SRC信号通路

目的 利用生物信息学方法分析肺炎支原体GrpE蛋白的生物学特性，纯化MpGrpE蛋白并制备多克隆抗体。方法 从NCBI网站获得肺炎支原体GrpE蛋白的氨基酸序列，并将其与大肠埃Dolutegravir抑制剂希菌、结核分枝杆菌、解脲脲selleckchem Belumosudil原体、生殖支原体、鸡毒支原体和龟支原体的GrpE蛋白进行序列比对。利用生物信息学软件分析预测MpGrpE蛋白的信号肽、跨膜区、细胞定位、磷酸化和糖基化修饰、二级结构、三级结构、B细胞表位和作蛋白等生物学特性。将重组质粒pET28a-MpGrpE转化大肠埃希菌，诱导表达后通过Ni~(2+)亲和层析纯化重组MpGrpE蛋白。用重组蛋白免疫小鼠，获得抗血清并测定抗体滴度。结果 MpGrpE蛋白与生殖支原体GrpE蛋白同源性为73%。MpGrpE蛋白共有217个氨基酸，分子式C_(1108)H_(1807)N_(291)O_(336)S_3,理论分子质量为24.7ku,理论等电点为7.7,为不稳定的疏水性蛋白。MpGrpE蛋白无信号肽，无跨膜区，定位在胞质。该蛋白含有8个丝氨酸、4个苏氨酸和2个酪氨酸磷酸化位domestic family clusters infections点，无糖基化位点。其二级结构中α螺旋占69.12%,β折叠占8.29%,无规卷曲占18.89%,β转角占3.69%。MpGrpE蛋白83.2%的三级结构为最佳状态。MpGrpE蛋白含有4个连续的B表位和4个非线性表位。MpGrpE蛋白的的互作蛋白有DnaK、GroS、GroL等。通过Ni~(2+)亲和层析获得了较高纯度的MpGrpE蛋白，用该蛋白免疫小鼠能够诱导产生IgG抗体。结论 生物信息学分析MpGrpE蛋白是定位在肺炎支原体胞质的一种疏水性蛋白，克隆表达的MpGrpE蛋白具有良好的免疫原性，为肺炎支原体的致病机制以及疫苗研发提供了实验基础。

EI24(etoposide-induced PD-0332991核磁gene 24)是一种由依托泊苷以依赖于p53的方式诱导的DNA损伤应答基因，可通过endovascular infectionp53介导的凋亡途径抑制细胞生长，在多种恶性肿瘤中通过促进癌细胞凋亡发挥抑癌作用。EI24基因编码的位于内质网膜上的EI24蛋白，是一种重要的自噬蛋白，参与自VE-822半抑制浓度噬小体的形成，促进自噬通量，从而在多种恶性肿瘤中发挥抑癌作用，但这也有利于促进依赖自噬维持生存的胰腺癌的生长。该基因定位于11q23-q24,是人类癌症中一个频繁突变的区域，其突变与肿瘤的恶性和侵袭性相关，在不同类型的肿瘤中。EI24的表达水平和所发挥的功能不同，EI24在乳腺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌等大多数肿瘤中表达水平较正常组织低，并通过诱导凋亡、激活自噬、抑制上皮间质转化等功能以及基因突变在肿瘤的发生发展中发挥抑癌基因的作用。但在皮肤癌中，EI24的表达水平较正常组织高，并能促进皮肤癌的癌变，发挥癌基因的作用，其机制可能是与EI24结合的互作蛋白不同有关。本文就EI24的生物学功能及其在肿瘤中的作用做一综述。

目的 探讨冻干重组人脑利钠肽联合脑啡肽酶抑制剂治疗急性失代偿性心力衰竭患者的临床疗效及预后效果。方法 收集本院2019年4月至2021年4月收治的101例急性失代偿性心力衰竭患者的临床资料，根据入院血流动力学稳定后早期用药治疗差异分为观察组（冻干重组人脑利钠肽联合脑啡肽酶抑制剂，n=52）和对照组（常规治疗，n=49）。比较两组患者临床疗效、心功能[左室舒张末期内径（left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD）、左房收缩末期内径（left atrium end-systolic diameter,LAESD）、左心室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVBioMark HD microfluidic systemEF）]、 C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、N末端脑钠肽前体（N-terminal brain natriuretic peptide precursor,NT-proBNP）、24 h尿量、不良反应、住院期间死亡率及预后。结果 观察组总有效率（94.23%）明显高于对照组（79.59%）(P<0.05)；与治疗前相比，两组治疗后LVEDD、LAESD水平均下降、LVEF水平均上升，其中以观察组最为显著（P<0.05）；与治疗前相比，两组治疗后CRP、NT-proBNP水平均下降、24 h尿量均上升，其中以观察组最为显著（P<0.05）；两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P> 0.05）；观察组住院期间死亡率（1.92%）明显低于对照组（12.24%）(P<0.05)；观察寻找更多组治疗1个月后再入院率（11.54%）低于对照组（28.57%）(P<0.05)。结论 急性失代偿性心力衰竭采用冻干重组人脑利钠肽联合脑啡肽酶抑制剂治疗效果显著，有利于改善患者心功能、临selleck床症状以及预后，且具有一定的安全性，临床值得进一步研究推广。

目的 研究白藜芦醇通过诱导自噬促进肥胖小鼠骨骼肌组织中纤连蛋白Ⅲ型结构域包含5 (FNDC5)降解的机制。方法 将6周龄雄性C57 BL/6小鼠随机分为标准饮食(SCD)组、高脂(HFD)组及高脂点击此处+白藜芦醇(HFD+RES)组,HFD+RES组在HFD的同时胃饲白藜芦醇(400 mg/kg·d),共持续20周。测定体重和血脂水平,HE染色、免疫组化、RT-PCR和Weselleckchemstern blot分析骨骼肌的病理学和相关分子表达变化。结果 HFD组小鼠体重增高,血脂水平升高;骨骼肌纤维间出现脂肪沉积;沉默信息调节因子(SIRT)-1、SIRT2、微管相关蛋白1轻链3(LC3)自噬效应蛋白(Beclin)-1、自噬相关蛋白(Atg) 7表达减少,跨膜蛋白Ⅲ型纤连蛋白结构域5(FNDC5)、选择性自噬接头蛋白(p62)表达增加。RES组可逆转HFD的效应,增加SIRT1、SIRT2和自噬相关基因的表达。结论 白藜芦醇可减少骨骼肌FNDgenetic renal diseaseC5表达的效应,其机制可能与其增加SIRT1和SIRT2的表达,进而促进自噬和FNDC5的降解有关。

目的：探究mi R-216a-5p对胃癌细胞自噬和放射敏感性的调控机制及其对双特异性磷酸酶10(DUSP10)的调控作用。方法：采用直线加速器6-MV X射线照射SGC-7901细胞，剂量率为0.8Gy/min，总剂量为8Gy。用Lipofectamine 2000试剂将mi R-216a-5p mimic、NC mimic、pcDNA DUSP10或pcDNA NC转染到SGC-7901细胞中。转染后，将细胞分为mi R-216a-5p mimic组和NC mimic组，每组又分为0Gy和8Gy两个亚组。在拯救实验中，将细胞分为Puromycin浓度mi R-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组和mi R-216a-5p mimic+pcDNA NC组。通过qRT-PCR检测mi R-216a-5p和DUSPmedicines policy10 m RNA水平。通过5-乙HDAC抑制剂炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）掺入实验和集落形成测定检测细胞增殖。通过流式细胞仪评估细胞凋亡。通过Western blot检测DUSP10、Bax、Bad、Bcl-2、LC3和p62的蛋白表达。通过免疫荧光法检测γH2AX的表达，用于评估细胞中的DNA双链断裂（DSB）。通过荧光素酶报告基因检测mi R-216a-5p和DUSP10的靶向关系。通过GFP-m RFP-LC3检测自噬体。结果：与8Gy NC-mimic组相比，8Gy mi R-216a-5p-mimic组的集落数量、EdU阳性率和Bcl-2蛋白表达水平降低，而γH2AX阳性率、细胞凋亡率和Bax和Bad蛋白表达水平升高（P<0.01）。与8Gy NC-mimic组相比，8Gy mi R-216a-5p-mimic组的自噬体数量和LC3II蛋白表达水平降低，而p62蛋白表达水平升高（P<0.001）。与mi R-216a-5p-mimic共培养后，与DUSP10-3'-UTR-MUT组相比，DUSP10-3'-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著降低（P<0.001）。与NC-mimic组相比，mi R-216a-5p-mimic组的DUSP10 m RNA和蛋白表达水平均降低（P<0.001）。与mi R-216a-5p mimic+pcDNA NC组相比，mi R-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组的集落数量和自噬体数量升高，而细胞凋亡率降低（P<0.001）。结论：mi R-216a-5p通过抑制DUSP10来抑制细胞增殖、增加放射诱导的细胞凋亡并抑制放射诱导的自噬，从而增强胃癌细胞的放射敏感性。

抗生素滥用导致的细菌耐药性已成为全球范围内严重的生态问题,寻找有效的抗生素替代品迫在眉睫。乳铁蛋白肽(LFcinB,FKCRR WQWRM KKLGA PSITC VRRAF)是由牛乳铁蛋白(Bovine Lactoferrin,BLF)经消化酶水解产生的一类具有广谱抑菌活性的两亲性阳离子短肽,具有杀菌快速、不易产生抗药性、热稳定性及水溶性好等优点。本文以LFcinB为模板,以提高抗菌肽活性及稳定性为目标,借助生物信息学工具,以提高其电荷量、疏水性为原则,设计出新型高抗菌活性的衍生肽LFcinB-L1(LFcinB-L1,WKWRR WQWRW KBYL719供应商KLGA PSITC VRRAF)。利用毕赤酵母GS115分泌性表达衍生肽LFcinB-L1,对发酵液进行Military medicine分离纯化后检测衍生肽LFcinB-L1的体内外抑菌活性,并初步探究其抑菌机制。本课题主要研究内容和结果如下:(1)本文引入色氨酸(Trp)对LFcinB不同位点的氨基酸进行替换得到了5条衍生肽序列。利用蛋白分析工具对母肽及其衍生肽的理化参数、不同形式二级结构占比及分布和空间结构进行了模拟与分析;使用抗菌肽预测工具CAMP对衍生肽进行了抗菌活性预测,表明了衍生肽的设计在理论上的合理性。一系列生物信息学工具显示,衍生肽LFcinB-L1综合平分最高,其疏水性残基的比例提高到56%,电荷数为+8,具有与母肽相近的二级结构及空间结构,因此,本文选择衍生肽LFcinB-L1合成基因并构建表达载体。(2)使用Snapgene软件数据库中毕赤酵母密码子优化表对衍生肽LFcinB-L1基因的密码子进行优化,使其适应于酵母GS115菌株表达。利用T4-DNA连接酶将经人工优化且成功合成的LFcinB-L1基因片段与线性化的p PIC9K载体连接成为分泌型表达重组载体p PIC9K-LFcinB-L1。基因测序结果表明长度为75 bp的LFcinB-L1基因成功克隆至质粒p PIC9K,重组载体构建成功。(3)利用限制性内切酶Sac I-HF对重组载体p PIC9K-LFcinB-L1单酶切,使其线性化,然后转化至酵母GS115宿主菌,使用甲醇进行诱导发酵,分泌性表达出衍生肽LFcinB-L1。探究和优化发酵条件,得其最适发酵条件为诱导时间:72 h,甲醇浓度:2%。使用琼脂板扩散法对比分析衍生肽LFcinB-L1与母肽LFcinB的抗菌活性,结果显示LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的抗菌活性比母肽LFcinB高约2倍。(4)使用400 m L发酵上清液制备的冻干粉质量为8.59 g。使用福林酚法检测冻干粉中衍生肽含量,测得多肽在冻干粉中含量占比约为37.19%。(5)检测衍生肽LFcinB-L1对不同菌种的抑菌作用,结果表明LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌(G~+)、大肠杆菌(G~-)和枯草芽孢杆菌(G~+)均具有良好的抑菌效果。(6)利用Ecc15感染模式生物黑腹果蝇构建果蝇结肠炎模型,该果蝇模型肠道屏障功能受损、肠道缩短、寿命缩短,肠道内ROS升高,抗氧化相关基因的m RNA水平和抗氧化相关蛋白酶活性升高。在食物中添加衍生肽LFcinB-L1及母肽LFcinB,能减少果蝇结肠炎模型体内载菌量、降低细菌活力,降低过量的ROS,回调果蝇结肠炎模型体内抗氧化相关蛋白酶活性,进而修复肠道屏障功能、维持果蝇肠道形态,延长受感染果蝇的寿命,并且衍生肽LFcinB-L1在体内表现出比LFcinB更好的抗感染活性。(7)初步探究衍生肽LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,其最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration,MBC)分别为2 mg/m L和5 mg/m L。检测衍生肽LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的细胞表面疏水性、培养液中胞外碱性磷酸酶活性、β-D-半乳糖苷酶活性和核酸分子的影响。实验结果表明,LFcinB-L1降低菌体细胞表面疏水性,增加细胞壁和细胞膜的通透性,破坏菌体细胞膜的完整性,导致胞内的β-D-半乳糖苷酶及核酸大分子物质的泄漏;此外,衍生肽LFcinB-L1不影响金黄色葡萄球菌基因组稳定性,但会导致胞内蛋白含量显著降低,且出现部分蛋白的缺失,并且,衍生肽LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的抑菌效果显著强于母肽。综selleck PLX5622上,本文以LFcinB为模板,设计改造出衍生肽LFcinB-L1,在酵母中分泌性表达并纯化,该衍生肽在体外可抑制革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌生长,且抑菌活性比母肽高两倍以上;在肠道内可抑制病原菌生长,从而减轻由ECC15感染的果蝇结肠炎模型的一系列疾病表型。此外,探究其对金黄色葡萄球菌的抑菌机制表明该衍生肽通过破坏细胞膜及抑制蛋白表达抑制细菌生长。本研究设计、改造并获得具有高抗菌活性的抗菌肽,优化发酵条件及多肽纯化条件,并初步探究其抗菌机制,为开发高产、高效并且作用机制明确的新型抗菌肽提供理论依据,对将来人类的卫生健康和畜牧行业的稳定发展具有重要的应用指导意义。

目的 分析异常子宫出血患者发生血脂代谢异常的危险因素，并探讨其相应防治策略。方法 选取2019年5月至2020年5月于通许第一医院妇科就诊的280例异常子宫出血患者为Uveítis intermedia研究对象，回顾性分析患者诊治以来的临床病理资料。根据是否发生血脂代谢异常分为观察组(N=64)和对照组(N=216)，对比两组患者临床资料并进行单因素和多因素Logistic回归分析发生血脂代谢异常的危险因素。结果 单因素分析结果显示，年龄、BMI、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、冠心病比较，差异具有统计学意义(P <0.05)；而初潮年龄、疾病类型、孕产次、流MDV3100产次数、贫血、异常子宫出血时间、经期操劳过度Enasidenib分子量、心理压力过大比较，差异无统计学意义(P> 0.05)；多因素Logistic回归分析结果显示：年龄≥40岁、BMI、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、冠心病是异常子宫出血患者发生血脂代谢异常的独立危险因素，差异具有统计学意义(P <0.05)。结论 异常子宫出血患者合并血脂代谢异常的发生率较高，年龄、BMI、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、冠心病为其影响因素，临床治疗中应给予高度重视，对存在的危险因素进行干预治疗。

研究目的:本实验旨在合成仿生矿化亲水性聚氨酯牙本质底涂剂,并探究其组成配比、矿化时间对封闭牙本质小管、诱导牙本质矿化Erdafitinib溶解度的效果。研究方法:本实验采用溶液聚合法,利用异氟尔酮二异氰酸酯、聚四氢呋喃醚二醇1000和甲基丙烯酸羟乙酯为主要原料,合成可光固化亲水性聚氨基甲酸酯(Polyurethane-COOH-C=C,PU-COOH-C=C),并利用傅里叶红外光谱法(Fourier transform infrared spectrum,FTIR)进行表征。利用其与中和度为60%的丙烯酸、由KH570偶联后的纳米羟基磷灰石及多肽天冬氨酸—天冬氨酸—天冬氨酸—谷氨酸—谷氨酸—赖氨酸—半胱氨酸(DDDEEKC)等,配置多肽DDDEEKC含量为0 mg/g、3 mg/g、5 mg/g、7 mg/g的仿生矿化亲水性聚氨酯牙本质底涂剂DDDEEKC-PU(0-PU、3-PU、5-PU、7-PU)。将各组底涂剂涂覆于酸蚀后的牙本质试件表面,在模拟人体液中分别矿化7日、14日、28日。借助FTIR、X射线衍射(X-rays diffraction,XRD)、场发射扫描电镜(Field emission scanning electron microscope,FESEM)、维氏硬度仪、牙本质渗透率测定装置评价各组双键转化率(Degree of conversion,DC)、封闭牙本质小管及诱导矿化的能力。双键转化率结果采用One-way ANOVA分析;牙本质表面显微硬度、牙本质渗透率、半峰全宽结果采用Two-way ANOVA分析,组间样本均数两两比Amperometric biosensor较采用Tukey检验。实验结果:1.FTIR证实已顺利合成PU-COOH-C=C。2.0-PU、3-PU、5-PU 组 DC 与商品粘接剂 Single Bond Universal 2 无显著差异(P>0.05),7-PU 组较低,为 48.47±3.82%。3.牙本质渗透率结果显示,矿化时间(P<0.05)与DDDEEKC含量(P<0.05)对结果均有影响,二者间也存在交互作用(P<0.05)。4.FESEM观察牙本质试件表面可见,矿化14日后,5-PU组、7-PU组牙本质小管口被完全封闭;矿化28日后,3-PU组、5-PU组、7-PU组树脂突表面有片状矿化物大量生成,并且彼此融合,树脂突与小管间间隙被完全充填;纵断面观察可见5-PU组、7-PU组树脂突表面有新生矿物出现,呈现“玉米穗”样形态,但7-PU组可见多处树脂突水解。5.矿化7日后,各组XRD峰型变化不明显;矿化14、28日后,各组均出现羟基磷灰石特征峰,证实有新生羟基磷灰石;并且随着多肽含量增加,各峰峰值增高、半峰宽降低。6.矿化时间(P<0.05)与DDDEEK含量(P<0.05)两个变量对牙本质表面显微硬度均有明显影响,并且二者之间存在交互作用(P<0.05)。结论:课题组成功合成仿生矿化亲水性聚氨酯牙本质底涂剂ICI 46474作用,可封闭牙本质小管,降低牙本质渗透率,诱导羟基磷灰石形成,稳定混合层,其中,5-PU组矿化28日效果最佳。

目的 分析小鼠乳腺癌干细胞(BCSCs)中免疫相关分子的表达和肿瘤组织中免疫细胞的浸润。方法 用成球培养的方法在体外富集小鼠乳腺癌细胞系4T1和4T07的肿瘤干细胞(CSCs);用实时定量PCR检测BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达；用小鼠乳腺癌原位移植瘤模型和流式细胞测量术分别检测脾脏和肿瘤组织中各类免疫细胞的比例。结果 用成球培养的方法可以成功富集小鼠乳腺癌干细胞4T1和4T07;与贴壁培养的肿瘤细胞相比，小鼠BCSCs中免疫检查点和抗原递呈Amycolatopsis mediterranei相关基因的表达有明显差异(P<0.05)。体内的结果表MS-275明，与贴壁肿瘤细胞来源的肿瘤组织相比，肿瘤干细胞来源的肿瘤组织中浸润更多的CGSK J4作用D4~+ T和CD8~+ T细胞(P<0.05),但是CD11b~+ F4/80~+的巨噬细胞浸润更少(P<0.05)。结论 小鼠BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达有改变，且在体内可招募更多的T细胞到肿瘤组织中去。

为了解农村养殖场和其周边土壤中抗生素的污染状况，本研究选取沧州市5家典型的养殖场，在3月(春季)和6月(夏季)分别采集养殖场周边近土及远土样品，采用液相色谱-串联质谱法测定3类(磺胺类(SAs)、四环素类(TCs)、喹诺酮类(FQs))eye drop medication共计30种抗生素的残留，并用风险商值法(RQ)评估其潜在生态环境风险。结果表明，5家农村养殖场及其周边selleckchem S63845土壤中春季检出3类9种抗生素，其中SAs 3种、TCs 3种、FQs 3种，检出浓度依次为ND～1.31μg/kg、ND～28.09μg/km、ND～9.22μg/kg,四环素(TC)的含量最高(55.55μg/kg),甲氧苄啶(TMP)的含量最低(0.61μg/kg);夏季检出3类8种抗生素，其中SAs 2种、TCs 3种、FQs 3种，检出浓度依次为ND～1.21μg/kg、ND～20.02μg/kg、ND～8.31μg/kg,土霉素(OTC)的含量最高(60.28μg/kg),恩诺沙星(EFX)的含量最低(0.54μg/kg)。生态风险评估(RQ值)结果表明，春季土壤中有5种中风险抗生素，包括磺胺二甲嘧啶(SMZ)、四环素(TC)、恩诺沙星(EFX)、诺氟沙星(NFX)、氧氟沙星(OFX),夏季土壤中有4种中风险抗生素，包括磺胺二甲嘧啶(SMZ)、四环素(TC)、诺氟沙星(NFX)、氧氟沙星(OFX)。RQ_(sum)值表明，春季和夏季RQ_(sum)的范围分别为0.03～0.98和0.03～0.89,RQ_(sum)的平均值分别为0.31和0.23,中风险采样点个数分别为7和6,夏季的RQ_(sum)低于春季，当土壤中同时存在多种抗生素时，中风险区域增加，风险性增加。总体而言，5个养殖场及其周边土壤中所检出的抗生素的RQ值和ZD1839小鼠RQ_(sum)值均为中低风险水平，养殖场周边近土的风险性高于远土，对生态环境有不利影响，需加强对农村养殖场土壤中抗生素的风险管控。