SRC信号通路

研究背景结直肠癌(CRC)是一种侵袭性原发性肠道恶性肿瘤,在全球各类癌症中发病率居第三位,死亡率居第二位。对于50%的KRAS/NRAS/BRAF野生型、5%-10%的BRAF V600E突变以及5%微卫星不稳定性,错配修复缺陷的转移性结直肠癌(mCRC)患者可受益于EGFR、BRAF靶向治疗或免疫疗法。然而,对于35%至40%的KRAS或NRAS突变的mCRC患者,目前还缺乏有效的治疗方法。因此,靶向KRAS治疗可能Ceralasertib细胞培养是KRAS突变型mCRC的一种有潜力的方法。近几年KRASG12C抑制剂(如:AMG510)的成功研发打开了靶向KRAS蛋白的新纪元。KRASG12D抑制剂(如:MRTX1133)的研发也在不断取得新的进展。虽然MRTX1133也在KRASG12D突变型胰腺癌、结直肠癌中展现了其抑制增值的作用,但我们发现在KRASG12D突变型结直肠癌中MRTX1133的应用会引发适应性改变进而出现药物耐受。因此,这种适应性改变的分子机制以及其阻断策略值得深入探讨。研究方法1.应用细胞克隆形成实验观察药物干预及洗脱后细胞的生长变化,综合免疫印迹实验以及转录组数据挖掘分析分子信号通路的变化。2.应用CRISPR文库以及药物库筛选寻找阻断适应性改变的策略。3.应用免疫印迹实验、免疫组织化更多学、siRNA实验以及转录组数据分析阻断适应性改变的分子机制。4.在细胞、类器官以及细胞系衍生异种移植肿瘤模型中验证策略及其作用机制。研究结果1.细胞克隆形成实验发现MRTX1133洗脱后细胞增值水平恢复;综合免疫印迹实验发现磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)随着时间延长出现反弹。2.CRISPR激酶文库筛选得出EGFR的敲减具有协同致死作用,同时药物筛选发现EGFR阻断与MRTX1133有协同致死作用。3.免疫印迹实验和免疫组织化学提示EGFR激活;转录组数据发现ERBB受体反馈抑制因子1(ERRFI1)下调。4.细胞、类器官以及肿瘤细胞荷瘤模型中EGFR抑制剂与MRTX1133均具有协同作用。研究结论MRTX1133的干预导致KRASG12D突变的CRC细胞可逆性生长停滞,同时伴随RAS效应信号的部分再激活。从机制上讲,MRTX1133治疗通过下调了 ERBB受体反馈抑制剂1(ERRFI1)的表达,从而导致EGFR反social medicine馈激活。野生型RAS进一步介导激活EGFR下游的信号传导,导致RAS效应器反弹并降低MRTX1133的疗效。因此,EGFR抑制剂与MRTX1133的联合使用可以更有效的抑制KRASG12D突变型CRC类器官和细胞系衍生异种移植肿瘤。总之,我们的研究揭示了 EGFR的反馈激活是限制KRASG12D抑制剂疗效的一个重要分子事件,并为KRASG12D突变型CRC患者建立了一种由KRASG12D和EGFR抑制剂组成的潜在联合疗法。

目的:研究中性粒细胞在狼疮性肾炎(Lupus Nephritis,LN)发病前的不同阶段对浆细胞调控的分子机制;中性粒细胞通过分泌IL-6调控B细胞铁死亡作为临床治疗狼疮性肾炎靶细胞、靶蛋白的潜在可能。方法:SPF级的健康C57BL/6雌性小鼠,体重18～22g,随机分为7个组,包括空白对照组和六个时间段的造模组:1天、3天、7天、14天、30天、180天,经其腹腔一次性注射Pristane(500μL/只)诱导狼疮小鼠模型,空白对照组给予等体积的PBS。(1)HE、Masson染色观察小鼠脾和肾脏的病理改变。(2)免疫荧光观察中性粒细胞与浆细胞的共存关系。(3)流式细胞术检测不同时间段的模型小鼠脾和肾脏中的中性粒细胞和浆细胞的表达Wnt-C59水平和动态分布特征。(4)单细胞测序结合流式细胞术鉴定中性粒细胞亚群及IL-6的主要来源,用scRNA-seq分析中性粒细胞与B细胞之间的信息交流。(5)通过中性粒细胞和B细胞共培养实验,用scRNA-seq分析结合流式细胞术和免疫荧光术研究分别抑制IL-6和SLC7A11后狼疮肾B细胞发生铁死亡的水平。结果:(1)HE染色可见模型组小鼠脾脏中脾窦结构破坏,肾脏皮质区的肾小球结构发生改变数量减少,系膜区不同程度的系膜细胞增生及基质增多。Masson染色可见肾小球肾小管发生纤维化。(2)免疫荧光结果显示在模型组小鼠的肾脏中性粒细胞与浆细胞有共存关系,注射Pristane 30天模型组脾中性粒细胞荧光强度明显高于空白对照组,注射Pristane 30天模型组肾的中性粒细胞的荧光强度明显高于空白对照组。(3)流式结果显示注射Pristane 30天模型组脾中性粒细胞表达最多,注射Pristane 14天模型组肾的中性粒细胞表达最多,变化趋势与免疫荧光相同。(4)单细胞测序分析结果显示狼疮肾中性粒细胞可分为三个亚群,hip infection其中Ly6G中性粒细胞亚群是分泌IL-6的主要亚群。来源于中性粒细胞的IL-6可以调节狼疮肾中性粒细胞和B细胞之间的相互作用。(5)在抑制IL-6或者用柳氮磺胺吡啶处理共培养的B细胞和中性粒细胞后,狼疮小鼠肾脏的B细胞中Fe~(2+)信号增强,细胞脂质过氧化程度增加,细胞内GSSG/GSH的比值升高,细胞内GSH浓度降低,B细胞的增殖/有丝分裂显著降低。结论:(1)中性粒细胞和B细胞/PD-0332991试剂浆细胞在狼疮模型组脾和肾的表达存在动态变化。(2)狼疮肾Ly6G中性粒细胞亚群分泌的IL-6通过SLC7A11诱导狼疮肾B细胞发生铁死亡抵抗。

双酚基丙烷又称双酚A(Bisphenol A,BPA),是一种重要的工业化合物,常用于日常塑料用品的制造领域。已有证据表明,BPA作为一种环境内分泌干扰物,可通过消化道、呼吸道、皮肤等途径进入机体,与细胞表面受体结合进而影响组织器官,引起哺乳动物的生殖内分泌和代谢功能紊乱。肝脏作为哺乳动物重要的代谢器官,参与调控机体的糖脂代谢和胆汁分泌。有研究发现,长期摄入BPA会使动物肝脏发生脂肪变性,破坏哺乳动物肝脏的糖脂代谢稳态,并最终诱发非酒精性脂肪肝的出现。然而,关于BPA暴露损害肝脏糖脂代谢的具体作用机制目前仍不清楚。生物钟作为一种保守的生命活动调控系统,参与调节多种糖脂代谢关键基因的节律性表达,从而在维持哺乳动物糖脂代谢稳态过程中发挥重要作用。本课题组前期研究发现,B更多PA通过扰乱生物钟基因Nr1d1的表达进而抑制小鼠睾酮合成,但BPA是否影响小鼠的肝脏生物钟和糖脂代谢功能目前仍不清楚,亟需进一步的探究。本研究首先利用野生型雄性小鼠和小鼠肝实质细胞(AML12细胞)系建立了BPA暴露模型,然后使用流式细胞术、q PCR、BODIPY荧光染色、Western blot(WB)、Kronos AB-2550细胞实时生物荧光测定系统、试剂盒定量检测等多种实验技术,系统探究了BPA对小鼠肝脏生物钟系统和糖脂代谢功能的影响,具体结果如下:1.CCK8和流式细胞术检测结果表明,对AML12细胞活力和凋亡无显著影响的最大BPA处理浓度为100μM,后续使用该浓度处理AML12细胞。q PCR检测结果表明,BPA处理显著改变了生物钟基因(Bmal1、Nr1d1、Per2、Dbp)和糖脂代谢相关基因(Srebp1c、Fasn、Hmgcr、Cd36、Lpin1、Pparα、Pparγ、Elovl6、Glut2)m RNA在非同步化AML12细胞的表达;BODIPY荧光染色结果表明,BPA处理对AML12细胞的中性脂肪含量无显著影响Medial pivot;WB结果表明,BPA处理AML12细胞24 h后,显著降低了生物钟蛋白BMAL1的表达;细胞实时生物荧光测定系统结果表明,BPA处理显著降低了Per2::Luc小鼠肝脏组织块Per2::Luc的荧光素酶活性;将AML12细胞进行同步化处理后,对照组和BPA处理组的生物钟基因(Bmal1、Nr1d1)m RNA表达量均具有显著的节律性变化,BPA处理显著提高了生物钟基因Bmal1的表达量。同时,BPA显著抑制了Hmgcr m RNA在AML12细胞的表达,促进了Pparαm RNA在AML12细胞的表达。2.为深入探究BPA对小鼠生物钟系统与糖脂代谢功能的影响,通过查阅参考文献进一步确定了使用50μg/kg/day BPA、持续灌胃小鼠6周的造Proteases抑制剂模方法。灌胃过程中,记录小鼠体重(每隔一天)、采食量和饮水量(每隔两天)的变化。灌胃6周后,使用小鼠转轮节律监测系统检测小鼠活动节律。小鼠转轮节律监测系统、采食量及饮水量的结果显示,与对照组相比,BPA处理组小鼠内源性周期显著延长,饮水量和采食量均显著升高;全天血糖检测、葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验结果表明,BPA处理组与对照组相比全天血糖浓度显著下降,BPA处理组葡萄糖的代谢速率和胰岛素敏感性均显著低于对照组,BPA处理组的曲线下面积在葡萄糖和胰岛素耐量实验中均显著高于对照组;试剂盒检测结果显示,肝糖原含量、血清及肝脏甘油三酯含量在对照组和BPA处理组中均无显著差异;q PCR和WB结果表明,对照组和BPA处理组小鼠肝脏生物钟基因(Bmal1、Nr1d1、Dbp和Per2)m RNA表达量均具有昼夜节律性表达,但BPA处理组生物钟基因m RNA表达的振幅和相位均发生了改变;BPA降低了小鼠肝脏生物钟基因Bmal1和脂代谢相关基因Srebp-1c、Fasn、Hmgcr及Elovl6 m RNA的表达,却促进了生物钟基因Dbp、Nr1d1和糖脂代谢基因G6pc、Cyp7a1及Cd36 m RNA的表达。此外,BPA处理显著降低了BMAL1和DBP蛋白的表达量,但显著升高了NR1D1、FASN和SREBP1C蛋白的表达。综上所述,BPA处理显著改变了生物钟基因和部分糖脂代谢相关基因在AML12细胞的表达,并从在体水平上导致小鼠内源性周期显著延长,引起小鼠血糖降低与胰岛素敏感性下降,破坏了血糖稳态。同时,BPA处理扰乱了小鼠肝脏生物钟基因(Bmal1、Nr1d1和Dbp)和糖脂代谢相关基因(Srebp1c、Cd36、Elovl6、G6pc和Glut2)的表达。本研究为深入解析BPA影响肝脏生物钟与糖脂代谢的作用机制提供了前期基础,为从时间毒理学的角度探究BPA的肝脏毒性提供一定的理论支撑。

<正>1病历摘要患者女，9岁，藏族。因牙龈广泛增生2周就诊。患者于2周前无明显诱因出现牙龈增生，尤其以上前牙牙龈为增生为重，伴双侧颌下轻度肿胀，无其他明显不适症状，未作任何检查及处理。病程中精神食欲尚可，二便正常，无明显发烧、疲劳乏力、鼻出血、牙龈出血等不适症状。患儿既往体健，无特殊近期家庭内装修史及可疑因素selleckchem Compound 3接触史，无特殊家族遗传史。查体：T:36.7℃P:97次/分R:19次PTGS Predictive Toxicogenomics Space/分BP98/60mm Hg,一般情况平稳，神志清，精神尚可，发育正常，面色及粘膜色泽正常，全身皮肤粘膜未见明显出血点、瘀斑，步入诊室。双侧颌下及胸锁乳突肌前后缘可扪及多发淋巴结肿大，触压痛（+）。口腔检查见全口牙龈增生，肥大，以上前牙为甚，增生高度接近咬合面，Staurosporine NMR外形不整齐，色浅红色，质软，触诊无明显出血。图1所示：

目的 分析老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者合并肺栓塞现状及影响因素。方法 选取2021年12月至2022年12月本院收治的老年COPD患者100例为研究对象，按照是否合并肺栓塞分为对照组60例(未合并肺栓塞)和实验组40例(合并肺栓塞)。比较两组患者临床特点，分析影响因素。结果 两组患者性别、年龄、临床胸痛表现、临床咯血表现、临床咳嗽表现、临床呼吸困难表现比较差异均无统计学意义(均P>0.0Medical diagnoses5),两组患者静脉血栓史、卧床时间≥7 d、长期服用抗凝药物以及抗血小板药物、临床晕厥表现、临床下肢血栓形成表现、动脉血二氧化碳分压、D-二聚体、主肺动脉/升主动脉>1、合并恶性肿瘤、肥胖方面比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素logistic回归模型分析结果显示：卧床时间≥7 d、静脉血栓史、D-二聚体、主肺动脉/升主动脉>1为老年COPD患者合并肺栓塞的危险因素(均P<0.05),长期服用抗凝药物以及抗血小板药物、动脉血二氧化碳分压为老年COPD患者合并肺栓塞的保护因素(均P<0.05)。结论 卧床时间≥7 d、静脉血栓史、长期服用抗凝药物以NVP-TNKS656及抗血小板药物、D-Dinaciclib二聚体、动脉血二氧化碳分压、主肺动脉/升主动脉>1等是老年COPD患者合并肺栓塞的主要影响因素。

目的:探讨桂枝汤加减治疗在产后荨麻疹患者中的应用。方法:依据随机数字表法分配原则将60例产后荨麻疹患者分为对照组(30例)和观察组(30例)。对照组给予炉甘石洗剂外用联合氯雷他定片口服治疗，观察组给予炉甘石洗剂外用联合桂枝汤加减治疗。两组均治疗28 d,随访3个月。对比两组治疗后的临床疗效，治疗前后的临床症状积分、免疫功能、血清组胺、白介素-4(IL-4)、购买GSK2118436白介素-2(IL-selleckchem Emricasan2)水平、生活质量评分，治疗期间安全性。结果:观察组治疗后总cholesterol biosynthesis有效率96.67%高于对照组的76.67%(P<0.05);治疗后，两组患者临床症状各项评分、血清组胺、免疫球蛋白E(IgE)、IL-4、IL-2水平与治疗前比较均降低，其中观察组低于对照组(P<0.05);血清补体3(C3)、补体4(C4)、免疫球蛋白A(IgA)水平、生活质量各项评分则升高，观察组高于对照组(P<0.05)。结论:产后荨麻疹患者应用桂枝汤加减治疗具有较显著的临床治疗效果，可提高生活质量，可改善患者临床症状以及免疫功能，还对机体的炎症因子水平有明显抑制作用，降低其复发率。

目的:鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(sinonasal inverted papillomas,SNIP)是鼻腔鼻窦最常见的良性肿瘤之一,具有一定的复发风险和恶变潜力,手术彻底切除肿瘤是目前SNIP首选的治疗方式。早期识别并诊断肿瘤对SNIP的诊疗至关重要,从而为患者提供及早、合理的手术干预,避免因手术方案选择不当造成的肿瘤残留,防止手术延误造成的肿瘤恶变。SNIP最cysteine biosynthesis需要鉴别的鼻腔鼻窦疾病是单侧慢性鼻窦炎伴/不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitisMEK抑制剂 with/without nasal polyps,CRSw/s NP),由于两者临床表现无特异性、鼻窦CT表现相似,导致两者在临床诊断中,特别是门诊初诊中仍存在一定困难。此外,在目前的临床实践中,尚缺乏用于SNIP诊断的可靠血清肿瘤标志物,有待进一步探索。本研究旨在探究CT表现和临床特征对SNIP的诊断价值,并开发用于临床实践的列线图预测模型,以期为今后临床诊断提供指导。本研究还将探讨血清鳞状细胞癌相关抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCCA)和细胞角蛋白19片段(cytokeratin fragment antigen 21-1,CYFRA 21-1)对SNIP的诊断价值,以期发现可用于SNIP诊疗的新型血清肿瘤标志物。方法:1.回顾性收集2016年11月至2021年12月期间就诊于青岛大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科的267例SNIP患者和273例单侧CRSw/s NP患者的临床资料。记录患者的人口学和临床特征(包括性别、年龄、症状、鼻窦手术史,烟酒嗜好)和CT特征(病变边缘分叶状/波浪状,气泡征,局灶性骨质增生,弥漫性骨质增生,局灶性骨质侵蚀,病变CT值)。随机将其中200例SNIP患者和200例CRS患者纳入训练集,剩余67例SNIP患者和73例CRS患者纳入验证集。在训练集中,使用单因素和多因素Logistic回归分析筛选SNIP的独立预测因子,并构建列线图预测模型。使用校准曲线和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线在训练集和验证集中分别验证该模型的预测能力。2.回顾性收集2018年10月至2022年11月期间就诊于青岛大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科的82例SNIP的患者、47例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌(sinonasal squamous cell carcinoma,SNSCC)患者、72例单侧CRSw/s NP的患者的临床资料。记录患者的人口学特征(性别、年龄)、吸烟史、饮酒史、术前血清肿瘤标志物SCCA和CYFRA21-1水平。分析上述三组人群术前血清肿瘤标志物水平差异。将SNIP患者进一步分为SNIP伴恶变组和不伴恶变组,分析SNIP伴恶变组与不伴恶变组、SNIP伴恶变组与SNSCC组之间术前血清肿瘤标志物水平差异。使用Logistic回归进一步筛选可用于诊断SNIP的血清肿瘤标志物,使用ROC曲线确定诊断截断值并判断其诊断能力。结果:1.在训练集中,通过单因素和多因素Logistic回归分析,结果显示年龄(OR=1.066,95%CI:1.036-1.097,P<0.001)、头面部疼痛(OR=0.391,95%CI:0.176-0.871,P=0.022)、鼻窦手术史(OR=5.741,95%CI:2.208-14.928,P<0.001)、病变边缘分叶状/波浪状(OR=14.430,95%CI:6.042-34.460,P<0.001)、气泡征(OR=9.841,95%CI:4.341-22.310,P<0.001)、局灶性骨质增生(OR=21.453,95%CI:8.170-56.329,P<0.001)、局灶性骨质侵蚀(OR=3.936,95%CI:1.434-10.802,P=0.008)、病变CT值(OR=1.050,95%CI:1.014-1.087,P=0.006)与SNIP显著相关,因此确定上述8个变量为SNIP的独立预测因子。根据这8个独立预测因子构建了列线图预测模型。校准曲线显示该预测模型在训练集和验证集中均有良好的拟合度。ROC曲线显示该预测模型在训练集和验证集的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.960(95%CI:0.942-0.978)和0.951(95%CI:0.929-0.971)。2.SNIP患者的血清SCCA和CYFRA 21-1水平高于CRS患者,Logistic回归分析显示血清SCCA和CYFRA 21-1是诊断SNIP的危险因素(SCCA OR=4.351,95%CI:2.094-9.042,P<0.001;CYFRA 21-1 OR=2.841,95%CI:1.548-5.214,P=0.001),ROC曲线显示,SCCA的AUC值为0.889(95%CI:0.827-0.952,P<0.001),预测截断值为1.59ng/m L,CYFRA 21-1的AUC值为0.745(95%CI:0.650-0.840,P<0.001),预测截断值为2.06ng/m L。SNIP患者的血清SCCA水平高于SNSCC患者,Logistic回归分析显示血清SCCA是诊断SNIP的危险因素(OR=1.244,95%CI:1.044-1.481,P=0.014),ROC曲线显示SCCA的AUC值为0.789(95%CI:0.692-0.886,P<0.001),预测截断值为1.85ng/m L。SNIP伴恶变患者的血清CYFRA 21-1水平高于SNIP不伴恶变患者,Logistic回归分析显示血清CYFRA 21-1是诊断SNIP伴恶变的危险因素(OR=2.623,95%CI:1.487-4.627,P=0.001),ROC曲线显示CYFRA 21-1的AUC值为0.845(95%CI:0.716-0.974,P<0.001),预测截断值为4.56ng/m L。SNIP伴恶变患者的血清SCCA和CYFRA 21-1水平高于SNSCC患者,Logistic回归分析显示血清CYFRA 21-1是诊断SNIP伴恶变的危险因素(OR=1.466,95%CI:1.058-2.030,P=0.021),ROC曲线显示CYFRA 21-1的AUC值为0.801(95%CI:0.656-0.945,P=0.002),预测截断值为3.55ng/m L。结论:1.SNIP患者在年龄、头面部疼痛、鼻窦手术史、病变边缘分叶状/波浪状、气泡征、局灶性骨质增生、局灶性骨质侵蚀、病变CT值方面与CRS患者存在显著差异,可作为SNIP的独立预Naporafenib分子量测因子。我们使用这8个独立预测因子构建了列线图预测模型,并对该预测模型进行了验证,证实了其有很强的预测能力。因此,基于患者临床和CT特征建立的列线图预测模型对SNIP有较高的诊断价值和临床应用前景。2.血清SCCA可用于诊断SNIP与CRS/SNSCC患者,诊断截断值分别为1.59ng/m L和1.85ng/m L。CYFRA 21-1可用于诊断SNIP与CRS患者,诊断截断值为2.06 ng/m L。CYFRA 21-1可用于诊断SNIP是否伴恶变,诊断截断值为4.56ng/m L。CYFRA 21-1可用于诊断SNIP伴恶变与SNSCC患者,诊断截断值为3.55ng/m L。这一研究结果揭示了血清SCCA可作为诊断SNIP的血清肿瘤标志物,CYFRA 21-1可作为诊断SNIP伴恶变的血清肿瘤标志物,为SNIP的诊断提供了新的潜在工具。

结直肠癌是全球发病率排名第三、致死率排名第四的恶性肿瘤。结直肠癌约占全世界每年诊断的所有癌症及癌症相关死亡的10%,对人类的健康造成严重的威胁。因此阐明结直肠癌恶性进展的机制以及开发新的治疗策略对于改善结直肠癌患者预后至关重要。60%的结直肠癌患者携带TP53基因突变,是导致预后不良的重要原因。TP53基因突变不仅使P53蛋白丧失转录激活抑癌基因的能力,甚至赋予P53蛋白新的促癌功能。TP53基因突变能够促进肿瘤糖酵解,也是维持肿瘤干性特征和导致化疗耐药的关键因素。然而对突变型P53蛋白的靶向治疗一直被认为是最难的医学问题之一,因此探究TP53突变型结直肠癌维持高水平糖酵解及化疗耐药的具体机制,对寻找新的治疗靶点和改善TP53突变型结直肠癌患者预后具有重要意义。Ubiquitin C-terminal hydrolases 3(UCHL3)属于泛素C端水解酶家族成员,通过从底物蛋白上切割多聚泛素链进而发挥其去泛素化酶活性。UCHL3可以稳定许多细胞生物学过程中的关键蛋白,在调控细胞分裂、DNA损伤修复以及肿瘤发生进展等方面具有重要的作用,然而关于UCHL3对结直肠癌糖酵解、干性特征维持及5-FU化疗耐药的影响目前还尚未见报道。因此本研究系统地探究了UCHL3在TP53突变结直肠癌高水平糖酵解、干性特征维持及5-FU化疗耐药中的作用及机制。第一部分鉴定参与介导结直肠癌TP53基因突变导致的高水平糖酵解的去泛素化酶目的:筛选出可能促进结直肠癌糖酵解的去泛素化酶家族成员,检测该去泛素化酶在野生型TP53和突变型TP53结直肠癌组织中的表达水平,并探究该去泛素化酶是否参与介导了TP53基因突变导致的高水平糖酵解。方法:1.通过去泛素化酶质粒库筛选联合生物信息学分析鉴定出可能促进结直肠癌糖酵解的去泛素化酶。2.过表达或者敲降/除野生型及突变型P53蛋白,通过Western blot检测筛选出的去泛素化酶表达水平。3.使用含有80对结直肠癌组织和癌旁组织的组织芯片,通过免疫组化检测该去泛素化酶在野生型TP53和突变型TP53结直肠癌组织中的表达水平。4.收集了43例新鲜结直肠癌和配对癌旁组织,抽提组织蛋白后Western blot检测该去泛素化酶表达水平。5.通过Seahorse XF系统检测了野生型和突变型P53蛋白以及该去泛素化酶对结直肠癌细胞糖酵解速率的影响。结果:1.去泛素化酶质粒库筛选联合生信分析显示USP44和UCHL3可能促进结直肠癌的糖酵解。2.TCGA数据库AG-221转录组数据显示,与野生型TP53肿瘤组织相比,突变型TP53肿瘤组织中UCHL3 mRNA表达水平明显升高,而USP44 mRNA表达水平无明显差异。3.Western blot结果显示:野生型P53蛋白能够抑制UCHL3的表达,而突变型P53蛋白能够促进UCHL3的表达。然而野生型和突变型P53蛋白对USP44的表达水平无显著影响。4.免疫组化结果显示:组织芯片中,突变型TP53结直肠癌组织中UCHL3蛋白表达水平明显高于野生型TP53结直肠癌组织。结直肠癌组织中UCHL3蛋白表达水平明显高于癌旁组织。Ⅳ期结直肠癌组织中UCHL3表达水平明显高于Ⅰ-Ⅲ期癌组织。结直肠癌组织中UCHL3高表达与患者不良预后显著相关。5.新鲜肿瘤组织抽提组织蛋白行Western blot检测结果显示:结直肠癌组织中UCHL3蛋白表达水平明显高于癌旁组织。6.在TP53野生型的HCT116细胞和TP53突变型的SW480细胞中敲降UCHL3Hepatocyte growth后,基础性糖酵解速率和补偿性糖酵解速率均出现明显降低。7.在HCT116(P53-/-)细胞中过表达野生型P53蛋白能够显著降低其基础性糖酵解速率及补偿性糖酵解速率,而过表达UCHL3能够部分回复野生型P53蛋白对糖酵解的抑制作用。在HCT116(P53-/-)细胞中过表达突变型P53蛋白能够显著升高其基础性糖酵解速率及补偿性糖酵解速率,而敲降UCHL3能够部分逆转突变型P53蛋白对糖酵解的促进作用。结论:1.去泛素化酶家族成员USP44和UCHL3可能促进结直肠癌的糖酵解。2.TP53突变型结直肠癌组织中UCHL3表达水平明显高于TP53野生型结直肠癌组织。USP44表达水平和TP53基因突变与否无关。3.UCHL3参与介导了结直肠癌TP53基因突变导致的高水平糖酵解过程。第二部分探究UCHL3是否参与介导了结直肠癌TP53基因突变导致的干性特征及5-FU化疗耐药目的:研究UCHL3对结直肠癌干性特征及5-FU化疗耐药的影响,以及UCHL3是否参与介导了TP53基因突变导致的5-FU化疗耐药。方法:1.使用TCGA数据库通过生信分析比较结直肠癌组织中UCHL3表达水平与肿瘤干性评分的关系。2.使用TP53突变型的SW480细胞通过成球培养富集肿瘤干细胞,通过Western blot比较了肿瘤干细胞和亲本细胞中UCHL3表达水平。3.通过慢病毒转染于TP53野生型的HCT116细胞中稳定过表达UCHL3,于TP53突变型的SW480细胞中稳定敲降UCHL3,并通过Western blot验证了UCHL3过表达和敲降的效率。4.使用成球培养实验检测UCHL3对TP53野生型的HCT116细胞和TP53突变型的SW480细胞的成球能力和自我更新能力的影响。5.通过流式细胞术及Western blot检测了UCHL3对TP53野生型的HCT116细胞和TP53突变型的SW480细胞的干性标记物表达水平的影响。6.使用TP53突变型的SW480细胞通过成球培养富集肿瘤干细胞,通过梯度稀释法配合基质胶注射NOD/SCID小鼠皮下进而检测UCHL3对TP53突变型的肿瘤干细胞的体内成瘤能力的影响。7.使用TCGA数据库通过生信分析分析了结直肠癌组织中UCHL3表达水平与肿瘤5-FU IC50评分和DNA修复通路的相关性。8.使用5-FU长期处理SW480细胞获得了5-FU耐药细胞株,通过Western blot检测了5-FU耐药株和亲本细胞中UCHL3表达水平。9.使用递增浓度梯度的5-FU分别处理TP53野生型的HCT1116细胞和TP53突变型的SW480细胞48小时,使用Western blot检测P53和UCHL3表达水平改变。10.使用CCK8法检测了UCHL3对TP53野生型的HCT116细胞和TP53突变型的SW480细胞的5-FU IC50值影响。11.使用流式细胞术检测了UCHL3对5-FU处理48小时后的TP53野生型HCT116细胞和TP53突变型SW480细胞的凋亡水平的影响。结果:1.在TCGA数据库中,UCHL3高表达的结直肠癌组织具有更高的肿瘤干性评分。2.肿瘤干细胞中UCHL3表达水平明显高于亲本细胞。3.成球实验结果显示:过表达UCHL3后,TP53野生型的HCT116细胞的成球能力和自我更新能力明显增强;敲降UCHL3后,TP53突变型的SW480细胞的成球能力和自我更新能力明显减弱。4.流式细胞术及Western blot检测显示:过表达UCHL3后,TP53野生型的HCT116细胞干性标记物CD44、CD133、SOX2、Oct4、Nanog的表达水平出现明显上调;敲降UCHL3后,TP53突变型的SW480细胞干性GSK1349572供应商标记物CD44、CD133、SOX2、Oct4、Nanog的表达水平出现明显下调。5.干细胞体内致瘤实验显示:敲降UCHL3后,TP53突变型肿瘤干细胞的体内成瘤比例出现明显下降,并且瘤体体积也较对照组明显减小。6.在TCGA数据库中,UCHL3高表达的结直肠癌组织也具有更高的5-FU IC50评分。此外,结直肠癌组织中UCHL3 mRNA水平和DNA修复通路呈正相关。7.5-FU耐药株中UCHL3表达水平明显高于亲本细胞。8.随着5-FU处理浓度的逐渐增加,野生型和突变型P53蛋白均被明显激活,在TP53突变型的SW480细胞中UCHL3表达水平逐渐升高,而在TP53野生型的HCT116细胞中UCHL3表达水平逐渐降低。9.过表达UCHL3后,TP53野生型HCT116细胞的5-FU IC50值明显升高,对5-FU治疗敏感性减低。敲降UCHL3后,TP53突变型SW480细胞的5-FU IC50值明显降低,对5-FU治疗敏感性增强。10.过表达UCHL3后,TP53野生型HCT116细胞的凋亡水平降低,对5-FU治疗敏感性减低。敲降UCHL3后,TP53突变型SW480细胞凋亡水平升高,对5-FU治疗敏感性增强。结论:1.UCHL3参与介导了结直肠癌TP53基因突变导致的干性特征。2.UCHL3参与介导了结直肠癌TP53基因突变导致的5-FU化疗耐药。第三部分UCHL3促进结直肠癌糖酵解、干性特征及5-FU化疗耐药的机制研究目的:探究UCHL3促进结直肠癌细胞糖酵解、干性特征及5-FU化疗耐药的具体机制。方法:1.使用SW480细胞通过免疫沉淀联合质谱方法寻找能够与UCHL3结合的蛋白。2.使用HCT116和SW480细胞通过免疫共沉淀方法验证UCHL3和ENO1是否能够相互结合。3.于HCT116细胞中转染Flag-UCHL3质粒以过表达UCHL3,于SW480细胞中转染Si RNA以敲降UCHL3,使用RT-qPCR及Western blot检测细胞中UCHL3及ENO1的蛋白及mRNA表达水平改变。4.于HCT116细胞中转染Flag-UCHL3质粒以过表达UCHL3,于SW480细胞中转染Si RNA以敲降UCHL3,使用放线菌酮(CHX)处理后于不同时间节点收取细胞并使用Western blot检测ENO1半衰期改变。5.于HCT116细胞中转染Flag-UCHL3质粒以过表达UCHL3,于SW480细胞转染Si RNA以敲降UCHL3,加入蛋白酶体抑制剂MG132处理12小时后使用ENO1抗体进行免疫沉淀实验,然后使用Western blot检测ENO1泛素化水平改变。6.于HCT116细胞中转染Flag-UCHL3质粒以过表达UCHL3,于SW480细胞转染Si RNA以敲降UCHL3,于加入蛋白酶体抑制剂MG132前后分别使用Western blot检测ENO1的表达水平改变。7.于41例结直肠癌患者组织标本中,使用免疫组化检测UCHL3和ENO1表达水平,并进行相关性分析。8.在稳定敲降UCHL3的RKO、SW480细胞中瞬时转染Flag-ENO1质粒以过表达ENO1。Western blot验证UCHL3敲降效率及ENO1过表达效率。9.在稳定敲降UCHL3的RKO、SW480细胞瞬时过表达ENO1,检测细胞的糖酵解水平、干性特征及5-FU化疗敏感性,方法同第二部分。结果:1.免疫沉淀联合质谱鉴定结果显示:在结直肠癌细胞中UCHL3蛋白和ENO1蛋白可能存在互相结合。2.免疫共沉淀实验结果显示:在HCT116细胞和SW480细胞中,UCHL3抗体能够将UCHL3蛋白和ENO1蛋白同时沉淀下来,ENO1抗体也能够将ENO1蛋白和UCHL3蛋白同时沉淀下来。3.在HCT116细胞中过表达UCHL3可以导致ENO1蛋白水平明显升高,而ENO1 mRNA水平无明显改变;在SW480细胞中敲降UCHL3可以导致ENO1蛋白水平明显降低,而ENO1 mRNA水平无明显改变。4.在HCT116细胞中过表达UCHL3后,ENO1蛋白的降解速率明显减慢,半衰期明显延长;在SW480细胞中敲降UCHL3后,ENO1蛋白的降解速率明显加快,半衰期明显缩短。5.HCT116细胞中过表达UCHL3后,ENO1蛋白泛素化水平明显降低;SW480细胞中敲降UCHL3后,ENO1蛋白泛素化水平明显升高。6.在HCT116和SW480细胞中使用了蛋白酶体抑制剂MG132以后,UCHL3丧失了其对ENO1蛋白水平的调控功能。7.Kendall’s tau-b检验显示结直肠癌组织中UCHL3和ENO1表达具有较好的正相关性(P<0.05),相关系数R=0.443。线性相关性分析也表明结直肠癌组织中UCHL3染色评分和ENO1染色评分呈明显正相关(P<0.001),相关系数R=0.614。8.过表达ENO1能够部分回复敲降UCHL3后对结直肠癌细胞糖酵解的抑制作用。9.过表达ENO1能够部分回复敲降UCHL3后对结直肠癌干性特征的抑制作用。10.过表达ENO1能够部分回复UCHL3敲降后对结直肠癌细胞5-FU化疗敏感性的影响。结论:1.在结直肠癌细胞中,UCHL3蛋白与ENO1蛋白互相结合。2.UCHL3发挥其去泛素化酶活性来降低ENO1蛋白的泛素化修饰水平,进而减弱了ENO1的泛素-蛋白酶体途径降解从而正向调控了ENO1的蛋白水平。3.UCHL3通过调控ENO1进而促进结直肠癌糖酵解、干性特征及5-FU化疗耐药。第四部分探究Pacritinib对TP53突变结直肠癌的糖酵解水平及5-FU化疗敏感性的影响目的:使用FDA批准上市的临床药物库筛选能够明显抑制TP53突变结直肠癌UCHL3表达的药物,通过“老药新用”为改善TP53突变结直肠癌患者预后提供新的治疗策略。方法:1.使用933种FDA批准上市的临床药物处理TP53基因突变的SW480细胞24小时,然后使用RT-qPCR检测细胞内UCHL3 mRNA表达水平改变情况,以筛选能够明显抑制UCHL3表达的药物。2.通过CCK8法检测了TP53突变结直肠癌细胞SW480和HT29的Pacritinib IC50值,并使用Western blot检测Pacritinib是否能够抑制TP53突变结直肠癌细胞的JAK2-STAT3通路及UCHL3和ENO1表达。3.使用递增浓度的Pacritinib药物处理SW480和HT29细胞12小时,使用RT-qPCR检测细胞中UCHL3及ENO1 mRNA表达水平改变。4.将HCT116细胞中野生型P53完全敲除并使用递增浓度的Pacritinib处理12小时,使用Western blot检测JAK2-STAT3通路活化及UCHL3和ENO1表达情况。5.在HCT116(P53-/-)细胞中过表达突变型P53蛋白并使用递增浓度的Pacritinib处理12小时,使用Western blot检测JAK2-STAT3通路活化及UCHL3和ENO1表达情况。6.使用5-FU处理SW480细胞48小时同时使用递增浓度的Pacritinib处理12小时,使用Western blot检测P53蛋白及JAK2-STAT3通路活化及UCHL3和ENO1表达情况。7.对80例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织芯片进行p-STAT3蛋白免疫组化染色,并比较野生型TP53和突变型TP53结直肠癌组织中p-ST AT3表达水平。此外还分析结直肠癌组织中p-STAT3和UCHL3表达水平相关性。8.使用NCBI联合JASPAR数据库预测了STAT3与UCHL3启动子区结合位点。通过染色质免疫沉淀(Ch IP)实验来验证STAT3能否与预测的结合位点相结合。并进行了双荧光素酶报告基因实验验证STAT3是否能够增强UCHL3启动子活性。9.通过Seahorse XF系统检测了Pacritinib对TP53突变结直肠癌细胞糖酵解速率的影响。10.通过克隆形成实验以及流式细胞术检测细胞凋亡实验研究Pacritinib能否增强TP53突变结直肠癌细胞对5-FU化疗的敏感性。11.使用TP53突变的结直肠癌细胞构建小鼠皮下移植瘤模型,随后分为四个治疗组:第一组给予空白对照;第二组给予5-FU 20mg/kg腹腔注射,每周3次;第三组给予Pacritinib 100mg/kg灌胃,每周3次;第四组给予5-FU和Pacritinib联合治疗。以在小鼠体内评估Pacritinib能否增强TP53突变结直肠癌细胞对5-FU化疗的敏感性。结果:1.Pacritinib药物能够抑制TP53突变结直肠癌细胞的JAK2-STAT3通路以及UCHL3和ENO1表达。2.结直肠癌野生型P53功能的缺失及突变型P53的激活均能通过活化JAK2-STAT3通路促进UCHL3和ENO1的表达,而使用Pacritinib药物治疗能够逆转这一过程。3.结直肠癌组织芯片免疫组化染色显示:突变型TP53结直肠癌组织中p-STAT3蛋白表达水平明显高于野生型TP53结直肠癌组织。此外结直肠癌组织中p-STAT3和UCHL3表达具有较好的正相关性。4.JAK2-STAT3通路活化后增强转录因子STAT3的磷酸化并促进其入核,入核后能够直接结合到UCHL3的启动子区域并促进UCHL3的转录和表达。5.Pacritinib药物能够逆转TP53突变结直肠癌高水平糖酵解及5-FU化疗耐药。结论:1.Pacritinib能够通过抑制TP53突变结直肠癌的JAK2-STAT3通路进而抑制UCHL3和ENO1表达。2.结直肠癌野生型P53功能的缺失及突变型P53的激活均能通过活化JAK2-STAT3通路进而促进UCHL3和ENO1的表达,而使用Pacritinib药物治疗能够逆转这一过程。3.Pacritinib可以抑制TP53突变结直肠癌糖酵解及增强5-FU化疗敏感性。

肺癌是我国此网站恶性肿瘤中发病率和死亡率最高的癌症，非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)是肺癌最主要的病理类型，约占肺癌总数的80%～85%。含铂双药化疗是驱动基因阴性晚期NSCLC标准的一线化疗方案。骨髓抑制(chemotherapy-induced myelosuppression, CIM)是肿瘤化疗最常见的毒性反应，包括中性粒细胞减少症、血小板点击此处减少症和贫血。目前，CIM的传统治疗手段都有一定的局限性，主要包括仅针对单一谱系、存在其他不良事件发生风险、治疗时间长、起效慢、易导致骨髓耗竭等。曲拉西利(trilaciclib)作为新型细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6)抑制剂，通foot biomechancis过诱导造血干/祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cells, HSPCs)短暂停滞在G1期，保护其免受化疗损伤，在全系骨髓上起显著预防保护作用，显著降低三系骨髓抑制的发生率，具有高效性、选择性与可逆性，且安全性良好。本文报道1例曲拉西利预防肺癌化疗引发的骨髓抑制病例，以供同行参考。

秦岭造山带在晚三叠世经历了强烈的碰撞造山作用,伴随岩浆底侵和构造变形,造山带可能发生了显著的地壳增厚和隆升,但对缺少同时期岩浆岩记录的造山带东段,其造山过程的地Fungal biomass壳厚度变化还未有明确约束.在东秦岭造山带的南麓发育一系列的早中生代前陆盆地,保存有大量源自造山带隆升剥蚀的碎屑沉积记录,是重建造ABT-199配制山带演化的重要信息载体.为进一步selleck 3-MA厘定秦岭造山带的碰撞造山过程,本文对秭归盆地下侏罗统桐竹园组的砂岩开展了火山岩岩屑地球化学、碎屑锆石U-Pb年代学和微量元素组成分析.结果显示,含有大量火山岩岩屑的砂岩具有250～200Ma的特征性碎屑锆石年龄组成,指示了其主要物源为三叠纪的火山岩.下侏罗统碎屑锆石U-Pb年龄谱的区域对比和古水流分析表明,该火山岩物源区应位于盆地北部的秦岭造山带,可与造山带西部出露的三叠纪花岗质岩体进行对比,同属于秦岭三叠纪碰撞造山的岩浆作用.依据花岗质岩和锆石化学组成与地壳厚度的相关关系,桐竹园组的火山岩岩屑La/Yb比值和三叠纪年龄碎屑锆石Eu/Eu~*比值指示,秦岭造山带在晚三叠世发生了显著的地壳增厚,最大厚度可达60～70km,与秦岭造山带三叠纪花岗质岩石记录的地壳厚度变化一致,可能与碰撞造山过程中的大规模地壳缩短和岩浆作用有关.