SRC信号通路

苹果果实硬度作为衡量果实内在品质的重要指标之一,不仅影响了果实适口性,还决定了果实贮运能力。目前果实发育过程中硬度的形成机制GSK1120212仍不清楚,细胞壁多糖的水解是果实发育过程中硬度下降的主要原因。木葡聚糖内糖基转移/水解酶(XTH)作为解聚细胞壁多糖的关键酶,对于调节果实硬度具有重要作用。因此,探究苹果发育期果实硬度及细胞壁组分变化规律,挖掘影响果实硬度的关键XTH基因,对于选育优良品种和提高果实商品价值具有重要意义。本研究以质地不同的12个苹果品种果实为材料,分析不同品种果实发育期的硬度、细胞壁组分变化规律及其相关性,确定影响果实硬度的主要细胞壁组分。基于课题组前期获得的果实发育期转录组数据筛选调控果实硬度的关键XTH基因,分析候选基因MdXTH2的表达特征,解析其在果实硬度形成中的重要功能。主要研究结果如下:1.12个品种发育初期硬度相近,但硬度下降速率的不同导致其成熟期硬度存在差异。细胞壁各组分含量在发育期间整体呈下降趋势。细胞壁物质、纤维素和半纤维素含量在不同品种中均与硬度显著正Empagliflozin说明书相关,总相关性系数分别为0.871、0.904和0.757,而果胶含量与硬度的相关性在不同品种中存在较大差异。因此,纤维素和半纤维素含量的减少是果实发育期硬度下降的普遍原因。2.通过分析发育期果实转录组数据中XTH基因的表达量,锁定可能调控果实硬度的候选基因MdXTH2,其在硬度较大的果实中的表达量更高,蛋白定位于细胞膜。3.利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术在苹果果实中瞬时沉默MdXTH2,分析其对果实硬度及果肉细胞的影burn infection响。结果显示果实果胶及细胞壁物质含量显著减少,细胞壁降解严重,同时果实硬度显著降低。而在苹果果实中瞬时过表达MdXTH2显著增加了各细胞壁组分含量,抑制了果实硬度的下降。此外,稳定遗传转化番茄及苹果‘王林’愈伤组织再次验证了其功能。过表达MdXTH2的转基因番茄在转色期、转色后7 d的硬度比野生型高20.5%和35.1%,同时果实不能正常转色。过表达MdXTH2延缓了愈伤组织的生长,转基因愈伤组织中半纤维素(0.785 mg/g FW)和共价结合型果胶(0.075mg/g FW)含量显著高于野生型,乙烯合成基因MdACS3a和果胶降解基因MdPME的表达受到抑制。结果表明过表达MdXTH2抑制了果实硬度的下降,延缓了果实成熟。

癌PLX5622症给人类的生命健康带来了极大的威胁。目前,治疗癌症仍是全人类的巨大难题。开发具有肿瘤靶向性和低毒性的有photobiomodulation (PBM)效治疗策略以控制肿瘤的生长、转移和复发,进而根除肿瘤,是对抗癌症的终极目标。近年来,无机纳米材料在纳米医学中取得了显著进展。其中,金属纳米材料具有独特的物理化学性质,表面易于修饰和连接各种功能基团,可使其同时具有治疗和诊断的功能,这为肿瘤的早期诊断和治疗提供了新的方法和思路。利用肿瘤组织特殊的微环境特点,将化学动力学治疗(CDT)与光热(PT)治疗(PTT)、化疗相结合,开发和构建了多功能的金属纳米体系,可同时发挥两者的协同作用和双重优势,实现高效的肿瘤杀伤。一方面,基于铜基纳米材料优异的类芬顿催化活性和光热性能,通过肿瘤特异性PLX-4720生产商靶向配体修饰实现靶向递送和酸响应性释放,最终实现肿瘤的CDT和PT的协同诊疗,开发了一种不依赖于化疗药物辅助的肿瘤治疗策略。另一方面,基于锰基纳米材料的类芬顿催化活性并利用仿生细胞膜作为药物递送载体,实现肿瘤化疗和CDT联合治疗,并克服肿瘤耐药问题。本研究工作包括以下四个部分的内容:1.我们通过微波一步合成法制备了铜钆氧(CGO)纳米簇,该纳米簇由铜单质、氧化铜和氧化钆组成。CGO具有丰富的多孔结构,且兼具优异的芬顿催化性能和PT性能。体外离子释放实验显示CGO具有pH响应性释放行为。通过修饰血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)识别环肽(PDGFB)赋予CGO肿瘤靶向能力,得到pH响应型的靶向纳米诊疗体系PDGFB-CGO。2.从细胞水平探究了 PDGFB-CGO纳米体系的抗肿瘤机制。实验结果表明,PDGFB-CGO能特异性识别肿瘤细胞,通过PDGFB/PDGFR-β的特异性结合启动受体介导的靶向内吞,其内吞机制主要与网格蛋白和小窝蛋白介导的内吞途径相关。抗肿瘤机理表明,PDGFB-CGO在肿瘤细胞中快速产生大量高活性的Cu(Ⅰ),通过类芬顿反应催化内源性过氧化氢(H202)转化为羟基自由基(·OH),实现高效的肿瘤CDT。另外,Cu(Ⅱ)在转变为Cu(Ⅰ)的过程中消耗了谷胱甘肽(GSH),使谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)失活,进一步提升了肿瘤细胞的氧化压力,增强CDT效果。当近红外激光照射后,光热作用不仅能够快速消融肿瘤,还能促进类芬顿催化速率,实现CDT和PT协同治疗。细胞实验结果显示,PDGFB-CGO可显著抑制肿瘤细胞的活力,对正常细胞的具有良好的生物相容性;PDGFB-CGO还能在体外抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭,其机制可能与抑制上皮间质转化(EMT)以及铜超载介导的抗肿瘤血管生成相关。3.从动物水平探究了 PDGFB-CGO纳米体系的抗癌活性。体内抗肿瘤实验结果证实,PDGFB-CGO具有优异的肿瘤靶向性能,显示出强大的CDT和PTT的联合抗肿瘤效果,且具有良好的生物安全性,提高小鼠生存率。与此同时,PDGFB-CGO作为铜供体,导致大量铜离子内流,通过打破铜稳态抑制EMT和肿瘤血管生成,进一步阻止了肿瘤细胞的生长和转移。通过建立实验性肺转移模型证实,PDGFB-CGO可有效抑制肿瘤细胞在肺组织的定植和转移。此外,PDGFB-CGO具有良好的T1成像性能,PDGFB-CGO的全身给药显著增强了小鼠肿瘤组织的T1加权信号,这将有助于癌症的精准诊断。该工作为癌症的精准诊疗提供新思路,为先进生物材料的开发提供了一个有前途的策略。4.探究了一种仿生锰基纳米药物递送平台BMMP-Mn2+/Se/DOX的抗癌机制。该纳米平台以膝氏假单胞菌细胞膜(BMMP)为纳米载体,通过Mn2+、超小纳米单质硒(Se)以及化疗药DOX的共递送实现对肿瘤细胞的高效杀伤。细胞实验结果显示,与红细胞膜(RCM)药物递送系统相比,BMMP-Mn2+/DOX具有更高的肿瘤细胞内化效率,以促进DOX的递送。在该纳米递送平台中,Se可激活SOD-1的表达,随后上调H2O2水平;释放出的Mn2+催化H2O2生成剧毒的.OH,诱导肿瘤细胞凋亡。此外,BMMP-Mn2+/Se纳米颗粒还能抑制GPX4的表达,进一步增加细胞内氧化压力。BMMP-Mn2+/Se/DOX表现出最低的IC50值,增强DOX的化疗效果,有效克服肿瘤细胞的耐药性。该研究为基于细胞膜的多模式肿瘤治疗平台的开发提供了借鉴。

癌PLX5622症给人类的生命健康带来了极大的威胁。目前,治疗癌症仍是全人类的巨大难题。开发具有肿瘤靶向性和低毒性的有photobiomodulation (PBM)效治疗策略以控制肿瘤的生长、转移和复发,进而根除肿瘤,是对抗癌症的终极目标。近年来,无机纳米材料在纳米医学中取得了显著进展。其中,金属纳米材料具有独特的物理化学性质,表面易于修饰和连接各种功能基团,可使其同时具有治疗和诊断的功能,这为肿瘤的早期诊断和治疗提供了新的方法和思路。利用肿瘤组织特殊的微环境特点,将化学动力学治疗(CDT)与光热(PT)治疗(PTT)、化疗相结合,开发和构建了多功能的金属纳米体系,可同时发挥两者的协同作用和双重优势,实现高效的肿瘤杀伤。一方面,基于铜基纳米材料优异的类芬顿催化活性和光热性能,通过肿瘤特异性PLX-4720生产商靶向配体修饰实现靶向递送和酸响应性释放,最终实现肿瘤的CDT和PT的协同诊疗,开发了一种不依赖于化疗药物辅助的肿瘤治疗策略。另一方面,基于锰基纳米材料的类芬顿催化活性并利用仿生细胞膜作为药物递送载体,实现肿瘤化疗和CDT联合治疗,并克服肿瘤耐药问题。本研究工作包括以下四个部分的内容:1.我们通过微波一步合成法制备了铜钆氧(CGO)纳米簇,该纳米簇由铜单质、氧化铜和氧化钆组成。CGO具有丰富的多孔结构,且兼具优异的芬顿催化性能和PT性能。体外离子释放实验显示CGO具有pH响应性释放行为。通过修饰血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)识别环肽(PDGFB)赋予CGO肿瘤靶向能力,得到pH响应型的靶向纳米诊疗体系PDGFB-CGO。2.从细胞水平探究了 PDGFB-CGO纳米体系的抗肿瘤机制。实验结果表明,PDGFB-CGO能特异性识别肿瘤细胞,通过PDGFB/PDGFR-β的特异性结合启动受体介导的靶向内吞,其内吞机制主要与网格蛋白和小窝蛋白介导的内吞途径相关。抗肿瘤机理表明,PDGFB-CGO在肿瘤细胞中快速产生大量高活性的Cu(Ⅰ),通过类芬顿反应催化内源性过氧化氢(H202)转化为羟基自由基(·OH),实现高效的肿瘤CDT。另外,Cu(Ⅱ)在转变为Cu(Ⅰ)的过程中消耗了谷胱甘肽(GSH),使谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)失活,进一步提升了肿瘤细胞的氧化压力,增强CDT效果。当近红外激光照射后,光热作用不仅能够快速消融肿瘤,还能促进类芬顿催化速率,实现CDT和PT协同治疗。细胞实验结果显示,PDGFB-CGO可显著抑制肿瘤细胞的活力,对正常细胞的具有良好的生物相容性;PDGFB-CGO还能在体外抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭,其机制可能与抑制上皮间质转化(EMT)以及铜超载介导的抗肿瘤血管生成相关。3.从动物水平探究了 PDGFB-CGO纳米体系的抗癌活性。体内抗肿瘤实验结果证实,PDGFB-CGO具有优异的肿瘤靶向性能,显示出强大的CDT和PTT的联合抗肿瘤效果,且具有良好的生物安全性,提高小鼠生存率。与此同时,PDGFB-CGO作为铜供体,导致大量铜离子内流,通过打破铜稳态抑制EMT和肿瘤血管生成,进一步阻止了肿瘤细胞的生长和转移。通过建立实验性肺转移模型证实,PDGFB-CGO可有效抑制肿瘤细胞在肺组织的定植和转移。此外,PDGFB-CGO具有良好的T1成像性能,PDGFB-CGO的全身给药显著增强了小鼠肿瘤组织的T1加权信号,这将有助于癌症的精准诊断。该工作为癌症的精准诊疗提供新思路,为先进生物材料的开发提供了一个有前途的策略。4.探究了一种仿生锰基纳米药物递送平台BMMP-Mn2+/Se/DOX的抗癌机制。该纳米平台以膝氏假单胞菌细胞膜(BMMP)为纳米载体,通过Mn2+、超小纳米单质硒(Se)以及化疗药DOX的共递送实现对肿瘤细胞的高效杀伤。细胞实验结果显示,与红细胞膜(RCM)药物递送系统相比,BMMP-Mn2+/DOX具有更高的肿瘤细胞内化效率,以促进DOX的递送。在该纳米递送平台中,Se可激活SOD-1的表达,随后上调H2O2水平;释放出的Mn2+催化H2O2生成剧毒的.OH,诱导肿瘤细胞凋亡。此外,BMMP-Mn2+/Se纳米颗粒还能抑制GPX4的表达,进一步增加细胞内氧化压力。BMMP-Mn2+/Se/DOX表现出最低的IC50值,增强DOX的化疗效果,有效克服肿瘤细胞的耐药性。该研究为基于细胞膜的多模式肿瘤治疗平台的开发提供了借鉴。

背景及目的:自身免疫性疾病是影响全球数百万人的免疫系统慢性疾病,严重时甚至会导致死亡。目前临床上的治疗方法往往很难做到根治疾病并且长期使用还会降低机体自身的免疫反应,增加感染和罹患癌症的风险。免疫耐受是防止免疫系统对自身发生反应的必要条件,通过靶向在抗原呈递细胞上和T细胞上表达的共刺激分子有望通过调节T细胞功能实现免疫耐受诱导,在自身免疫性疾病治疗中具有潜力。CD40广泛表达于抗原提呈细胞表面,与其配体CD40L组成的共刺激途径对于自身免疫性疾病中的T细胞激活至关重要,通过阻断CD40途径可以抑制过度的免疫反应实现免疫耐受。针对CD40L的抗体的开发由于在临床试验中引发血栓的发生而被停止。开发针对CD40途径的替代治疗方法至关重要。RNA干扰(RNAi)是指在生物体内通过攻击细胞中目标基因的m RNA导致基因表达沉默。引入外源性合成的小干扰RNA(siRNA),通过特定的碱基互补配对可以诱导RNAi发生,对疾病相关基因有特异性和高效的敲除作用。然而siRNA在体内面临细胞内吞效率低、易被核酸酶降解等难题,需要一个载体来保护并有效的将它们递送到目标细胞。纳米输运系统成为了一个理想的解决办法。纳米颗粒因为其灵活的尺寸、结构和可改变的表面修饰,在递送siRNA上显示出巨大潜力。已有研究证明利用PEG-PLGA纳米颗粒作为CD40siRNA的载体可以靶向抗原提呈细胞,诱导免疫耐受产生,在同种异体皮肤移植排斥实验和实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型中起到了治疗效果。但是单纯利用NPs/siCD40进行治疗疗效有限,需要联用免疫抑制剂或其他siRNA来提升治疗效果。研究表明在PEG末端进行马来酰亚胺官能团修饰,通过马来酰亚胺-巯基反应可以提高纳米颗粒在体内的循环时间和靶向能力,因此考虑能否通过对PEG-PLGA纳米颗粒进行马来酰亚胺官能团修饰提升纳米颗粒输运系统靶向递送siRNA效率,并提升对自身免疫性疾病的治疗效果。本研究的目的是通过马来酰亚胺官能团修饰优化纳米颗粒,提升纳米输运系统递送siRNA的效率和在体内和体外水平降低树突状细胞CD40表达水平的能力,提高对于EAE的治疗效果。研究方法:本研究首先通过双乳化法合成包载siRNA的Mal-PEG-PLGA纳米颗粒和PEG-PLGA纳米颗粒,应用动态光散射仪(dynamic light scatterer,DLS)对纳米颗粒的粒径和表面电势进行表征。将Mal-NPs/Cy5-siNC、NPs/Cy5-siNC与骨髓来源树突状细胞共培养,随后应用流式细胞术检测两种纳米颗粒在体外递送siRNA的能力。将Mal-NPs/siCD40、NPs/siCD40与DC1.2和RAW264.7细胞共培养,应用流式细胞术和q PCR检测细胞上CD40表达。C57BL/6小鼠尾静脉注射Mal-NPs/Cy5-siNC和NPs/Cy5-siNC,应用小动物活体成像仪检测纳米颗粒在小鼠体内的分布情况、应用流式细胞术检测纳米颗粒在外周血、脾脏、骨髓中DC和巨噬细胞中的分布情况。C57BL/6小鼠在尾静更多脉注射Mal-NPs/siCD40、NPs/siCD40后处死,分离骨髓细胞后体外诱导骨髓来源树突状细胞,使用LPS刺激,应用流式细胞术检测树突状细胞的比例和CD40表达水平。应用EAE小鼠模型验证Mal-NPs/siCD40的生物学效果。研究结果:1.通过双乳化法制备Mal-NPs/siCD40和NPs/siCD40,其粒径分别为149.33±3.57nm和95.34±3.75 nm,表面电势分别为37.4±0.79m V和37.7±0.70 m V。2.MTamoxifen体内实验剂量al-NPs/siCD40能够在体外向骨髓诱导树突状细胞递送siRNA,与NPs/siCD40相比,Mal-NPs/siCD40在体外沉默细胞CD40表达的能力更强。3.与NPs/Cy5-siNC相比,Mal-NPs/Cy5-siNC在小鼠主要脏器,以及小鼠DC和巨噬细胞中富集更高。4.与NPs/siCD40相比,Mal-NPs/siCD40抑制骨髓细胞分化和沉默CD40表达的能力更强。5.与NPs/siCD40相比,Mal-NPs/siCD40对于EAE模型的治疗效果更好。结论:本研究利用双乳化法成功制备包载siRNA的马来酰亚胺修饰的PEG-PLGA纳米颗粒(Mal-NPsMedical organization/siCD40)。马来酰亚胺修饰增强PLGA纳米颗粒在小鼠主要脏器中的富集,并提高靶向树突状细胞和巨噬细胞递送siRNA的效率。马来酰亚胺修饰提高NPs/siCD40沉默树突状细胞中CD40表达的能力,并在EAE模型中取得更好地疗效。

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的原发性肝癌类型,严重危害着人们的健康,是世界公共卫生的重大负担。近年来,乙型肝炎病毒(HBV)感染,丙型肝炎病毒(HCV)感染、大量饮酒、黄曲毒素和肥胖是引起HCC的主要诱因。其主要治疗方式包括:手术治疗、介入治疗、抗肿瘤药物治疗、免疫治疗和射频消融等,但是HCC患者的预后仍不能让人满意,因此寻找新的HCC预后预测生物标志物和治疗靶点具有重大意义。铁死亡(Ferro此网站ptosis)是一种新的不同于凋亡、坏死和自噬的铁依赖性的程序性细胞死亡形式。大量文献报道,铁死亡在肿瘤中发挥着重要作用,已经证明诱导HCC发生铁死亡能够抑制HCC的进展,并且能够逆转HCC耐药,为HCC的治疗提供了新的方向,有助于提高HCC患者的生存质量。脱氧胞苷三磷酸焦磷酸酶 1(deoxycytidine triphosphate pyrophosphatase 1,DCTPP1)可以通过调节dCTP的代谢,促进DNA的整体低甲基化,维持DNA复制的稳定性,并且其在多种肿瘤中表达上调,与肿瘤的不良预后和治疗耐药有关,已被证明能促进乳腺癌的进展,降低卵巢癌和胃癌对化疗药物的敏感性。然而,DCTPP1在HCC中的作用仍不明确。在这里,我们报道了 DCTPP1可以通过调节HCC细胞的铁死亡参与HCC的进展。DCTPP1在HCC样本中表达上调,并与HCC患者的总体生存(Overall Survival,OS)和无复发生存(Recurrence Free Survival,RFS)相关。在机制上,敲低DCTPP1通过促进BOLTBI biomarkerA2B(BOLA family member 2B)启动子CPG岛的高甲基化水平,从而抑制BOLA2B的表达,而BOLA2B表达水平下降可导致SPOPL(Speckle Type BTB/POZ Protein Like)表达水平升高。SPOPL与Cullin3形成E3泛素连接酶复合物,增加谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)的泛素化降解,最终导致HCC铁死亡的发生,从而抑制HCC的进展。在HCC组织中,DCTPP1、BOLA2B和GPX4的表达水平呈正相关,并且DCTPP1的表达水平是HCC患者OS和RFS的独立危险因素。我们的研究发现DCTPP1下selleckchem Ferrostatin-1调通过BOLA2B/SPOPL/Cullin3轴促进GPX4泛素化降解,从而诱导HCC铁死亡,抑制HCC的增殖、迁移和侵袭等生物学进程。而DCTPP1抑制剂boronate 30治疗可以有效抑制HCC的进展。这些数据表明DCTPP1是HCC的潜在治疗靶点,boronate 30可能是HCC的潜在治疗药物,为HCC的治疗提供了新的思路。

目的 探duck hepatitis A virus讨低分子肝素对下肢创伤患者术后住院期间下肢深静脉血栓的预防作用。方法 收集2019年6月至2022年6月于沧州市人民医院住院接受手术治疗的102例下肢创伤患者的临床资料，按照住院期间是否采用低selleck合成分子肝素治疗分为治疗组（n=49）和对照组（n=53）。比较两组患者的手术相关指标，包括手术时间、麻醉方式、术中出血量。比较两组患者住院期间D-二聚体水平及下肢深静脉血栓发生情况。结果 两组患者全身麻醉情况、手术时间、术中出血量比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）。术后，治疗组患者D-二聚体水平、D-二聚体水平升高（﹥0.5 mg/L）比例均低于对照组患者，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。治疗组患者下肢深静脉血栓发生率低于对照组患者，差异有统计学意义（P﹤0.0GSK1265）。两组患者均未发生其他明显出血事件。结论 低分子肝素可有效降低下肢创伤患者术后住院期间发生下肢深静脉血栓的风险，值得临床推广。

锰超氧化物歧化酶（MnSOD）催化两分子超氧自由基歧化为分子氧和过氧化氢。超氧自由基被Mn~(3+)SOD氧化成分子氧的反应以扩散的方式进行。超氧自由基被Mn~(2+)SOD还原为过氧化氢的反应以快循环和慢循环两条途径平行进行。在慢循环途径中，Mn~(2+)SOD与超氧自由基形成产物抑制复合物，然后该复合物被质子化而缓慢释放出过氧化selleck HPLC氢。在快循环途径中，超氧自由基直接被Mn~(2+)SOD转化为产物过氧化氢，快速循环有利于酶的复活与周转。本文提出温度是调节锰超氧化物歧化酶进入慢速或者快速循环催化途径的关键因素。随着在生理温度范围内的温度升高，慢速循环成为整个催化反应的主流，因而生理范围内的温度升高反而抑制该酶的活性。锰超氧化物歧化酶的双相酶促动力学特性可以用该酶保守活性中心的温度依赖性配位模型进行合理化解释。当温度降低时，1个水分子（或者OH~-）接近Mn、甚至与Mn形成配位键，从而干扰超氧自由基与Mn形成配位键而避免形成产物抑制。因此在低温下该酶促反应主要在快循环通路中进行。最后阐Canagliflozin使用方法述了几种化学修饰模式对该酶的调节，说明锰超氧化物歧化酶受到多种形式的快速调节（变构调节与化学修饰）。这些快速调节直接改变酶的活化状态，进而调节细胞中超氧自由基和过氧化氢的平衡与流量，为揭示锰超qatar biobank氧化物歧化酶和超氧自由基的生理作用提供新理论。

为提高核桃的附加值，以核桃粕为原料，将核桃谷蛋白多肽与锌进行螯合，利用扫描电子显AG-221研究购买微镜、傅里叶红外光谱、X-射线衍射光谱等分析手段表征多肽与锌离子的螯合特征，并通过超滤、凝胶柱层析、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术筛选出与锌结合能力较高的肽段，结合分子对接技术探究二者的具体结合位点和结合能力。结果表明，核桃谷蛋白多肽与锌离子发生了螯合反应，螯合前后多肽的表面微观结构和结晶程度均有显著差异；经超滤、凝胶柱层析分离后，F41组Non-cross-linked biological mesh分螯合能力最高为117.43±1.99 mg/g；LC-MS/MS结合虚拟筛选得到5条无毒无潜在致敏性且具有潜在生物活性的肽段；利用分子对接技术模拟分析肽锌螯合物的结合过程，发现五肽Phe-Asp-Ala-Asp-Phe（FDADF）可与锌离子形成结构稳定的复合物，通过配位键、氢键和疏水相互作用结合，结合能最低为-7.273-MA化学结构 kcal/mol，结合位点主要为天冬氨酸Asp侧链的羧基氧原子（Asp4:O-Zn）。本研究可为肽锌螯合物的开发应用提供理论依据。

目的:骨肉瘤多发于儿童和青少年,其恶性程度高,预后较差。手术切除肿瘤加新辅助化疗是目前骨肉瘤治疗的标准方案,顺铂、阿霉素和甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)是骨肉瘤的一线化疗药物。长期化疗特别是大剂量应用MTX导致的化疗耐药严重影响骨肉瘤患者的预后。因此,寻找新的治疗靶点,探究导致骨肉瘤化疗耐药的内在机制,是改善骨肉瘤化疗耐药问题的关键。自噬是细胞内降解和清除受损的细胞器和错误折叠的蛋白,从而维持细胞内稳态的过程。研究发现,自噬在肿瘤细胞化疗耐药方面具有十分重要的作用,抑制自噬是克服肿瘤细胞化疗耐药的重要策略。叉头盒M1(Forkhead box M1,FOXM1)是一种与细胞增殖相关的转录因子,其广泛参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学性状。研究表明,FOXM1在骨肉瘤细胞中高表达,但其在骨肉瘤细胞对MTX耐药中所起的作用及其机制仍不清楚。本研究旨在探讨FOXM1在骨肉瘤细胞MTX耐药过程中的作用,并进一步探究FOXM1导致骨肉瘤细胞MTX耐药的分子机制。方法:本研究使用两种骨肉瘤细胞系U-2OS、143B和成骨细胞h FOB1.19来探究FOXM1在骨肉瘤MTX耐药中的作用及其分子机制。本研究按照如下思路进行:1.免疫组化和Western blot分别检测骨肉瘤组织和细胞中FOXM1的表达情况;通过TARGET数据库分析FOXM1表达与骨肉瘤患者总生存率之间的关系。2.使用R语言包分析GEO数据库中MTX耐药细胞和敏感细胞中FOXM1的表达情况;通过浓度梯度冲击法建立骨肉瘤MTX耐药细胞,并使用CCK8法检测耐药细胞的IC_(50)值;通过Western blot检测MTX耐药细胞和敏感细胞中FOXM1蛋白的表达。3.使用Western blot和RT-q PCR实验分别检测MTX处理后,骨肉瘤细胞中FOXM1蛋白和m RNA的表达水平。4.使用慢病毒载体构建FOXM1稳定敲低和过表达FOXM1的骨肉瘤细胞,使用Western blot和RT-q PCR实验分别验证转染效率。5.使用CCK-8实验、流式细胞术和Western blot实验检测过表达和敲低FOXM1的骨肉瘤细胞在MTX化疗后细胞的增殖能力、凋亡率和Cleaved-caspase3和Bax蛋白的表达水平。6.使用Western blot和免疫荧光实验检测过表达和敲低FOXM1的骨肉瘤细胞在MTX化疗后细胞内LC3B蛋白的表达情况。7.使用流式细胞术检测过表达FOXMselleck DS-32011的骨肉瘤细胞经MTX和CQ(氯喹,Chloroquine)处理后细胞的凋亡情况。8.使用免疫共沉淀实验检测FOXM1蛋白与HMMR(透明质酸介导的运动受体,Hyaluronan mediated motility receptor)蛋白的相互作用关系;通过Western blot实验检测敲低FOXM1的骨肉瘤细胞中HMMR蛋白的表达情况。9点击此处.使用流式细胞术检测在MTX化疗后,过表达HMMR对敲低FOXM1的骨肉瘤细胞凋亡率的影响。10.通过Western blot实验检测FOXM1参与调控自噬的下游蛋白ATG7(自噬相关蛋白7,autophagy related 7 homolog)的表达情况,以及检测FOXM1与HMMR对ATG7表达的影响。11.裸鼠皮下成瘤实验检测敲低FOXM1的骨肉瘤细胞在体内对MTX敏感性的影响。12.使用TUNEL荧光染色和LC3B免疫荧光染色,检测各组小鼠肿瘤组织中细胞的凋亡情况以及LC3B的表达情况。结果:1.免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,肿瘤组织中FOXM1高表达;Western blot结果显示,与h FOB1.19细胞相比,骨肉瘤细胞中FOXM1蛋白表达明显升高;TARGET数据库分析显示,FOXM1的表达与骨肉瘤患者的总生存率呈负相关。2.GEO数据库分析结果显示,耐药细胞中FOXM1表达高于敏感细胞;CCK-8结果显示,耐药细胞的IC_(50)值大于敏感细胞的IC_(50)值4倍,耐药细胞具有耐药性;Western blot结果显示,耐药细胞中FOXM1表达明显高于敏感细胞。3.Western blot结果显示,经MTX处理后,FOXM1蛋白的表达明显升高,且具有浓度依赖性和时间依赖性;RT-q PCR结果显示,经MTX处理后,FOXM1 m RNA的表达水平逐渐升高。4.Western blot和RT-q PCR结果显示,敲低FOXM1和过表达FOXM1的骨肉瘤细胞中FOXM1蛋白和m RNA的表达水平被明显下调和上调。5.CCK-8结果显示,过表达FOXM1增强了MTX化疗后骨肉瘤细胞的增殖能力,而敲低FOXM1降低了MTX化疗后骨肉瘤细胞的增殖能力;流式细胞术结果显示,过表urinary metabolite biomarkers达FOXM1降低了MTX化疗后骨肉瘤细胞的凋亡率,而敲低FOXM1则增加了MTX化疗后骨肉瘤细胞的凋亡率;此外,Western blot结果显示,在MTX化疗后,过表达FOXM1促进了骨肉瘤细胞中Cleaved-caspase3和Bax蛋白的表达水平,而敲低FOXM1则降低了骨肉瘤细胞中Cleaved-caspase3和Bax蛋白的表达水平。6.Western blot结果显示,过表达FOXM1促进了骨肉瘤细胞MTX化疗时的自噬水平,而敲低FOXM1则降低了骨肉瘤细胞MTX化疗时的自噬水平;此外,免疫荧光结果显示,过表达FOXM1增加了MTX化疗时骨肉瘤细胞内LC3B荧光蛋白的表达,而敲低FOXM1则降低了MTX化疗时骨肉瘤细胞内LC3B荧光蛋白的表达。7.流式细胞结果显示,抑制自噬增加了过表达FOXM1的骨肉瘤细胞在MTX化疗后细胞的凋亡率。8.免疫共沉淀结果显示,FOXM1与HMMR存在相互作用关系;Western blot结果显示,FOXM1蛋白正向调控HMMR蛋白的表达。9.流式细胞术结果显示,在骨肉瘤细胞MTX化疗时,过表达HMMR逆转了敲低FOXM1导致的细胞凋亡率增加。10.Western blot结果显示,在骨肉瘤细胞MTX化疗时,敲低FOXM1降低了细胞中ATG7、LC3-Ⅱ蛋白的表达水平,而过表达HMMR后则逆转了ATG7、LC3-Ⅱ蛋白的表达水平。11.裸鼠皮下成瘤实验结果显示,敲低FOXM1的小鼠体内肿瘤的生长速度更慢,肿瘤体积更小,对MTX的敏感性高于对照组。12.肿瘤组织TUNEL染色和免疫荧光结果显示,在同时给与小鼠MTX化疗后,敲低FOXM1的小鼠肿瘤组织中凋亡细胞的比例明显高于对照组,LC3B绿色荧光蛋白的表达低于对照组。结论:FOXM1通过调控HMMR-ATG7轴诱导自噬从而导致骨肉瘤细胞对MTX产生耐药性。这对于MTX耐药的患者来说,使用FOXM1抑制剂可能是解决目前骨肉瘤化疗耐药的一种关键策略。

目的探讨痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜的保护作用。方法大鼠随机分为空白组，模型组，美沙拉嗪组（0.4MDV3100生产商g/kg），痛泻要方高、中、低剂量组（20.8、10.4、5.2g/kg），采取DNBS/乙醇溶液灌肠法+束缚应激法+饮食失节法建立动物模型。ELISA法检测血清TNF-α、IL-8水平，HE染色观察结肠病理变化，RT-qPCR、WesternblotIDN-6556和免疫组infections: pneumonia化法检测TLR4、MyD88、NF-κBp65mRNA及蛋白表达。结果与模型组比较，美沙拉嗪组与痛泻要方各剂量组大鼠TNF-α、IL-8水平降低（P＜0.05，P＜0.01），MyD88、NF-κBp65mRNA及蛋白表达降低（P＜0.05，P＜0.01），美沙拉嗪组与痛泻要方高、中剂量组大鼠TLR4mRNA及蛋白表达降低（P＜0.05，P＜0.01），痛泻要方低剂量组大鼠TLR4蛋白表达降低（P＜0.05）。结论痛泻要方可能通过调控大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，抑制机体炎症反应，修复肠黏膜屏障损伤。