺分别暴露在1 000 Hz的人为噪音中1、3、6、12和24 h后，分别测定瘤背石磺血清中超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等氧化应激指标和谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性和碱性磷酸酶(AKP)等免疫指标，同时测定了肝胰腺中热休克蛋白27(Hsp27)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、髓样分化因子(MyD88)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等基因的mRNA表达量变化。结果显示，相对于未暴露组，SOD和CAT活性在噪音暴露1 h后显著升高(P<0.05),AST和ALT活性在噪音暴露3 h后显著升高(P<0.05),AKP活性在噪音暴露1 h后显著升高(P<0.05);Hsp27和GSH-Px基因的hereditary breastmRNA表达量在噪音暴露1 h后显著上调(P<0.05),GST基因的mRNA表达量在噪selleck合成音暴露1 h后显著下调(P<0.05),MyD88和TNF-α基因的mRNA表达量在噪音暴露1 h后显著上调。研究表明，人为噪音作为一种胁迫因子，使瘤背石磺机体产生了氧化应激和免疫应答，研究结果可为表征潮间带动物应selleck对人为噪声胁迫提供参考依据。

目的:在高糖状态下,通过给予外源性醛固酮(Aldosterone,ALD)对人肾小球足细胞进行干预Drug immunogenicity,观察醛固酮对人肾小球足细胞血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达的影响,同时观察醛固酮对人肾小球足细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取人肾小球足细胞,培养分化成熟后随机分为正常糖(培养液葡萄糖浓度为5.6mmol/L,NG)组、高糖(培养液葡萄糖浓度为30mmol/L,HG)组、高糖+不同浓度醛固酮组(0mol/L ALD、10~(-11)molNirmatrelvir体内/L ALD、10~(-9)mol/L ALD、10~(-7)mol/L ALD),在培养的第24h应用RT-PCR及Western-blot技术检测足细胞VEGF m RNA、VEGF蛋白质表达情况,通过CCK-8试剂(Cell Counting Kit-8,细胞计数试剂)检测在第1、2、3、4、5天时足细胞的增殖能力变化,应用流式细胞术检测足细胞的凋亡情况。结果:1.相对NG组,HG组中VEGF m RNA及蛋白质表达显著升高(P<0.001)。2.(1)高糖情况下,与0mol/L醛固酮相比,伴随醛固酮浓度梯度的增加,VEGF m RNA的表达明显增加(P<0.001)。(2)高糖情况下,与0mol/L醛固酮相比,10~(-9)mol/L醛固酮浓度下,VEGF m RNA表达明显增加(P<0.05);与10~(-11)mol/L醛固酮相比,10~(-9)mol/L醛固酮浓度下,VEGF蛋白质表达明显增加(P<0.05);与10~(-9)mol/L醛固酮相比,10~(-7)mol/L醛固酮浓度下,VEGF蛋白质表达明显增加(P<0.01)。3.相对NG组,HG组中足细胞增殖能力明显减弱(P<0.01),凋亡增多(P<0.0001)。4.(1)在高糖情况下,伴随醛固酮浓度梯度的增加,足细胞增殖能力被抑制程度逐渐增加(P<0.01)。(2)高糖情况下,与0mol/L醛固酮相比,伴随醛固酮浓度梯度的增加,人肾小球足细胞凋亡显著增加(P<0.0001)。结论:1.高糖可以上调人肾小球足细胞血管内皮生长因子的表达。2.高糖状态下,醛固酮呈剂量依赖性上调人肾小球足细胞血管内皮生长因子的表达。3.高糖使人肾小球足细胞增殖能力减弱,凋亡增加。4此网站.在高糖状态下,醛固酮呈剂量依赖性减弱人肾小球足细胞增殖能力,增加凋亡。

肌萎缩性侧索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一类非常致命的神经退行性疾病,其主要特征是上下运动神经元功能异常和变性,从而导致肌肉萎缩、瘫痪,并在初次确诊的3～5年因呼吸衰竭死亡。其中TAR DNA结合蛋白43(TAR DNA binding protein 43,TDP43)以及超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)突变为主要致病因素。突变体SOD1的表达导致蛋白酶体活性降低并抑制自噬,从而导致突变、损伤和错误折叠的蛋白积累,并导致线粒体和内质网应激等。TDP43过表达或突变会导致其错误定位诱发毒性,形成胞质内TDP43包涵体以及核内正常TDP43缺失,并破坏线粒体功能,造成神经元和轴突损伤。目前,尚未发现能够治愈或者逆转ALS疾病的治疗方法,并且ALS的发病机制仍不清晰,因此,探究ALS的发病机制十分重要。Bax抑制蛋白1(Bax Inhibitor-1,BI1)是内质网跨膜蛋白可抑制Bax调节凋亡。自噬与外泌体均可以参与错误折叠蛋白的清除,从而发挥解毒和神经保护功能。另外,线粒体内质网结构偶联(mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane,Mluciferase immunoprecipitation systemsAM)参与并调节自噬的形成。据研究报道BI1具有一定的神经保护作用,但具体机制尚不清晰。因此,探究BI1参与自噬的启动并促进病理性蛋白降解的机制进而抑制细胞凋亡十分重要,并为治疗ALS等神经退行性疾病提供了一条潜在的治疗途径本研究主要探究BI1对SOD1~(G93A)诱导的细胞凋亡以及线粒体异常的影响,以及相关机制,研究内容包括:(1)建立稳定过表达B-NSC-34细胞系,利用Western-Blot、TUNEL、CCK-8以及透射电镜观察细胞核变化来探究BI1对SOD1~(G93A)诱导细胞凋亡的影响;(2)通过JC-1、轴突染色、透射电镜观察线粒体以及MAM变化检验进一步探究BI1对SOD1~(G93A)诱导的线粒体异常的影响;(3)利用透射电镜、活性氧检测(Reactive Oxygen Species,ROS)、Western-Blot、免疫荧光互作探究在这一过程中BI1与自噬的相关机制。实验结果显示:(1)BI1过表达后,细胞凋亡程度减弱等,另外BI1能够抑制SOD1~(G93A)诱导的TDP43(43 KD)从细胞核转移至细胞质,并且降低TDP43在线粒体中的水平,抑制细胞色素C(Cytochrome C,Cyto-C)的释放以及BAX转移至线粒体。(2)JC-1、Tubulin和透射电镜结果显示BI1能够抑制SOD1~(G93A)诱导的线粒体膜电位异常下降和线粒体损伤,缓解MAM的间隙增大以及保护神经轴突的完整性。(3)Western-Blot发现BI1可上调LC3B、Beclin1的表达量,TDP43(43 KD)的降解也有所缓解,并能显著抑制ROS的生成;BI1过表Smoothened Agonist化学结构达后,相比于SOD1~(G93A)组,BI1和TDP43相互作用明显增强,Bax和TDP43的作用减弱,同时BCL-2和Bax的结合显著增强,BCL-2和Beclin1的结合明显减弱,MFN2、Beclin1和TDP43相互作用稍有增强;并发现在外泌体中含有BI1蛋白,同时BI1过表达后外泌体中的病理性TDP43的水平下降。在B-NSC-34细胞中添加外泌体抑制剂后,Beclin1和LC3B的水平显著上调,并且GRP75和MFN2的表达也增加,TDP43(35 KD)降低。综上所述,本selleckchem RAD001文所得结论如下:(1)BI1抑制SOD1~(G93A)诱导的NSC-34中Cyto-C的释放、BAX的转运及TDP43的核逆转、线粒体异常以及细胞凋亡。(2)BI1能够激活自噬并降低SOD1~(G93A)诱导的活性氧水平,并且能够通过Bax和BCL-2以及TDP43和Beclin1的竞争性结合破坏Beclin1与BCL-2的相互作用增强自噬从而抑制凋亡。(3)同时BI1与TDP43相互作用间接降低TDP43与Bax的相互作用从而抑制细胞凋亡,并且抑制TDP43(43 KD)降解以及病理性TDP43在外泌体中的传播。总之,BI1可激活自噬从而缓解TDP43的降解、抑制线粒体异常、细胞凋亡从而维持细胞稳态,以及BI1对病理性TDP43在外泌体中的传播抑制缓解ALS进展。以上研究为探索BI1在自噬与外泌体治疗ALS等相关神经退行性疾病的作用提供了有力依据,为临床应用与开发提供了新途径。