SRC信号通路

目的 观察针刺对慢性肌筋膜疼痛(MPS)模型大鼠痛阈值的影响，分析针刺治疗MPS的潜在病理生理机制是否与细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白有关。方法 随机将24只雄性SD大鼠分为对照组、MPS组、阳陵泉(GB34)组和肌筋膜触发点(MTrPs)组，每组6只。对照组正常喂养，MPS组、GB34组和MTrPs组采用钝性打击SD大鼠左侧腓肠肌结合离strip test immunoassay心运动的方式建立MPS模型，期间对大鼠进行8周造模干预和4周的恢复期。造模完成后，分别对GB34组和MTrPs组大鼠左下肢阳陵泉穴和触发点进行电针干预，电流强度以大鼠左下肢轻微震颤为宜，留针15min, 1次/d,连续7d。结果 MPS组大鼠腓肠肌形态发生改变，病理横切面可见大小不等的圆形肌纤维，纵切面可见粗细相间的梭形肌纤维。针刺治疗可提高大鼠机械缩足阈值和热缩足潜伏期，并降低MTrPs周围损伤肌纤维中ERK、p-ERK和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。此外，治疗后MTrPs周围炎性细胞减少，血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平降低。结论 针刺治疗可改善大鼠Mirdametinib作用机械缩足阈值和热缩足selleck NMR潜伏期，针刺触发点效果优于传统穴位，可能与改变局部ERK蛋白激酶表达有关。

[目的]本试验旨在探讨Streptochlorin对金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）感染引起小鼠乳腺上皮细胞氧化应激的影响及机制。[方法]采用Streptochlorin预处理小鼠乳腺上皮细胞Naporafenib浓度（EpH4-Ev）2h，适时加入S.aureus（MOI=10）共孵育4h，收集样品；通过CCK-8、倒置荧光显微镜观察、生化试剂盒、Westernblot、RT-PCR等方法检测相关指标，辅以计算机分子对接技术。[结果]发现20μmol/LStreptochlorin预处理能够明显改善S.aureus侵袭导致的乳腺上皮细胞排列紊乱、皱缩等形态改变，降低细胞上清损伤标志物乳酸脱氢酶（LDH）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）的分泌以及肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）等经典炎性细胞因子的基因的表达（P<0.05），此外，Streptochlorin预处理后显著降低乳腺上皮细胞胞内活性氧（ROS）水平、提高细胞总抗氧化能力（T-AOC）能力、降低丙二醛（MDA）蓄积（P<0.05）。Westernblot检测以及分子对接结果初步证明，StreptE7080ochlorin可能通过keap1-Nrf2信号通路，促进下游分子血红素加氧酶1（HO-1）、NAD(P)H:醌氧化还原酶1（NQO1）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）的基因表达发挥抗氧化作用（P<0.05）。[结论]Streptochlorin对S. aureus感染小鼠乳腺上皮细胞诱发的的氧化应激和炎症反应具有显著的保护作用，这可能与Keap-NrfHepatocyte growth2信号通路的激活有关。

目的 网络药理学探讨人参防治阿尔茨海默病(AD)的物质基础及作用机制。方法 通过中药系统药理学分析数据库(TCMSP)及文献检索获取人参防治AD的活性成分及其相关作用靶点；Cytoscape3.9.0构建蛋白与蛋白相互作用(PPI)网络、药物-靶标-疾病网络，运用DAVID数据库进行GO和KEGG分析。结果 经网络药理学分析筛选得到脱氧三尖杉Infection Control酯碱、吉九里香碱、五味子酯乙及人参二醇等17个活性成分，获取STAT3、MAPK3、JAK1、TYK2及MAP2K1等387个药物-疾病共同作用靶点。GO分析发现这些靶点主要涉及蛋白质磷MG132临床试验酸化等999条生物学过程、质膜等138个细selleckchem胞组分及蛋白激酶活性等245个分子功能；KEGG分析显示上述靶点主要富集于神经活性配体-受体相互作用、癌症的途径及钙信号等167条生物学通路。结论 本研究揭示了人参活性成分以协同方式多靶点、多途径防治AD的作用机制，可为临床安全有效用药提供重要依据。

目的 研究郑州地区冠心Torin 1抑制剂病心绞痛患者情绪障碍情况，并分析其相关影响因素。方法 2020年12月—2021年12月通过便利抽样的方法抽取在郑州大学第一附属医院住院治疗的223例经确诊为冠心病心绞痛患者为研究对象，采用焦虑自评量表(SAS)与抑郁自评量表(SDS)分析冠心病心绞痛患者情绪障碍情况，采用logistic回归模型，分析影响冠心病心绞痛患者情绪障碍的相关因素。结果 被调查的223例冠心病心绞痛患者中，共28例常存在焦虑情绪(12.56%),35例存在抑郁情绪(15.7Dorsomorphin浓度0%)。Logistic多因素回归分析提示，女性（OR=1.545,95%CI:1.224～1.951）、吸烟史（OR=3.804,95%CI:1.938～7.465）、高血压史（OR=3.404,95%CI:1.451～7.985）及糖尿病史（OR=2.872,95%CI:1.601～5.150）均是影响冠心病心绞痛患者焦虑情况的独立危险因素。女性（OR=2.361,95%CI:1.516～3.676）、年龄≥60岁（OR=2.177,95%CI:1.318～3.596）及糖尿病史（OR=2.008,95%CI:1.541～2.616）animal models of filovirus infection是影响冠心病心绞痛患者抑郁情况的独立危险因素。结论 郑州地区冠心病心绞痛患者焦虑、抑郁发生率分别为12.56%与15.70%，性别、年龄、吸烟史、高血压史及糖尿病史被证实为影响冠心病心绞痛患者焦虑及抑郁的相关因素。

目的：运用网络药理学及分子对接技术探讨连翘治疗痤疮的作用机制。方法：利用GeneCards、OMIM和NCBI数据库收集相关的痤疮靶点，并通过中药系统药理数据库和分析平台（TCMSP）检索连翘的有效成分。利用Swiss Target Prediction 数据库获取连翘活性成分的靶点。将痤疮相关靶点与连翘活性成分靶点取交集即为治疗痤疮的潜在连翘靶点，利用STRING数据库构建目标的蛋白质相互作用网络，并将结果导入Cytoscape 3.7.1软件进行拓扑分析，提取核心靶点。运用DAVID数据库对核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，构建“活性成分-核心靶点-通路”网络，并进行拓扑分析，筛选得到核心成分和核心靶点。通过使用AutoDock Vina进行分子对接验证核心成分和核心靶点的相互作用。结果：共获得连翘活性成分19个，对应靶点509个，疾病靶点1 561个，共有靶点89个，经过蛋白互作及拓扑分析，得到核心靶点16个，核心靶点涉及681点击此处个基因功能条目和160条通路(P＜0.05)。将“活性成分-核心靶点-通路”网络图进行拓扑分析，共筛选出槲皮素、木犀草素、汉黄芩素及山柰酚等16个活性成分，以及前列腺素氧化环化酶2（Prostaglandin-Endoperoxide Synthase 2，PTGS2），RELA癌基因（RELA Proto-OncDNA Methyltransferas抑制剂ogene， NF-KB Subunit，RELA），肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor， TNF)，过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma，PPARG)，白细胞介素-6(Interleukin-growth medium6，IL-6)，JUN原癌基因（Jun Proto-Oncogene， JUN），白细胞介素-8（Interleukin 8， CXCL8）等16个关键靶点。结论：连翘治疗痤疮具有多成分、多靶点和多通路的作用特点，连翘活性成分可能调节PTGS2，RELA，TNF，PPARG，IL-6，JUN，CXCL8等蛋白的表达，实现治疗痤疮的作用。

目的:探讨抗肾小球基底膜(GBM)病合并膜性肾病(MN)的疾病特征以及利妥昔单抗治疗抗GBM病的疗效。方法:报道利妥昔单抗治疗抗GBM病合并MN患者1例，并对已发表的合并两种疾病的病例报道以及利妥昔单抗治疗抗GBM病的文献进行总结分析。结果:本例患者在血浆置换联合激素、环磷酰胺治疗抗GBM病后，血肌酐Angioimmunoblastic T cell lymphoma从最高峰1 161μmol/L降至240μmol/L并成功摆脱透析，因抗GBM抗体持续阳性，加用利妥昔单抗治疗后抗体转阴。肾功能好转后新发大量蛋白尿，重复肾活检提示可能与继发于抗GBM病的MN有关。检索PubMed发现继发于抗GBM病的MN全世界仅有6例报道，均为青少年，肾脏预后总体较好。检索PubMed发现利妥昔单抗治疗抗GBM病有31例病例报道，基线存在严重肾损伤的患者确认细节使用利妥昔单抗治疗并不一定能逆转肾功能，但可有效清除致病性抗GBMselleckchem KD025抗体。结论:抗GBM病经血浆置换、激素、环磷酰胺等标准治疗后抗体仍不转阴时，应用利妥昔单抗可有效清除抗体。重复肾活检表明抗GBM病治疗有效、肾功能好转的同时新发大量蛋白尿提示可能存在继发于抗GBM病的MN。

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染与一系列消化道疾病有关,并且是胃癌的Ⅰ类致癌物,对公共卫生健康造成了巨大的威胁。多年来由于抗生素的大规模和不合理使用,使得幽门螺杆菌耐药率越来越高,因此需要采用更精确和更具有成本效益的方法检测抗生素的耐药情况,以达到幽门螺杆菌的首次根除率达到首战告捷的目标。幽门螺杆菌主要定植于宿主胃黏膜上皮细胞,会由于食管反流和自然排泄同时存在于口腔和粪便中。相比于唾液中幽门螺杆菌含量低和胃黏膜取样不便,作colon biopsy culture为一种非侵入性的检测方式,利用粪便样本进行幽门螺杆菌基因检测正受到临床的高度关注。因粪便中幽门螺杆菌的含量极低及其DNA片段化,并含有大量其他种类细菌和抑制剂等因素,在基因检测方面存在一定的难度。PBP1在幽门螺杆菌中突变率较高,虽然个别突变或突变组合可能导致阿莫西林的耐药,但如何指导临床用药尚无确切结论。另外,国人幽门螺杆菌rdx A耐药突变率很高,而利福霉素类药物在国内未用于幽门螺杆菌根除治疗。有鉴于此,本研究选择了23S r RNA、gyr A、16S r RNA、por D和oor D基因进行了粪便样本幽门螺杆菌耐药突变检测研究。本研究使用两步法巢式PCR联合一代测序技术检测粪便样本中的幽门螺杆菌耐药突变,分析其诊断性能。在此基础上,进一步使用多重PCR扩增子靶向测序技术,探索新一代测序(next-generation sequencing,NGS)在检测粪便样本中幽门螺杆菌耐药突变的可行性。主要的研究结果如下:1.通过比较市售的三种粪便DNA提取试剂盒的提取效果,发现Magen试剂盒更适合用于粪便样本中DNA获悉更多的提取。2.利用巢式PCR联合一代测序技术,在135例粪便样本中,共检测出63例样本携带幽门螺杆菌,阳性率为46.67%。幽门螺杆菌23S r RNA、gyr A、16S r RNA的耐药突变率分别为65.08%、38.10%和9.52%,呋喃唑酮耐药突变率为37.93%(por D和oor D共突变)。本研究的抗生素耐药突变率总体偏高,可能是研究样本量较少,系样本选择偏差所导致,需要进一步扩大样本研究确认。3.为了评估巢式PCR联合一代测序对于幽门螺杆菌的诊断性能,以~(13)C呼气试验和粪便幽门螺杆菌抗原检测作为对比,对一致性检验指标(Kappa)和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线进行分析,发现23S r RNA、LGK-974体内gyr A、16S r RNA、por D和oor D基因的Kappa值均大于0.830,ROC曲线下与坐标轴围成的面积(area under curve,AUC)值均大于0.910,提示巢式PCR联合一代测序具有很好的诊断性能。4.通过多重PCR扩增子靶向测序均能成功检出63例幽门螺杆菌阳性粪便样本中的23S r RNA、gyr A、16S r RNA、por D和oor D基因,检测灵敏度高于巢式PCR联合一代测序技术。23S r RNA、gyr A耐药突变率高达74.60%和47.62%,四环素16S r RNA与呋喃唑酮的耐药突变率分别为9.52%和34.92%。5.为了探究多重PCR扩增子靶向测序用于粪便中幽门螺杆菌耐药突变的可行性,与巢式PCR联合一代测序的耐药突变结果进行比较。与一代测序比较,扩增子靶向测序能灵敏地检测出低等位基因频率的耐药突变,这也是两者检测结果不一致的主要原因。并且随着等位基因频率的升高,两者检测结果的一致性也在不断升高。23S r RNA、gyr A、16S r RNA、por D和oor D基因的Kappa值均大于0.747,AUC值均大于0.875。NGS粪便幽门螺杆菌耐药基因检测具有很高的诊断价值,可以作为幽门螺杆菌感染患者的新型非侵入性检测方法,为临床上幽门螺杆菌根除治疗提供可靠的技术保证。该论文有图36幅,表41个,参考文献147篇。

目的 探讨西格列汀对老年2型糖尿病(T2DM)合并微量蛋白尿(MAU)患者肾功能和氧化应激的影响。方法 老年T2DM合并MAU患者120例随机分为对照组与西格列汀组，每组60例，两组在口服二甲双胍基础上分别予以格列美脲治疗(2 mg/次，1次/d)和西格列汀治疗(100 mg/次，1次/d),均连续用药3个月。治疗前后，对两组血糖血脂、肾功能指标[血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿蛋白肌酐比值(UACR)、估算肾小球滤过率(eGFR)]、GDC-0973作用尿足细胞特异性标志物[足细胞素与肌酐比值(UPCR)、裂隙素与hand disinfectant肌酐比值(UNCR)]和氧化应激指标[8-异前列腺素(8-iso-PG)F2α、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)1Dinaciclib配制]进行检测，并记录两组不良反应。结果 治疗后，两组空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油水平均显著降低，且西格列汀组总胆固醇、三酰甘油水平显著低于对照组(P<0.05)。治疗后，西格列汀组Scr、BUN、UACR、eGFR、UPCR和UNCR水平显著低于对照组。治疗后，西格列汀组血清8-iso-PGF2α水平显著低于对照组，GPX1显著高于对照组(均P<0.05)。两组低血糖事件发生率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 对于老年T2DM合并MAU,西格列汀能够改善患者肾功能，减轻足细胞损伤，其机制可能与减轻氧化应激有关。

水杨酸葡萄糖苷(salicylate 2-O-β-D-glucoside, SAG)，是寻找更多植物中水杨酸的一种存在形式。水杨酸葡萄糖苷也具有消炎止痛的作用，和水杨酸、阿司匹林对比，表现出更小的刺激性，是一种具有潜力的消炎护肤物质。通过生物法利用可再生资源进行水杨酸类物质的生产方式，与传统工业法生产相比对环境更加友好。本研究以大肠杆菌(Escherichia coli) Tyr002作为出发菌株，引入铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)异Medullary infarct分支酸裂解酶基因pchB，首先构建了大肠杆菌水杨酸生产菌株。通过调控下游不同芳香族氨基酸代谢途径关键基因表达，菌株摇瓶发酵水杨酸产量达到1.05 g/L。之后，通过在水杨酸生产菌株中引入植物来源水杨酸糖基转移酶，对水杨酸selleck合成进行糖苷化修饰。新构建的菌株摇瓶发酵水杨酸葡萄糖苷产量达到5.7 g/L。在5 L发酵罐分批补料发酵中，水杨酸葡萄糖苷的产量达到36.5 g/L，是目前报道的最高产量。本研究为水杨酸类化合物的微生物合成提供了重要参考。

鸡球虫病(coccidiosis)由艾美耳属鸡艾美耳球虫(Eimeria)感染引起。柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)是球虫种类中致病性最强的一种,主要寄生在鸡盲肠,可引起盲肠病变。鸡球虫病在世界各地均有发生,对养禽业造成的经济损失巨大。鸡球虫入侵宿主细胞是建立感染的第一步,防控鸡球虫病新型生物制品或药物的发现离不开对虫体入侵宿主细胞的Living donor right hemihepatectomy机制的深入探索。本课题组前期研究表明,鸡球虫子孢子特异性激活Ch TLR15/NFκB/NLRP3/IL-1β通路,提示Ch TLR15在球虫感染致肠道炎性损伤中作用重要。前期发现,乳酸菌可显著激活Nrf2抗氧化通路并下调IL-1β表达。氧化应激与炎症关系密切,推测Nrf2活化后可介导Nrf2抗氧化通路与Ch TLR15/Ch NLRP3串话,进而负向调控Ch TLR15炎症通路,从而减缓炎性损伤。特定种类的乳酸菌和植物来源的天然多酚具有调节Nrf2通路的活性。本研究选取前期实验证明可以激活Nrf2/HO-1通路的短乳杆菌23017(Lactobacillus brevis 23017)和多酚类化合物柯里拉京(Corilagin)作为Nrf2/HO-1通路激活剂,利用鸡成纤维传代细胞系(DF-1)建立了E.tenella子孢子体外感染模型,并应用RNAi技术探究了Nrf2/HO-1抗氧化通路与Ch TLR15/NLRP3炎症信号通路之间的调控关系。为鸡球虫入侵及其与宿主细胞的互作机制研究提供新的思路。研究具体内容如下:为明确柯里拉京和L.brevis 23017对DF-1细胞Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的正向激活作用。本研究采用CCK-8和抗氧化酶试剂盒筛选了柯里拉京和L.brevis 23017作用DF-1细胞的剂量与时间,之后以适当的剂量/菌量分别预处理DF-1细胞,检测Nrf2/HO-1抗氧化信号通路及Ch TLR15/NLRP3炎症信号通路相关因子m RNA转录水平;采用Western Blot方法检测p-Nrf2、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果表明,柯里拉京和L.brevis 23017预处理DF-1细胞后对抗氧化通路Nrf2/HO-1具有显著正向调节作用,15μM柯里拉京(Cori-15μM)和L.brevis 23017菌液上清(Bacterial Supernatant)抗氧化效果最好。为确定柯里拉京和L.brevis 23017是否可以通过调节Nrf2/HO-1抗氧化通路的方式来调控E.tenella子孢子激活的Ch TLR15/CColforsin研究购买h NLRP3炎症通路。本研究建立了E.tenella子孢子入侵DF-1细胞模型。将柯里拉京和L.brevis 23017分别预处理DF-1细胞,用子孢子刺激后检测Nrf2/HO-1和Ch TLR15/NLRP3信号通路相关因子m RNA转录水平;Western Blot检测pNrf2、Nrf2、HO-1、Ch TLR15和Ch NLRP3蛋白表达水平;脂质氧化试剂盒检测丙二醛(MDA)表达水平IACS-010759半抑制浓度与活性氧(ROS)测定试剂盒检测ROS表达水平。结果表明:Cori-15μM和Bacterial Supernatant预处理的DF-1细胞中E.tenella子孢子入侵而引起的Ch TLR15/NLRP3炎症信号通路各因子的表达水平均显著下调;并且MDA和ROS表达量显著下降。表明Cori-15μM和L.brevis 23017菌液上清可通过激活DF-1细胞Nrf2/HO-1抗氧化信号通路来调控子孢子激活的Ch TLR15/NLRP3炎症通路。为进一步明确柯里拉京和L.brevis 23017激活的Nrf2/HO-1抗氧化通路与Ch TLR15/NLRP3炎症通路之间的串话机制。采用RNAi技术分别对DF-1细胞中Nrf2和Ch TLR15的表达进行干扰。将柯里拉京和L.brevis 23017分别预处理Nrf2和Ch TLR15敲低的DF-1细胞,经子孢子刺激后,通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western Blot检测Nrf2/HO-1和Ch TLR15/NLRP3通路相关因子的表达水平。结果表明,柯里拉京和L.brevis23017通过激活Nrf2/HO-1抗氧化通路来抑制E.tenella感染激活的Ch TLR15/Ch NLRP3炎症通路,进而发挥抗炎作用。综上,本研究表明,柯里拉京和L.brevis 23017激活的Nrf2/HO-1抗氧化信号通路通过调控Ch TLR15/NLRP3炎症通路,减缓了鸡球虫入侵细胞过程中所致的炎性损伤,为新型鸡球虫病防控产品的研发提供了新思路。