SRC信号通路

目的 分析糖尿病视网膜病变(DR)不同分期患者血清δ样蛋白4(DLL4)和环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)水平对微血管损伤的预测价值。方法 选择2020年2月—2023年2月收治的80例糖尿病患者为研究对象，依据DR不同分期分为无DR组(n=37)、非增生型DR组(n=19)和增生型DR组(n=24);检测血中DLL4及CREB水平，采用FACS Count流式细胞仪检测患者内皮祖细胞(EPC)、循环内皮细胞(CEC)及循环祖细胞(CPC)水平。结果 增生型DR组血中DLL4及CREB水平最高，无DR组DLL4及CREB水平最低，差异有统计学意义(P<0.05);不同DR分期与DLL4、CREB水平呈显著正相关(P<0.05);糖尿病患者血中高DLL4及高CREB水平是影响DR分期的独selleckchem Empagliflozin立危险因素(P<0.05)。增生型DR组血中EPC、CPC水平最低Brassinosteroid biosynthesis，CEC水平最高，无DR组EPC、CPC水平最高，CEC水平最低，差异均有统计学意义(P<0.05); DLL4、CREB水平与EPC、CPC水平呈显Laduviglusib著负相关(P<0.05), DLL4、CREB水平与CEC水平呈显著正相关(P<0.05); DLL4和CREB预测DR患者微血管损伤的曲线下面积(AUC)均大于0.85。结论 随着DR分期增加，患者血清DLL4和CREB水平呈显著升高趋势，且DLL4和CREB对其微血管损伤具有较高的预测价值。

目的:研究NKiller immunoglobulin-like receptorrf2/GPX4通路调控铁死亡在单侧输尿管梗阻模型(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠及慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)中对肾脏纤维化的作用,探究肾脏纤维化机制及潜在靶点。方法:1.动物实验中,采用SPF级6～8周龄雄性C57BL/6小鼠30只随机分为6组:假手术组、UUO模型组、Nrf2激动剂sulforaphane(SFN)组(25mg/(kg·d))、铁死亡抑制剂liproxstatin-1(Lip-1)组(10mg/(kg·d))、厄贝沙坦阳性药物组(20mg/(kg·d))、GPX4抑制剂GPX4-IN-3组(20mg/(kg·2d))。每组小鼠各5只,普通饲料喂养1周,后四组小鼠分别腹腔注射药物。检测小鼠超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。肾脏组织HE、Sirius Red染色观察小鼠肾脏病理形态。应用蛋白质印迹法(Western Blot)、实时荧光定量PCR法、免疫组化法检测小鼠肾脏组织纤粘蛋白(fibronectin,Fn)、胶原蛋白-Ⅰ(collagen-Ⅰ,Col-Ⅰ)、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、免疫组化法检测核因子红系相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)的表达。2.根据CKD患者肾穿标本回示结果分为低纤维化组及高纤维化组,收集患者肾穿标本石蜡白片,采用免疫组化法检测Nrf2、GPX4、α-SMA的表达水平。结果:1.动物实验中,与UUO模型组相比,SFN、Lip-1、厄贝沙坦组SOD表达增多,MDA、肾脏纤维化表达减少,而GPX4-IN-3组SOD表达减少,MDA及纤维化表达增多。SFN、Lip-1组肾脏组织中Nrf2、GPX4、SLC7A11表达水平高于对照组、GPX4-IN-3组(P<0.05)selleck HPLC,NOX4的表达水平低于对照组、GPX4-IN-3组(P<0.05)。2.免疫组化结果显示,低纤维化组患者肾脏组织石蜡切片α-SMA表达低于selleck抑制剂高纤维化组患者,GPX4、Nrf2表达高于高纤维化组患者。结论:在动物实验中,通过Nrf2/GPX4通路调控铁死亡可有效改善肾脏纤维化程度;在CKD患者中,肾脏的纤维化程度与Nrf2/GPX4的铁死亡靶点相关,为临床CKD抗纤维化提供依据。

目的 了解2017—2022年浙江省东阳市发热伴血小板减少综合征（SFTHigh-risk medicationsS）的流行特征，为SFTS防控工作提供依据。方法 通过中国疾病预防控制信息系统监测报告管理系统收集2017—2022年东阳市SFTS病例资料，描述性分析SFTS病例的流行特征及临床特征；采用年度变化百分比（APCompound CC）分析SFTS发病趋势。结果 2017—2022年东阳市报告SFTS病例32例，发病率为0.63/10万；死亡8例，病死率为25.00%;2017—2022年发病率呈上升趋势（APC=40.697%,P<0.05）。SFTS病例男女性别比为0.78∶1；职业以农民为主，31例占96.88%；发病年龄以51～<70岁为主，20例占62.50%。SFTS发病高峰期为3—5月和7—8月，28例占87.5Galunisertib0%。病例分布于全市18个乡镇（街道）中的11个，佐村镇病例数最多，9例占28.13%。血小板计数最低值为（41.46±5.19）×10~9/L，最低值范围为（3.00～67.00）×10~9/L。32例SFTS病例发病前2周均有山林、农田活动史；5例有明确的蜱叮咬史，占15.63%。结论 2017—2022年东阳市SFTS发病率呈上升趋势，春夏季高发，农民为主要发病人群。应加强重点地区居民SFTS健康教育。

<正>据Song X 2023年6月28日（Nature,2023 Jun 28. doi:10.1038/s41586-023-06265-4.）报道C59体内，中美研究人员发现，食物与健康之间存在一个关键中介，即组成机体微生物组的肠道菌群或与人类共生的微生物群落。揭示了细菌脂肪酸代谢通路通过调节CD4+T细胞和CD4+CWhole Genome SequencingD8αα+细胞之间的相对数量在控制宿主机体上皮内Alisertib纯度免疫平衡方面所扮演的关键角色和作用。研究人员在小鼠机体中进行的研究表明，肠道菌群能以诸如亚油酸等常见脂肪酸为食，并将其转化为共轭亚油酸（CLA）；随后这种副产物能作为一种生物级联信号，最终刺激特定类型的免疫系统发育并驻留在小肠组织中。在该项研究中，研究人员详细揭示了肠道微生物、食物和机体免疫力之间的错综复杂的相互作用，同时还强调了理解肠道中单一的微生物如何改变特定器官的功能并对健康产生重要影响的重要性。

背景:长非编码RNA(LncRNAs)是恶性肿瘤的预后因Medical genomics子,而N7-甲基鸟苷(m7G)在肿瘤的进展中扮演着重要的角色。然而,还没有文献记载m7G相关的lncRNAs如何预测乳腺癌(BC)的发展。本研究旨在开发一种基于与m7G相关的长非编码RNA(LncRNAs)的PF-02341066预测模型来预测乳腺癌患者的预后。方法:1.从癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取乳腺癌患者的RNA-Seq数据和匹配的临床信息。2.使用共表达网络分析、最小绝对收缩选择算子(LASSO)回归分析、单变量Cox回归分析和多变量Cox回归分析识别与N7-甲基鸟苷相关LncRNAs的特征并建立预后模型。3.进行Kaplan-Meier分析和绘制受试者工作特征(RO点击此处C)曲线对模型进行评估。4.使用诺模图和主成分分析(PCA)来确认预测模型的有效性。5.利用单样本基因集浓缩分析(SsGSEA)来研究高危和低危乳腺癌患者组中预测模型与肿瘤免疫微环境之间的相关性。6.检测高低风险组之间的药物敏感性。结果:1.9 个 m7G 相关的 lncRNAs(LINC01871、AP003469.4、Z68871.1、AC245297.3、EGOT、TFAP2A-AS1、AL136531.1、SEMA3B-AS1、AL606834.2)与乳腺癌患者的总生存时间(OS)独立相关。2.对于预测1、3和5年生存率,ROC曲线下面积分别为0.715、0.724和0.726。3.从Kaplan-Meier分析显示出来的结果,可以看出高危组乳腺癌患者预后较低危组差。4.多元回归分析表明,风险分数是乳腺癌显著的独立预后因素,且显著优于临床病理特征。5.ssGSEA分析显示,预测特征与乳腺癌患者的免疫状态显著相关,低风险组乳腺癌患者的免疫功能相较于高危组患者更为活跃,并且低危组乳腺癌患者对抗PD1/L1免疫治疗更敏感。结论:基于m7G相关lncRNAs的预后模型可以独立预测乳腺癌患者的预后并依据免疫治疗的反应情况,来为患者定制的治疗计划提供信息,并可用于指导乳腺癌患者的个体化治疗。

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的新冠肺炎疫情已经成为全球性灾难。尽管全球为了控制SARS-CoV-2传播和感染做出了巨大努力,但SARS-CoV-2变异株的不断出现,特别是具有极强传播能力的Omicron变异株的出现,对疫情防控带来了极大挑战。由于新型靶向抑制剂研发周期较长,SARS-CoV-2特效治疗性抑制剂至今依然寥寥无几。3-糜蛋白酶样蛋白酶(3CLpro)是SARS-CoV-2的主要蛋白水解酶,在其生命周期中发挥重要作用,且其基因序列高度保守、突变率低,已经成为SARS-CoV-2的研究热点。近来,已报道多种3CLpro活性评价体系和抑制剂筛选方法,但普遍存在易受非特异性化合物干扰和不适用于高通量筛选等问题。此外,不断出现CH-223191细胞培养SARS-CoV-2变异株的3CLpro突变也引发了人们对3CLpro抑制剂耐药性的担忧。因此,亟需开发出一种更加灵敏、可靠、简便的3CLpro活性检测方法,用于靶向抑制剂的筛选、鉴定及其3CLpro突变体抑制剂敏感性的检测。本研究基于3CLpro诱导的细胞毒性和报告基因表达抑制可被突变或抑制剂逆转的发现,建立了一种基于细胞的新型3CLpro活性检测方法,其利用正交双报告基因的信号增益检测可以定量、灵敏地检测细胞内3CLpro活性。利用该检测方法,阳性抑制剂GC376和PF-00835231表现出良好剂量依赖性的3CLpro抑制活性,而非3CLpro特异的细胞凋亡或焦亡通路抑制剂未表现出对3CLpro活性的抑制,表明宿主细胞死亡通路抑制剂不会在检测中造成干扰。进一步对来自骨架化合物库、天然产物化合物库和蛋白酶抑制剂化合物库的共计3785个化合物的高通量筛选,发现了3个命中化合物,均为已报道的3CLpro抑制剂。其中S-217622的3CLpGDC-0068试剂ro抑制活性最强,而Boceprevir和Z-FA-FMK仅有弱至中等的抑制活性。在45个已报道的3CLpro抑制剂中,除了PF-07321332、GC376和、PF-00835231,及上述3个命中化合物以外,其余39个化合物包括Ebselen和Masitinib,均未显示出3CLpro的抑制活性,提示了其可能并非3CLpro特异性的抑制剂。此外,我们还对7个广泛存在的SARS-CoV-2流行变异株的3CLpro突变体进行了活性和抑制剂敏感性的检测。结果显示,与野生型3CLpro相比,Omicron 3CLpro P132H突变体活性显著降低约31%,GC376、PF-00835231、S-217622和PF-073213327对7个突变体的IC_(50)值与其对野生型3CLpro的IC_(50)值相当或更低。然而,在其中3个突变体PF-07321322(P132H)和S-217622(G15S,T21I)剂量响应曲线的斜率降低,显示了其在高浓度时抑制活性的下降,提示了其可能与抑制剂敏感性改变有关。综上,本研究建立了一种基于正交双报告基因的信号增益的活细胞内3CLpro活性测定方法。相比已有报道的其它方法,该方法具有更好的可靠性、灵敏性和便捷性,可避免化合物非特异性的脱靶效应和来自化合物本身对的信号干扰。利用该方法我们开展了化合物库3CLpro抑制剂的鉴定和高通量筛选,并研究了3CLpro突变对其活性与抑制剂敏感性的影响。鉴于该方法所展现的实用性和多功能性,相信本研究将有nerve biopsy助于对3CLpro的进一步深入研究和新型3CLpro靶向抑制剂的研发。

目的 探讨食管癌旁组织多中心不典型增生的临床病理特征与淋巴细胞浸润的相关性。方法 对719例食管癌手术切除标本制作癌旁席卷包埋大组织切片(沿癌组织外缘纵行切取宽1 cm、长7～15 cm的癌旁组织，在黏膜下层和浅肌层间分离后，将黏膜层和黏膜下层作卷席状包埋)。每例制作3～4块席卷石蜡块，每个蜡块5μm厚连续切片，取5～10张切片，行HE染色和组织病理学观寻找更多察。结果 719例食管癌旁组织中非多中心食管上皮不典型增生2non-necrotizing soft tissue infection27例，占31.6%;多中心食管上皮不典型增生194例，占27.0%;多中心食管上皮不典型增生个数与淋巴细胞浸润的相关性分析显示：多中心食管上皮不典型NSC 119875临床试验增生个数与淋巴细胞浸润程度存在正向的弱相关(r=0.2,P<0.001)。结论 通过席卷包埋大切片发现食管癌旁组织中可见大量多中心不典型增生病灶，这或许是食管癌多中心癌变的来源；食管鳞状上皮不典型增生与淋巴细胞浸润之间存在正向相关性。

目的：探讨超声膀胱内前列腺突出度(IPP)对经尿道大禹刀前列腺剜除术的疗效及术后并发症的相关因素。方法：选取医院确诊的40例前列腺增生患者，根据术前超声IPP程度的不同将其分为显著组和对照组，每组20例。对比两组术后尿动力参数最大尿流率(Q_(max))、残余尿量(PVR)、国际前列腺症状评分(IPSS)、手术疗效以及术后并发症，分析超声膀胱内IPP与术后疗效及并发症的相关性。结果：显著组和对照Dorsomorphin组术后Q_(max)值均较术前有所升高，差异有统计学意义(selected prebiotic libraryt=7.882,t=6.755;P<0.05)，而PVR值较术前有所降低，差异有统计学意义(t=5.846,t=7.507;P<0.05)；但显著组与对照组Q_(max)值差异无统计学意义；显著组PVR值降低速度低于对照组，组间差异具有统计学意义(t=2.472,P<0.05)；显著组与对照组术后IPSS有所降低，与术前相比差异具有统计学意义(t=10.455,t=9.304;P<0.05)，但selleck RP56976术后IPSS评分差异无统计学意义；显著组手术后显效15例(占75.0%)，对照组显效17例(占85.0%)，显著组显效率低于对照组，但差异无统计学意义；超声IPP与IPSS评分和PVR呈正相关(r=0.387,r=0.1987;P<0.05)，与Q_(max)和疗效呈负相关性(r=-0.358,r=-0.249;P<0.05);IPP与尿路并发症的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为0.721，急性尿潴留AUC为0.620，肉眼血尿AUC为0.635，肾功能损害AUC为0.612，肾积水AUC为0.610，膀胱结石AUC为0.670。结论：经尿道大禹刀前列腺剜除术后并发症的发生随IPP的增加而增加，IPP可作为评估经尿道大禹刀前列腺剜除术的疗效和并发症预测的相关因素。

肉类,尤其是红肉,含有CB-839使用方法丰富的油脂和以血红素为辅基的肌红蛋白。红肉的消化过程不仅是油脂消化/乳化的过程,也是油脂/油脂乳液与血红素相互作用的过程。前期研究发现血红素可selleck产品以触发油脂乳液产生大量超氧阴离子自由基(·O_2~-),不仅造成了油脂乳液的破坏,还能造成细胞氧化应激和细胞毒性,提示了同时存在油脂乳液和血红素的食物体系可能带来的健康隐患。目前为止,红肉消化过程中血红素与油脂及消化产生的油脂乳液之间的相互作用尚未有研究报导。本研究采用体外模拟消化调查了红肉消化过程中血红素和油脂/油脂乳液的相互作用,以白肉作为对照进行比较,以探究该相互作用对体系自由基浓度、细胞氧化还原状态和细胞毒性等方面的影响。研究从调查红肉体外模拟消化液对巨噬细胞的影响着手,进而调查红肉消化液/油脂乳液体系产生的超氧自由基爆发现象及其对巨噬细胞的影响,建立油脂/血红素的消化/乳化体系,考察血红素对油脂乳化过程的影响等,以期获得红肉消化过程中血红素和油脂/油脂乳液相互作用较为全面的认知。主要实验研究结果如下:(1)通过胃肠道体外模拟消化,探究红肉和白肉消化物的差异,并对不同肉类体外模拟消化液对巨噬细胞造成的影响进行调查。结果显示,在细胞毒性、胞内自由基含量、细胞膜电位和线粒体自由基含量等指标上,红肉和白肉消化液均未表现出对巨噬细胞的明显影响,二者之间也无明显差异。(2)建立红肉消化液/油脂乳液体系,发现红肉体外模拟消化物和藻油乳液相互作用后,会出现体系内超氧自由基爆发的现象,自由基水平上升不仅造成油脂乳液的脂质过氧化,还能导致巨噬细胞的细胞毒性、胞内自由基水平和细胞膜电位均受到不良影响。而白肉消化物/藻油乳液体系则无此现象,但加入血红素后也同样能观测到超氧自由基爆发现象,这暗示着红肉消化物/藻油乳液体系造成的氧化应激与红肉中含有的血红素密切相关。此外,对红肉消化液/藻油乳液体系自由基释放过程的监控显示,该释放过程极为短暂,在体外模拟消化过程中可能出现“边爆发、边衰减”的现象,体外模拟消化串联细胞模型的方式并不能体现出真实消化过程中血红素与油脂乳液相互作用而带来对消化道黏膜相关细胞的氧化应激及后续损伤。(3)血红素/血红蛋白对油脂的乳化/消化过程均有明显的影响,表现为乳液分散性和稳定性变差、平均粒径显著增大、界面张力增大并造成界面蛋白Biopharmaceutical characterization含量降低,延长了油脂体外模拟肠阶段消化所需时间,会降低FFA释放速率,浓度高时还能降低脂肪液滴中三酰甘油分子的水解程度,影响油脂在消化形成的油脂乳液的形态、尺寸和ζ-电位。(4)在巨噬细胞模型中,血红素加入油脂消化液能使细胞胞内自由基浓度明显升高,且表现出明显的细胞毒性,而血红素/油脂共消化液则未显示胞内氧化应激和细胞毒性。对血红素/油脂共消化过程中体系自由基浓度的监测结果揭示,该体系的自由基释放呈现“低烈度”和“长时间”的特点,从而提前“释放”了体系自由基,消化结束后再外加血红素也不会出现自由基爆发。这个结果很好的解释了红肉或油脂/血红素体外消化物未能在巨噬细胞模型中表现出明显的氧化应激状态和细胞毒性的原因。在红肉的真实体内消化过程中,油脂的消化/乳化及其与血红素的相互作用过程均在小肠中完成,这低烈度长时间的自由基释放过程必然会对小肠黏膜相关细胞带来一定的影响。综上所述,本研究从血红素可以引发油水界面爆发超氧自由基的现象出发,考察肉类消化过程中,血红素与油脂乳液互作以及血红素/油脂共消化体系两个方面,为红白肉在消化过程中的差异提供新的研究角度及为评估红肉可能对人体存在潜在危害提供新视角。

生物污损对海洋生物资源开发活动造成严重危害,目前缓解海洋污损的涂料或材料大多会对海洋环境和生物造成损害。藤壶是海洋污损生物的代表性类群,也作为模型生物经过了多年研究。本文前期关于藤壶幼虫早期附着的机制相关研究,发现组胺D-Lin-MC3-DMA使用方法可能是诱导藤壶幼虫附着的信号分子之一,抗组胺化合物可抑制幼虫附着,从无节和金星幼虫体内分析鉴定出组胺,其含量随幼虫发育阶段不同而变化;另外,外源添加组胺和抗组胺处理,会导致金星幼虫体内基因在转录组水平上的表达出显著差异。在此基础上,本论文主要对组胺诱导藤壶幼虫早期附着机制进行研究,论文内容概括如下:(1)藤壶幼虫早期附着的初步研究。由于组胺是藤壶幼虫视觉系统的重要信号分子,本文检验了不同颜色的光对藤壶金星幼虫附着的影响。结果发现,绿光相比其他四种光质能够显著缩短金星幼体附着时间。外源添加组胺能够显著提高金星幼体附着率(P<0.05)。对组胺和抗组胺处理后的金星幼体体内转录水平上的基因表达进行聚类分析和Nr序列比对,结果显示藤壶水泥腺蛋白基因Aa-dscp19k在各处理组表达量出现显著差异,且和幼虫附着行为相一致。运用生物信息学工具对Aa-dscp19k进行结构分析和疏水性模拟,结果显示,Aa-dscp19k主体肽链疏水性氨基酸和亲水性氨基酸分布均匀,N端表现为强疏水性,C端表现为弱亲水性,中间肽段表现为强亲水性;其N端出现高占比的α螺旋结构,绝大多数结构表现为无规则卷曲和β片层。(2)藤壶水泥腺蛋白Aa-dscp19k的表达纯化与鉴定研究。通过控制和筛选培养条件,最终确定感受态细胞为大肠杆菌DE3细FUT-175研究购买胞、诱导温度29℃、IPTG终浓度0.8mM,可使Aa-dscp19k获得最优表达量。利用Ni柱亲和层析纯化,并梯度降低尿素浓度使蛋白复性,最终在洗脱液咪唑浓度为100mM时收集得到。纯化后的目的蛋白经质谱鉴定与得到的氨基酸序列有92%的重合率,蛋白分子量为47kDa,等电点为9.1。后续其储存条件实验发现,Aa-dscp19k在海水中会变成白色絮状物沉淀析出,但透析到PBS(pH 7.0,0.5MNaCl)中,溶液可保持澄清,即溶解状态。(3)藤壶水泥腺蛋白Aa-dscp19k自组装能力的表征。Aa-dscp19k是藤壶水泥腺蛋白,其主要的生物学功能是粘附性,所以,本文选择pH、盐度、NaCl浓度、金属离子、尿素浓度等环境条件因素进行实验,分别检测不同条件下,Aa-dscp19k的自组装能力和溶液极性的变化。实验结果表明,pH=3条件下,Aa-dscp19k自组装最剧烈;高盐度的海水中芘荧光强度降低速度快;单纯的NaCl溶液中,Aa-dscp19k自组装被阻碍;但单一添加不同金属离子对Aa-dscp19自组装能力影响也不大。所以,海水中较高的自组装速度的原因还需要进一步的研究。另外,尿素能够有效阻止Aa-dscp19k自组装进程。(4)藤壶幼虫体内组胺及其受体和水泥腺蛋白Aa-dscp19k的免疫荧光定位研究。利用免疫荧光定位技术,对于幼虫体内进行组胺的定位,在无节幼虫lichen symbiosis和金星幼体体内均未定位成功,这应该是因为小分子组胺在幼虫处理过程中流失。对于组胺受体的定位结果发现,在金星幼体的体内标记处一块肾形区域,与水泥腺形状相差不大。对于水泥腺蛋白Aa-dscp19k的定位,在金星幼体的体内定位到更大的一块区域,应是是水泥腺及其外围导管区域。综上所述,本文从分子机制方面研究了组胺与藤壶幼虫早期附着之间的关系,在转录组数据的基础上,进行了 Aa-dscp19k的纯化分离和体内体外生化实验,进一步验证了组胺参与调控藤壶幼虫早期附着的信号通路,Aa-dscp1 9k是藤壶水泥腺蛋白的重要成分,为阐释藤壶幼虫早期附着机制提供理论基础。