SRC信号通路

目的：分析和比较系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)和成人Still病(adult-onset Still’s disease, AOSD)合并巨噬细胞活化综合征(macrophage activation syndrome, MAS)患者的临床及实验室指标特点，评估已有的2016年欧洲抗风湿病联盟/美国风湿病学会/儿童风湿病国际试验组织发布的全身型幼年特发性关节炎(systemic juvenile idiopathic arthritis, sJIA)合并MAS(sJIA-MASOral relative bioavailability)分类标准在不同自身免疫病背景下的适用情况，并提出新的诊断预测指标，为提高MAS早期诊断率、改善患者预后提供参考。方法：回顾性分析2000—2018年在北京大学人民医院住院的24例SLE合并MAS患者和24例AOSD合并MAS患者的临床及实验室数据，分别与同期未发生MAS的50例SLE及50例AOSD患者进行比较，通过受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线确定预测MAS的实验室指标截断值。进一步使用实验室诊断预测值对2016年sJIA-MAS分类标准进行改进，探讨改进后的标准对于AOSD合并MAS的适用性。结果：约60%的SLE合并MAS及40%的AOSD合并MAS患者发生在原发病确诊后的3个月内。发热是MAS最常见www.selleck.cn/products/lgk-974的临床表现。实验室指标除了2004年国际组织细胞学会修订的噬血细胞综合征诊断标准中的指标外，MAS患者的天冬氨酸转氨酶及乳酸脱氢酶也显著升高，白蛋白显著下降，噬血现象仅见于约50%的MAS患者。ROC曲线分析显示，当SLE患者铁蛋白≥1 010μg/L、乳酸脱氢酶≥359 U/L,AOSD患者纤维蛋白原≤225.5 mg/dL、甘油三酯≥2.0 mmol/L时，对MAS诊断有最好的区分价值。将2016年sJIA-MAS分类标准应用于AOSD合并MAS,诊断的敏感性和特异性分别为100%和62%,对其中特异性低的铁蛋白和纤维蛋白原条目进行改进，诊断特异性可升高为86%。结论：SLE合并MAS及AOSD合并BYL719分子式MAS最常发生于疾病确诊后的早期，不同疾病继发MAS因受自身免疫病特点的影响而在实验室指标方面存在明显差异，以同一标准进行MAS诊断可能导致误诊或漏诊。2016年sJIA-MAS分类标准在AOSD合并MAS诊断中敏感性高而特异性低，对之进行改进可提高特异性。

目的:对原发性高血压患者的血清胱抑素C(Cys-C)、β_2微球蛋白(β_2-MG)、肌酐(Cr)水平与左心结构的相关性进行研究。方法:对2022年6月至2022年9月于内蒙古民族大学附属医院心内一科收治的215例患者进行了回顾性研究,154例原发性高血压病人设为原发性高血压组,另外纳入非高血压人群6Genetic reassortment1例设为非高血压组。记录纳入人群的一般资料、收集血尿素、尿酸、肌酐、Cys-C、β_2-MG等肾功能IACS-10759价格血清指标及超声心动图结果。使用SPSS 27.0统计学软件对数据进行处理,以P<0.05有统计学意义。采用Graphpad Prism软件进行统计绘图。结果:1、两组基线资料的对比,两组在性别、左室射血分数(EF)、左室短轴收缩力(FS)、血尿素、血尿酸等方面无明显统计学差异(P>0.05);原发性高血压组年龄更大(P<0.05),LAD、LVDd、IVS、血肌酐、血胱抑素C、β_2微球蛋白的值高于非高血压组(P值均<0.05),有统计学意义。2、在原发性高血压组中可见,LAD与血清Cys-C(r=0.268)、β_2-MG(r=0.328)和Cr(r=0.272)之间存在正相关关系(P值均<0.05),有统计学意义;LVDd与Cys-C(r=0.267)、β_2-MG(r=0.265)和Cr(r=0.317)之间也存在正相关关系,(P值均<0.05),有统计学意义。3、经多因素Logistic回归分析结果显示,血清Cys-C(OR=7.757,OR 95%CI1.086-55.389,P<0.05)、β_2-MG(OR=1.971,OR 95%CI 1.028-3.776,P<0.05)、Cr(OR=1.024,OR 95%CI 1.002-1.048,P<0.05),有统计学意义。4、血清胱抑素C、β_2微球蛋白、肌酐水平预测原发性高血压患者左心增大ROC曲线下面积分别为0.795Regorafenib化学结构、0.791、0.728,均(P<0.001)有统计学意义。结论:原发性高血压患者Cys-C、β_2-MG、Cr血清水平与原发性高血压患者左心结构改变存在密切联系,且对于原发性高血压患者的左心结构改可能存在一定的预测价值。

目的 观察家庭康复对系统性红斑狼疮患者正确用药及治疗依从性的影响。方法 60例系统性红斑狼疮患者,以随机数字表法分成对照组及研究组,各30例。对照组接受常规护理干预,研究组开展家庭康复干预。比较两组患者干预前后系统性红斑狼疮疾病相关知识、药物治疗方法、自我管理能力评分、正确用药率及治疗依从性。结果 干预后,两组患者系统性红斑狼疮疾病相关知识、药物治疗方法、自我管理能力评分均较本组干预前升高,且研究组患者系统性红斑狼疮疾病相关知识、药物治疗方法、自我管理能力评分分别为(96.76±2.27)、(95.37±1.51)、(116.08±7.39)分,高于对照组的BMS-907351浓度(91.05±3.34)、(90.6点击此处1±1.63)、(95.61±5.72)分,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组患者正确用药率100.00%及治疗依从性优良率100.00%高于对照组的80.00%、76.67%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 对系统性红斑狼疮患者实施家庭康复干预,可显著提升患者对于系统性红斑狼疮疾病相关知识、药物治疗方法Unlinked biotic predictors的掌握能力,改善自我管理能力,提升用药正确率及对于治疗的依从性,效果理想。

神经炎症Dolutegravir溶解度和氧化应激与帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)、阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)等神经系统退行性疾病的病因和进展关系十分密切,是其发病机制中重要的一环,且两https://www.selleck.cn/products/pf-03084014-pf-3084014.html者密不可分。神经炎症可诱导活性氧的产生,进而产生氧化应激,而活性氧又是炎症反应的次级信使,促进炎症反应加重。钠钾腺苷三磷酸酶(Na/K-ATPase)来自P型ATP酶家族,参与氧化应激信号的扩增。Src是Src酪氨酸激酶家族的成员,参与细胞各种生理信号,对炎症和氧化应激均有促进作用。而Na/K-ATPase可以通过与Src结合来调节Src活性,参与Src级联激活反应。pNaktide是一种Src激酶抑制剂,根据钠钾ATP酶和Src激酶结合部位N结构域设计而成,可以通过与Src的激酶结构域结合,从而特异性抑制其活化,达到抗氧化的效果。在此之前,已经有研究证实其抗氧化能力可以在肥胖、脂肪性肝炎、尿毒症心肌病、衰老和前列腺癌等疾病的抑制中发挥作用,但是,pNaktide在神经退行性疾病中以什么样的角色存在,触发什么样的机制还未可知。为了探究pNaktide在抑制神经炎症和氧化应激所诱导的一系列病理过程中所发挥的作用及机制,本Stress biology研究以小鼠腹腔注射LPS的方式建立神经炎症动物模型来开展后续研究。将小鼠随机分组为CON组,LPS组,pNaktide+LPS组,旷场试验,转棒试验,O迷宫,Y迷宫等行为学结果表明,pNaktide可以改善由LPS所诱导的学习记忆障碍、焦虑增加和运动障碍。氧化应激检测、Western blot、RT-PCR等进一步研究结果表明,pNaktide可通过抑制LPS与TLR4结合后使其激活所诱导的NFκB、MAPK通路,减少炎症小体复合物及其效应器的产生,从而降低炎症因子、补体因子和趋化因子的表达,抑制LPS对Nrf2/HO-1抗氧化应激通路的激活,降低氧化应激水平。同时,pNaktide还可以减轻LPS诱导的自噬抑制、凋亡增强的作用,并且,LPS对海马区新生神经元及突触造成的损伤也得以恢复。总而言之,pNaktide可以通过抑制NFκB、MAPK通路减轻由LPS诱导的神经炎症,从而降低氧化应激水平,发挥神经保护作用,是治疗神经炎症相关疾病的潜在方案。

目的 基于网络药理学研究风骨痛消方治疗类风湿关节炎(RA)的潜在有效成分及体内作用机制，为后续相关研究提供参考。方法 通过中药系统药理学数据库分析平台(TCMSP)筛选风骨痛消方组方中6味中药的活性成分及相关靶点；采用GeneCards数据库检索相关的基因，并通过STRINGPD-0332991使用方法11.0数据库构建蛋白质-蛋白质相互作Named entity recognition用(PPI)网络；于DAVID、Metascape平台进行基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析；通过Cytoscape3.8.0构建并分析“药物-成分-靶点”网络图；以Discovery Studio软件进行分子对接。结果 筛选出风骨痛消方41个活性成分、21个对应治疗靶点，分别涉及RNA聚合酶Ⅱ转录因子活性、蛋白质同源二聚活性、前列腺素内过氧化物合酶活性等过程，以及钙信号通AZD6738配制路、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强(NF-κB)信号通路等通路。结论 风骨痛消方通过多成分、多靶点、多通路协同作用发挥治疗RA的效果，且表现出很强的活性，为后续实验研究奠定了理论基础及方向。

目的 探究基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclear factor kappaProteases抑制剂 B,NF-κB)信号通路沉默微小RNA-21(MicroRNA-21,miR-21)对糖尿病肾病大鼠的干预效果。方法 选取45只大鼠，10只作为空白组，其余35只建立糖尿病肾病模型，最终有30只建模成功，将最终建模成功的30只大鼠分为模型组、上调组和下调组，每组10只。做miR-21转染，将10μl miR-21过表达慢病毒悬液、miR-21沉默慢病毒悬液分别注射于上调组、下调组大鼠胃组织中，空白组、模型组注射同剂量的蒸馏水灌胃，注射24 h后观察大鼠变化。结果 与空白相比，模型组、上调组、下调组白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、C-C基序趋化因子2(CC chemokine ligand 2,CCL2)、内皮素-1(endothelin 1,ET-1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)、转化生长因子-β1(transforming the growth factor-β1,TGF-β1)水平、TLR4、NF-κB表达量上升，一氧化氮(nitric oxide, NO)水平下降(P<0.05);与模型组相比，上调组IL-6、IL-1、CCL2、ET-1、CTGF、TGF-β1水平、TLR4、NF-κB表达量上升(P<0.05),NO水平下降(P<0.05),下调组IL-6、IL-1、CPCI-32765化学结构CL2、ET-1、CTGF、Prebiotic amino acidsTGF-β1水平、TLR4、NF-κB表达量下降(P<0.05),NO水平上升(P<0.05);与上调组相比，下调组IL-6、IL-1、CCL2、ET-1、CTGF、TGF-β1水平、TLR4、NF-κB表达量下降(P<0.05),NO水平上升(P<0.05)。结论 沉默miR-21可缓解糖尿病肾病大鼠炎性反应、肾纤维化，改善内皮功能，其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路被抑制有关。

目的 探讨羟氯喹对IgA肾病（IgAN）患者炎症因子血清及尿IL-6、TNF-α水平的影响。方法 选取2017年1月至2020年12月温州市中西医结合医院收治的IgAN患者32例。采用随机数字表法将患者分为羟氯喹组和对照组，各16例。对照组患者予每日双倍剂量肾素血管紧张素系统阻断药等常规治疗，疗程24周。羟氯喹组在对照组治疗基础上加服羟氯喹片，疗程24周。于治疗前、治疗24周后观察并比较两组患者24 h尿蛋白水平、血肌酐、估算的肾小球滤过率（eGFR）、尿蛋白缓解情况，血清及尿IL-6、TNF-α水平，用药期间不良反应。结果 治疗后，两组患者24 h尿蛋白水平、血肌酐、eGFR比较差异均无统计学意Biosensing strategies义（均P>0.05），仅羟氯喹组患者24 h尿蛋白水平低于治疗前（P<0.05）。羟氯喹组患者尿蛋白缓解率高于对照组（56.25%比18.75%,P<0.05）。治疗后，两组患者血清及尿IL-6、TNF-α水平均较治疗前降低（均P<0.05），且羟氯喹组患者血清及尿IL-6、TNF-α水平均低于对照组（均P<0.05）。治疗期间，两组患者均未见明显不良反应。结论 羟氯喹治疗IgA确认细节N能稳定患者肾功能，降低蛋白尿，提高尿蛋白缓解率，并能下调血清及尿IL-Compound C配制6、TNF-α水平。

研究背景:糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病微血管损伤的并发症之一,是慢性肾脏病和终末期肾病的主要来源。肾小球损伤被认为是DKD进展的重要原因,但越来越多的研究证实肾小管间质损伤在DKD发生和发展中也发挥着重要作用。肾间质纤维化可发生于DKD早期,是导致肾功能不全主要且不可逆的因素。除了适当的血糖和血压控制,阻止或逆转肾纤维化的治疗方法非常有限。因此,探索DKD肾小管间质损伤和寻找有效干预措施,具有重要的临床意义。白介素37(interleukin-37,IL-37)是IL-1家族的第七个成员,是免疫反应和炎症的天然抑制剂。研究表明,IL-37抑制肾脏缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞炎症因子释放,提示IL-37对肾脏疾病有保护作用。此外,IL-37的表达与组织纤维化有关,例如鼻内给药IL-37改善博来霉素诱导的肺纤维化和炎症,同时IL-37转基因(IL-37 transgenic,IL-37tg)小鼠减轻自身免疫性肝病相关的肝纤维化和免疫细胞浸润。值得注意的是,IL-37tg小鼠改善高脂饮食诱导的肥胖和胰岛素抵抗。这些研究表明IL-37可能与DKD肾间质纤维化有关。然而,IL-37与DKD的关系尚未见报道。因此,本研究首先观察了IL-37在DKD患者肾组织中的表达情况,分析肾组织IL-37表达水平与肾间质纤维化程度和肾功能的相关性。随后,利用IL-37tg和野性型(wild type,WT)小鼠制备高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin plus high fat diet,STZ/HFD)诱导的DKD模型,观察IL-37过表达对DKD肾损伤和肾间质纤维化的影响。并通过IL-37tg和WT DKD模型小鼠测序结果分析IL-37影响DKD肾间质纤维化的可能机制。以体外培养的人近端肾小管上皮细胞(human proximal tubular cells,HK-2)为研究对象,阐明IL-37抑制高糖诱导HK-2细胞纤维化标志物高表达的内在机制。最后,利用IL-37tg和WT小鼠制备的DKD模型,体内验证IL-37抑制DKD肾间质纤维化的机制。方法和结果:第一部分:IL-37在DKD患者肾脏中的表达情况IL-37在DKD患者肾小管上皮细胞中的表达显著降低于陆军军医大学第二附属医院肾内科生物样本库中选取2018年1月-2019年12月肾癌患者远离癌组织的正常肾组织切片(n=10)作为对照组,肾穿刺活检病理诊断为DKD患者的肾组织切片(n=24)作为DKD组。记录DKD患者临床指标,包括血肌酐(serum creatinine,SCr)、24小时尿蛋白定量、估算的肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)。HE、PAS染色观察肾小球病理改变,Masson染色和IL-37免疫组织化学染色观察肾间质纤维化和IL-37表达水平。分析DKD患者肾组织IL-37表达水平与临床各指标的相关性。结果显示,与对照组相比,DKD患者组肾小球体积增大、系膜基质增多,同时出现明显的肾间质纤维化和肾小管上皮细胞IL-37表达显著降低,并且IL-37表达水平与肾间质纤维化程度、SCr、24小时尿蛋白定量呈显著负相关,与eGFR呈显著正相关。以上结果说明,肾小管上皮细胞IL-37的低表达与DKD肾间质纤维化及肾损伤程度有着密切的关联,IL-37可能参与了DKD的进展。第二部分:IL-37在DKD肾间质纤维化中的作用1.IL-37过表达减轻DKD肾损伤构建IL-37tg小鼠,Western blot和免疫组织化学染色观察IL-37表达情况。结果显示,WT组小鼠肾组织不表达IL-37;与WT组小鼠比较,IL-37tg组小鼠肾组织IL-37表达显著,说明IL-37tg小鼠构建成功。IL-37tg和WT小鼠通过STZ/HFD诱导小鼠DKD模型。每4周代谢笼收集各组小鼠24 h尿液、监测血糖。建模16周后取材,称量各组小鼠体重、肾重,ELISA检测尿白蛋白,酶法检测尿肌酐和SCr水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肾组织中肾损伤因子KIM1、NGAL mRNA表达水平。结果显示,与WT对照组小鼠相比,STZ/HFD诱导的小鼠出现血糖、SCr、尿蛋白/尿肌酐比值(urine albumin to creatinine ratio,UACR)显著升高,同时肾小球体积增大,系膜基质增多。以上结果提示STZ/HFD小鼠DKD模型造模成功。与WT DKD组CL 318952溶解度小鼠相比,IL-37过表达减轻DKD小鼠UACR、SCr升高,但并不影响血糖水平。与WT对照组小鼠相比,WT DKD组小鼠体重减轻、肾重/体重比值显著增加,KIM1、NGAL表达水平显著增加;而与WT DKD组小鼠相比,IL-37tg DKD组小鼠上述指标均明显减轻。以上结果说明,IL-37在DKD中发挥了重要的肾脏保护作用。2.IL-37过表达改善DKD肾间质纤维化Masson染色显示,与WT对照组小鼠相比,WT DKD组小鼠出现了明显的胶原沉积,提示出现了肾间质纤维化;而与WT DKD组小鼠相比,IL-37tg DKD组小鼠肾间质纤维化程度明显减轻。免疫组织化学染色和Western blot检测结果表明,与WT DKD组小鼠相比,IL-37tg DKD组小鼠肾纤维化标志物α-SMA、Fibronectin的表达显著降低。以上结果说明,IL-37过表达明显改善DKD肾间质纤维化。3.IL-37缓解高糖诱导的HK-2细胞纤维化标志物高表达在体外,HK-2细胞分别给予30 mmol/L高糖和/或300 ng/m L人IL-37重组蛋白(human recombinant IL-37,rec IL-37)孵育后,Western blot检测纤维化标志物α-SMA和Fibronectin表达水平。结果显示,30 mmol/L高糖孵育诱导HK-2细胞纤维化标志物高表达,而300 ng/m L rec IL-37共孵育抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化标志物表达升高。这说明,在体外,IL-37同样可以抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞纤维化标志物高表达。第三部分:IL-37改善DKD肾间质纤维化的机制1.IL-37tg与WT DKD小鼠测序分析提示脂肪酸代谢通路富集分离IL-37tg与WT DKD小鼠肾小管上皮细胞进行转录组测序。测序结果分析差异基因,分别进行GO、Reactom、KEGG通路富集,GSEA富集。结果herd immunity显示,WT与IL-37tg DKD小鼠部分基因表达差异明显,GO、Reactom、KEGG通路富集均提示脂肪酸代谢通路位于前列。GSEA进一步富集出脂肪酸β氧化(fatty acidβ-oxidation,FAO)。以上结果说明,IL-37可能通过调控肾小管上皮细胞FAO而改善肾间质纤维化。体外培养的HK-2细胞分别给予30 mmol/L高糖和/或300 ng/m L rec IL-37孵育后,测定各组细胞ATP含量,RT-qPCR检测FAO相关基因(MCAD、CROT、HADHB)的mRNA表达,油红O染色观察细胞脂滴沉积。结Cell Cycle抑制剂果显示,与对照组相比,高糖组HK-2细胞ATP水平和FAO相关基因mRNA表达显著降低、细胞内脂滴沉积,而300 ng/m L rec IL-37共孵育显著改善了上述指标。以上结果说明,IL-37显著减轻了高糖诱导的HK-2细胞FAO障碍和脂滴沉积。2.IL-37通过调控肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)介导的FAO抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化标志物高表达2.1 IL-37上调HK-2细胞CPT1A表达:进一步分析FAO相关的差异基因,发现CPT1A变化明显,据此,检测IL-37对HK-2细胞CPT1A表达的影响。Western blot检测结果发现,30 mmol/L高糖诱导HK-2细胞CPT1A表达降低,而300 ng/m L rec IL-37共孵育则显著抑制了高糖的上述作用。2.2 CPT1A过表达拮抗高糖诱导的HK-2细胞FAO障碍和纤维化标志物高表达:HK-2细胞转染表达CPT1A的质粒后再给以30 mmol/L高糖孵育,并检测各组细胞ATP水平,油红O染色观察细胞脂滴沉积,Western blot检测HK-2细胞纤维化标志物α-SMA和Fibronectin表达水平。结果显示,HK-2细胞CPT1A过表达显著抑制高糖诱导的HK-2细胞ATP水平降低、脂滴沉积和α-SMA、Fibronectin表达升高。以上结果说明,CPT1A过表达可拮抗高糖诱导的HK-2细胞FAO障碍和纤维化标志物高表达。2.3 CPT1A沉默减弱IL-37对高糖诱导HK-2细胞FAO障碍和纤维化标志物高表达的抑制作用:HK-2细胞转染CPT1A siRNA后再予以30 mmol/L高糖和/或300 ng/m L rec IL-37孵育,检测各组细胞ATP水平,油红O染色观察细胞脂滴沉积,Western blot检测HK-2细胞纤维化标志物α-SMA和Fibronectin表达水平。结果显示,CPT1A siRNA干扰效果显著,CPT1A siRNA干扰逆转了IL-37对高糖诱导的HK-2细胞ATP水平降低、脂滴沉积和纤维化标志物表达的抑制作用。以上结果证实,IL-37通过调控CPT1A减轻高糖诱导的HK-2细胞FAO障碍和纤维化标志物高表达。3 IL-37过表达减轻DKD小鼠肾组织CPT1A、FAO相关基因低表达及肾小管上皮细胞脂质沉积以WT和IL-37tg小鼠制备的DKD模型为研究对象,Western blot和肾组织切片免疫组织化学染色观察各组小鼠肾组织CPT1A表达水平,RT-qPCR检测FAO相关基因mRNA表达,同时检测肾小管上皮细胞ATP水平。结果表明,与WT对照组小鼠相比,WT DKD组小鼠肾组织CPT1A和FAO相关基因表达明显下降,ATP水平显著降低,而IL-37tg DKD组小鼠肾组织CPT1A、FAO相关基因表达和ATP水平较WT DKD组小鼠明显增高。不仅如此,肾组织切片脂肪分化相关蛋白(Adipophilin,ADRP)、近端肾小管上皮细胞标志物(Lotus tetragolonobus lectin,LTL)免疫荧光染色和油红O染色发现,与WT对照组小鼠相比,WT DKD组小鼠ADRP表达升高、LTL表达降低、油红O染色面积增加,而IL-37tg DKD组小鼠肾组织上述情况出现了明显改善。这些结果进一步提示,IL-37可以通过减轻肾小管上皮细胞FAO障碍和脂质沉积,进而改善DKD肾间质纤维化。结论:综上所述,本研究发现IL-37在DKD患者肾小管上皮细胞中的表达显著降低,DKD患者肾组织IL-37表达水平与肾间质纤维化程度、SCr、24 h尿蛋白定量呈显著负相关,与eGFR呈显著正相关。IL-37过表达可以显著抑制DKD肾损伤和肾间质纤维化。机制研究证实,IL-37通过调控CPT1A介导的FAO改善DKD肾间质纤维化,因此,本研究为有效防治DKD进展提供了新思路。

目的:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变及语言障碍等神经精神症状为主要临床特征的慢性进行性中枢神经系统变性疾病。该病发病机制复杂,难以用单一学说完整阐述其病理变化,近年来,越来越多的证据表明神经炎性反应与AD的发病存在因果关系。但迄今为止,AD中炎性反应增加的原因尚不明确。小胶质细胞(Microglia,MG)是中枢神经系统的固有免疫细胞,目前广泛认为,小胶质细胞介导的炎性反应在AD发生及发展过程中发挥重要作用。小胶质细胞有两种状态,静息和激活;受环境的影响表现出多样性的表型,并可通过表型转化以维持组织稳态。小胶质细胞激活分为两种相反的表型:M1型小胶质细胞诱导炎症和促进神经毒性,而M2型小胶质细胞诱导抗炎和组织损伤修复。因此,如何调控小胶质细胞向M2表型转化已成为目前治疗AD的热点。自噬(Autophaselleck R428gy)是真核细胞中一种高度动态和严格调控的分解代谢过程,降解溶酶体中有缺陷的蛋白质或细胞器,维护细胞内稳态的平衡。越来越多的证据表明,自噬受损参与了AD的发病过程。目前认为,在AD早期增强的自噬是细胞对应激的保护性反应,但自噬最终会随着AD的进展而受损。mTOR是一种有效的自噬抑制剂,而AMPK不仅是组织中关键的能量传感器,也作为mTOR的有效抑制剂,AMPK抑制后mTOR的活性增强,抑制自噬发生从而损害细胞内稳态。ULK1介导自噬的起始,受AMPK-mTOR调控。我们推测AMPK-mTOR-ULK1通路参小胶质细胞自噬,调控小胶质细胞表型转化,影响炎性反应。白藜芦醇(Resvertrol,RES)是葡萄皮和葡萄籽中的一种天然多酚类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗癌和心脏保护多种生理和药理活性,并被发现在预防和治疗AD等退行性疾病中具有重要作用。白藜芦醇曾被报道以AMPK依赖的方式促进自噬,减轻AD动物模型病理改变,我们推测,白藜芦醇的抗AD作用可能是通过AMPK-mTOR-ULK1信号通路调控小胶质细胞自噬,促进小胶质细胞向M2表型转化。本实验拟从体内动物实验及体外细胞实验两方面入手,基于AMPK-mTOR-ULK1信号通路探讨小胶质细胞自噬对其表型转化的调控及白藜芦醇保护机制。方法:1.小胶质细胞自噬在AD炎性反应中的表达情况:(1)Aβ_(1-42)作用于BV2细胞构建AD细胞模型,MTT法及ELISA检测筛选Aβ_(1-42)最适造模浓度;将细胞分为Control组(空白对照组)及Aβ组(10μM Aβ_(1-42)干预组)。Western blot检测各组细胞自噬标志物Beclin1、LC3B的表达情况;免疫荧光双染观察各组细胞自噬标记物Beclin1及LC3B与IBA-1的共表达情况。(2)取野生型C57BL/6小鼠及6月、9月、12月龄APP/PS1转基因小鼠,分为WT组(野生型对照组)和AD模型组(APP/PS1 6M、APP/PS1 9M、APP/PS1 12M)。应用Western blot方法检测各组小鼠脑组织自噬标志物Beclin1及LC3B的表达变化;免疫荧光检测小鼠皮层Beclin1及LC3B与小胶质细胞标志物IBA-1共表达水平。2.小胶质细胞通过AMPK-mTOR-ULK1自噬通路调控表型转化:(1)将实验细胞分为3组:Control组(空白对照组)、Aβ组(10μM Aβ_(1-42)干预组)和Dorsomorphin组(10μMAMPK抑制剂Dorsomorphin干预组)。Western blot检测各组细胞中AMPK、mTOR、ULK1磷酸化蛋白及Beclin 1的表达;ELISA法检测各组细胞炎性因子IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4的水平。(2)将实验动物分为4组:WT组(野生型对照组)和AD模型组:APP/PS1 6M、APP/PS1 9M、APP/PS1 12M。Western VE-822纯度blot检测各组动物脑内AMPK、小胶质细胞表型标志物i NOS(M1型)、Arg1(M2型)的表达水平;免疫荧光双染观察各组小鼠脑内i NOS、Arg1与AMPK共表达的情况;ELISA法检测各组小鼠脑组织分泌炎性因子的水平。3.白藜芦醇促进小胶质细胞自噬诱导M2表型转化的抗炎作用研究:(1)将实验细胞分为3组:Control组(空白对照组)、Aβ组(10μM Aβ_(1-42)干预组)和RES组(10μM白藜芦醇预处理1h)。MTT法检测白藜芦醇对细胞的活力影响;流式细胞学检测各组小胶质细胞的凋亡水平;Western blot检测各组细胞炎性小体NLRP3及pro-Caspase-1的表达水平,i NOS及Arg1的表达情况;ELISA法检测各组细胞IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4的水平;免疫荧光染色观察i NOS、Arg1的表达情况;Western blot检测各组细胞AMPK、LC3B、Beclin1的表达水平;细胞透射电镜观察各组细胞结构及自噬小体。(2)选取野生型C57BL/6及9月龄APP/PS1小鼠,分为三组:WT组(野生型对照组饮双蒸水)、AD组(APP/PS1转基因小鼠饮双蒸水)、RES组(APP/PS1转基因小鼠饮双蒸水+白藜芦醇);喂养12周。采用Morris水迷宫对小鼠的学习和空间记忆能力进行评估,分别记录其逃脱潜伏期时长、目标象限停留时间以及平台穿越次数;免疫组化染色以明确各组小鼠皮层及海马Aβ沉积的情况;HE染色明确各组小鼠皮层及海马组织损伤情况;Western blot检测各组小鼠脑内Beclin1、p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1,i NOS及Arg1的表达情况;免疫荧光双染观察各组小鼠脑内IBA-1、LC3B共表达情况;ELISA法检测各组小鼠脑组织IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4的表达水平。结果:1.小胶质细胞自噬在AD炎性反应中的表达情况:(1)Western blot检测显示与Control组相比,Aβ组细胞自噬标记物Beclin1,LC3B的表达水平升高。免疫荧光双染示与Control组相比,Aβ组Beclin1、IBA-1,LC3B、IBA-1双染荧光强度均增强。(2)Western blot检测示与WT组相比,APP/PS1 9M、APP/PS1 12M小鼠Beclin1及LC3B表达升高,APP/PS1 6M小鼠较WT组无明显变化;APP/PS1 12M小鼠较APP/PS1 9M小鼠比较,Beclin1及LC3B表达下降。免疫荧光染色示较WT组相比,APP/PS1 9M、APP/PS1 12M小鼠皮层Beclin1及LC3B与IBA-1共表达水平升高;APP/PS1 6M小鼠Beclin1及LC3B与IBA-1共表达水平较WT组相比无明显变化。以上结果提示,自噬在AD细胞模型高表达,10μM Aβ_(1-42)为最适造模浓度,9月龄APP/PS1小鼠的自噬最明显适宜用作进一步实验研究。2.小胶质细胞通过AMPK-mTOR-ULK1自噬通路调控表型转化:(1)Western blot结果示与Control组相比,Aβ组p-AMPK、Beclin 1的表达增加,p-mTOR、p-ULK1的表达降低;Dorsomorphin组与Aβ组相比,p-AMPK、Beclin 1的表达降低,p-mTOR和p-ULK1的表达升高。ELISA法检测示与Control组相比,Aβ组IL-6、IL-18、IL-1β、IL-4水平上升;与Aβ组相比,Dorsomorphin组IL-6、IL-18、IL-1β水平上升,IL-4水平下降。(2)Western blot结果示与WT组相比,APP/PS1各组AMPK、i NOS、Arg1的表达均升高;APP/PS1 9M组AMPK、i NOS、Arg1的表达较APP/PS16M组增加;较APP/PS1 9M组相比,APP/PS1 12M组AMPK、Arg1的表达下降,i NOS的表达增加。免疫荧光双染示APP/PS1 9M组AMPK、i NOS,AMPK、Arg1双染荧光强度较WT组增强;APP/PS1 12M组较APP/PS1 9M组i NOS表达增强,Arg1表达减弱。ELISA法检测示与WT组相比,APP/PS1组促炎因子IL-6、IL-18、IL-1β水平随小鼠月龄增加逐渐增加,抗炎因子IL-4水平至9月龄最高。上述结果表明AMPK-mTOR-ULK1通路参与AD模型小胶质细胞自噬,并能够介导小胶质细胞向M2表型转化,调控炎性反应。3.白藜芦醇促进小胶质细胞自噬诱导M2表型转化的抗炎作用研究:(1)MTT细胞活性检测示在5-25μM浓度范围内,白藜芦醇对细胞活性无影响。流式细胞检测结果示与Control组相比,Aβ组细胞凋亡水平升高,RES组凋亡水平下调。Western blot结果示与Control组相比,Aβ组i NOS、Arg1、AMPK、LC3B、Beclin1、NLRP3、pro-Caspase-1的表达升高;与Aβ组相比,RES组i NOS、NLRP3、pro-Caspase-1表达下降,Arg1、AMPK、LC3B、Beclin1的表达升高。ELISA结果示与Control组相比,Aβ组IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4水平上升;与Aβ组相比,RES组IL-1β、IL-6、IL-18的水平下降,IL-4的水平上升。免疫荧光染色示Aβ组i NOS、Arg1荧光强度与Control组相比增强,而RES组较Aβ组Arg1荧光强度增强,i NOS荧光强度减弱。细胞透射电镜示Control组部分细胞内可见少量自噬小体;Aβ组可见疑似凋亡细胞,细胞质内可见较多自噬小体;RES组细胞内可见大量自噬小体。(2)Morris水迷宫实验:隐蔽平台期的逃脱潜伏时间,RES组与AD组相比明显缩短;在空间探索实验的目标象限的滞留时间及穿越平台的次数,RES组均多于AD组。免疫组化染色及HE染色示白藜芦醇可降低12M APP/PS1小鼠皮层及海马Aβ沉积,改善脑组织损伤。Western blot检测示与WT组相比,AD组i NOS、Arg1、Beclin1、p-AMPK水平升高,p-mTOR、p-ULK1表达水平下降;RES组与AD组相比i NOS、p-mTOR、p-ULK1水平下调,Arg1、Beclin1、p-AMPK表达水平提高。免疫荧光双染示AD组IBA-1、LC3B双染荧光强度与WT组相比减弱,而RES组IBA-1、LC3B双染荧光强度较AD组增强。ELISA结果示与WT组相比,AD组IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4水平上升;与AD组相比,RES组IL-1β、IL-6、IL-18水平下降,IL-4水平上升。结论:1.小胶质细胞自噬在AD细胞及动物模型中高表达,在9月龄APP/PS1小鼠脑内最明显。2.Anon-immunosensing methodsMPK-mTOR-ULK1通路参与AD模型小胶质细胞自噬,并影响小胶质细胞MI/M2表型转化。3.白藜芦醇可激活AMPK-mTOR-ULK1通路,诱导小胶质细胞自噬并向M2表型转化,发挥抗炎作用。

背景:据有关报道显示,在我国强Biological a priori直性脊柱炎患病率约为0.2%～0.4%,其中青壮年占到80%左右,5年致残率为40%～60%。目前强直性脊柱炎的主要治疗方法以口服药物治疗为主,存在一定的不良反应,而临床中蜂针治疗AS疗效显著,但目前尚缺乏可靠的客观证据支持其确切的疗效。目的:本研究旨在通过Meta分析,根据有效率、BASDAI评分、BASFI评分、CRP、ESR及不良反应,系统评价蜂针疗法治疗强直性脊柱炎患者的有效性及安全性。方法:本研究使用”蜂针”、”蜂毒”、”强直性脊柱炎”等检索词,在8个电子数据库中检索2022年10月08日之前发表的中英文献。进行文献筛选、提取数据,并评估纳入试验的质量,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入8个随机对照试验,包括618例患者。Meta分析结果显示,试验组临床有效率优于单纯药物治疗组[RR=1.20,95%CI(1.10,1.32),P<0此网站.00001];试验组AS疾病活动指数(BAS购买NVP-TNKS656DAI)显著低于单纯药物治疗组[SMD=-0.77,95%CI(-1.00,-0.55),P<0.00001]。试验组AS功能指数(BASFI)显著低于单纯药物治疗组[SMD=-0.77,95%CI(-1.00,-0.55),P<0.00001];试验组血沉(ESR)显著低于单纯药物治疗组[SMD=-0.40,95%CI(-0.58,-0.23),P<0.00001];试验组C-反应蛋白(CRP)低于单纯药物治疗组[SMD=-0.24,95%CI(-0.46,-0.01),P=0.04<0.05];试验组不良反应显著低于单纯药物治疗组[RR=0.33,95%CI(0.19,0.55),P<0.00001]。结论:蜂针疗法在治疗强直性脊柱炎方面是安全有效的。蜂针疗法在提高有效率的同时,还可以改善患者BASDAI、BASFI评分,降低ESR、CRP炎症指标,提高患者生活质量,降低不良反应发生率。但因纳入研究质量较低、样本数量过少、研究间采用疗效指标不统一,本研究的研究结果提示,仍需更多高质量、大样本的RCT来验证蜂针治疗AS的疗效是否存在差异。