SRC信号通路

目的 探讨早期使用达格列净对老年急性心肌梗死(AMI)后心力衰竭患者急性期心功能及炎症因子水平的影响。方法 回顾性分析2021年5月至2022年2月在华中科BH4 tetrahydrobiopterin技大学同济医学院附属梨园医院治疗的AMI后心力衰竭59例患者的临床资料，Z-IETD-FMK作用将常规治疗基础上服用达格列净的患者列为治疗组(n=30),未服用达格列净的患者列为对照组(n=29)。药物治疗7 d后，检测对比两组患者的心功能指标[左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、每搏输出量(SV)、左心射血分数(LVEF)]、血清炎症因子水平[超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)]、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)水平以及6 min步行试验距离(6MWD);采用Pearson相关分析评价治疗前患者的LVEF与炎症因子、NT-proBNP水平的相关性。结果 药物治疗7 d后评价，两组患者的LVEF、SV水平均较前升高，LVEDD、LVESD水平均较前降低，且治疗组患者的LVEF、SV水平均高于对照组，LVEDD、LVESD水平均低于对照组(P<0.05);两组患者的hs-CRP、PCT、NT-proBNP水平均较前降低，且治疗组患者上述指标水平均低于对照组(P<0.05);治疗组6MWD优于对照组(P<0.05)。治疗前指标相关性分析显示，患者LVEF分别与hs-CRP、PCT、NT-proBNP水平呈负相关(r=-0.92,-0.76,-0.93Adezmapimod,P<0.01)。结论 与常规抗心力衰竭治疗方法相比，早期联用达格列净治疗AMI后心力衰竭患者，可以更好地改善患者心功能、抑制炎症因子水平，改善患者预后。

目的 探讨行为干预在视网膜母细胞瘤患儿围手术期中的应用效果。方法 选取视网膜母细胞瘤患儿BI 10773108例及其陪护家长108名，根据干预方式的不同分为对照组（常规围手术期干预，n=52）和研究组（常规围手术期干预+行为干预，n=56）。对比两组患儿麻醉诱导时的焦虑情况[改良耶鲁术前焦虑量表（mYPAS）]及合作程度[麻醉诱导期合作量表（ICC）]、患儿父母认知程度及心理状况[焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）]。结果 研究组患儿m YPAS、ICC评分均明显低于对照组，差异均有统计学意义（更多P<0.01）。干预后，两组患儿家长情绪认知、疾病认知评分均较干预前升高，且研究组患儿家长情绪认知、疾病认知评分均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。干预后，两组患儿家长SAS、SDS评分均较干预前降低，且研究组患儿家长SAS、SDS评分均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 行Wakefulness-promoting medication为干预可有效降低视网膜母细胞瘤患儿围手术期的焦虑程度，提升患儿合作程度，且可有效提升患儿家长的认知程度，改善患儿家长的不良情绪，以为患儿提供情感支持，值得临床推广应用。

目的 探讨针对慢性心力衰竭患者应用达格列净结合沙库巴曲缬沙坦钠的治疗方案时，患者心功能及预后的结果。方法 选择沭阳Entinostat配制铭和医院在2022年2月至12月期间收治的82例慢性心力衰竭患者，将所有纳入患者按照随机数字表法分为对照组和研究组，每组41例。两组患者首先都被给予常规方法来治疗，然后对照组在此基础上给予沙库巴曲缬沙坦钠治疗，研究组则在对照组的基础上联合达格列净进行治疗，对两组患者治疗后的临床效果，voluntary medical male circumcision心衰标志物、心功能、炎性细胞因子指标的改善情况及不良反应发生情况进行比较。结果 研究组患者治疗有效率达到95.12%，显著高于对照组的75.61%；治疗后两组患者的心衰标志物指标显著低于治疗前，且研究组低于对照组；治疗后两组患者的心功能指标均得到显著改善，且研究组改善幅度大于对照组，治疗后两组患者6 min步行距离长于治疗前，且研究组长于对照组；两组患者的炎性细胞因子水平显著低于治疗前，且研究组低于对照组；两组患者用药后的不良反应发生BMN 673临床试验率比较差异不明显（P>0.05）。结论 针对慢性心力衰竭患者，给予其达格列净结合沙库巴曲缬沙坦钠的治疗方案，可提高临床效果，并使患者的心功能、心衰标志物指标及炎症指标得到改善，值得应用。

目的:胰腺癌作为消化道恶性肿瘤,在临床上十分常见,该疾病预后较差,在患者中的5年生存率低于10%。本研究的目的是从中药中寻找高效低毒的天然药物,并综合应用网络药理学方法探索活性中药升麻治疗胰腺癌的潜在作用及可能机制,为胰腺癌的中药干预提供新的思路。方法:确定目标活性中药:应用CCK8法考察常用中药(100μg/ml)对Aspc-1和Panc-1细胞的抑制活性。测定活性中药升麻抑制Aspc-1和Panc-1的IC_(50)。升麻抗胰腺癌活性的体外评价:升麻对Aspc-1和Panctumor suppressive immune environment-1细胞迁移的影响通过细胞划痕实验进行考察;细胞克隆集落形成实验考察升麻对Aspc-1和Panc-1细胞增殖能力的影响;使用Western Blot检测升麻处理后Aspc-1和Panc-1细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2,BAX,casepase-3,casepase-9)的表达变化,以此来验证升麻对胰腺癌细胞凋亡的影响。运用网络药理学探索升麻抗肿瘤作用的潜在活性成分和作用机制:对TCMSP、Dis Genet、Gene Cards、OMIM等数据库中现有的数据进行检索,根据口服生物利用度,类药性等指标进行筛选,进而获取药物有效成分及与有效成分相关的作用靶点,并且进行胰腺癌疾病相关靶点的获取;通过Cytoscape软件导入上述步骤得到的结果,构建“升麻-胰腺癌-靶点”网络。将“升麻-胰腺癌-靶点”数据集中的靶点信息导入String数据库中构建PPI网络,整合这一数据集中包含的“蛋白-蛋白ABT-263抑制剂相互作用”。将获得的升麻-胰腺癌核心靶点导入基因列表,进行细胞生物功能和KEGG通路分析,对相关靶点有关的生物功能进行注释。通过对调控网络图中的因子进行Western Blot验证,从而确定升麻发挥抗胰腺癌活性的作用机制。结果:在筛选的多种中药中,升麻能够同时降低Aspc-1和Panc-1两种细胞的存活率,100μg/ml时两种细胞的存活率均低于30%;而且,升麻对胰腺癌细胞存活率的抑制具有浓度依赖性和时间依赖性,处理72h后的IC_(50)分别为10.78μg/ml(Aspc-1)和48.76μg/ml(Panc-1)。细胞划痕迁移实验结果显示与对照组相比,加入升麻的实验组中划痕两侧细胞向中间融合被抑制,且随加入升麻浓度的提高,抑制程度更为明显。细胞克隆集落形成实验结果显示,与对照组相比,加入升麻的实验组可观察到的结晶紫染色细胞明显减少,且随着药物浓度的升高,染色细胞数量更少。Western Blot结果表明,经过升麻处理的胰腺癌细胞的凋亡相关蛋白表达随时间显著增强,而抗凋亡相关蛋白的表达明显减少。这些结果表明,胰腺癌细胞的增殖能力和迁移能力受到了升麻的抑制作用,且升麻对胰腺癌细胞的凋亡起到了促进作用。网络药理学分析显示,升麻相关靶点与胰腺癌相关靶点根据口服生物利用度和类药性排序,得到包括“PPARγ、GSK3β”在内的21个的交集靶点,这21个靶点与升麻活性成分、胰腺癌疾病共同具有相关性。通过Western Blot对Cycling D1、Cycling E1、COX2、NF-κB等相关蛋白表达进行检测,发现这些与PPARγ、GSK3β两个靶点相关的蛋白都在升麻作用下受到了影响,验证了升麻发挥抗肿瘤活性的作用靶点。结论:1.多种中药具有体外抑制胰腺癌细胞活性,其中升麻具有较强的抗肿瘤活性。2.升麻抑制Aspc-1和Panc-1细胞的增殖和迁移,诱导两种胰腺癌Puromycin细胞凋亡。3.升麻可能是通过PPARγ和GSK3β信号通路发挥体外抗胰腺癌活性。

研究目的:根据《中国心血管健康与疾病报告2021》显示,随着经济社会发展与生活方式的改变,我国居民不健康生活方式日益突出,心血管危险因素对居民健康影响日益加深,我国心血管疾病患病率和死亡率正处于持续上升阶段。其中急性心肌梗死发病率逐年升高并趋于年轻化,严重威胁中国城乡居民生命健康。临床急性心肌梗死患者常采用药物治疗、溶栓治疗或经皮冠状动脉介入治疗等手段,恢复缺血心肌血流。但研究发现,血流恢复后,常伴随心肌氧化应激水平过度增加,导致心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion, I/R)损伤的发生,严重影响患者预后和生活质量。近年来研究发现I/R心脏游离铁和活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平显著升高,导致心肌细胞脂质过氧化,诱发铁死亡,是导致心肌I/R损伤的重要机制之一。运动是改善I/R诱导心肌损伤的有效干预方式,可降低I/R心肌氧化应激水平,提高抗氧化能力,但运动可否改善I/R诱导心肌细胞铁死亡尚无报道。成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor21,FGF21)是目前公认的运动因子,可通过改善心肌细胞代谢和抗氧化能力,有效改善I/R诱导的心肌损伤。FGF21可改善病理条件下肝脏和大脑等组织细胞铁死亡水平,运动可否通过调节FGF21,改善I/R诱导心肌细胞铁死亡需进一步探索。本研究通过构建运动干预小鼠的I/R模型,探讨运动可否上调心肌FGF21表达,改善心肌细胞铁死亡及其可能机制,为临床运动改善I/R损伤的作用靶点和分子机制提供实验依据。研究方法:3月龄雄性C57BL/6小鼠,18-20g,适应性喂养1周后,随机分为假手术对照组(Sham)、缺血再灌注2此网站小时组(Control-I/R 2h)、缺血再灌注24小时组(Control-I/R 24h)、运动+假手术组(Exercise training-Sham, ET-Sham)、运动+缺血再灌注2小时组(ET-I/R 2h)和运动+缺血再灌注24小时组(ET-I/R 24h)。其中,运动组小鼠进行6d适应性跑台训练。第1w为适应性训练,第1d以6m/min×10min运动,每天增加10min,速度递增2m/min,第6d增至16m/min×60min,跑台坡度为0°,休息1d。正2-7周为正式训练,运动跑台坡度为0°,跑速为16m/min,60min/d,5d/wk×6w。实验期间小鼠每周测一次体重。手术组小鼠进行冠状动脉左前降支(LAD)结扎术,30min后去除结扎线,再灌注2h和24h,制备I/R模型,假手术组只穿线不结扎,以排除手术因素干扰。手术过程中连接小动物心电图检测仪,进行心电信号采集,以心电图ST段弓背抬高,出现病理性Q波或T波倒置作为结扎成功的标志。采用小动物超声心动图评估心脏收缩功能。异氟烷麻醉小鼠,称重后,眼眶取血,取上清备用。迅速开胸摘取心脏,预冷生理盐水清洗,滤纸吸干后称重。用于组织学实验样本放入4%多聚甲醛溶液中固定保存48h,用于生化与分子生物学指标检测样本放入液氮固定24h后,转移至-80℃超低温冰箱中保存。取甲醛固定心肌组织进行石蜡包埋,制备切片,常规HE和Masson染色,观察细胞形态,分析细胞横截面积大小和心肌纤维化程度。超氧化物阴离子荧光探针(Dihydroethidium,DHE)检测心肌细胞ROS水平。采用生化检测试剂盒检测心肌组织总谷胱甘肽(T-GSH),氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量,测定心肌细胞中氧化应激水平。Western Blotting检测心肌组织中溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11, SLC7A11/xCT)、谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)蛋白表达。其中,组织学染色采用Image J进行分析,WB结果采用Image Lab进行处理与分析,所得数据通过GraphPad Prism进行单因素方差分析,Tukey比较并做图。研究结果:[蔡1] HE染色结果显示,与Sham组比,ET-Sham组小鼠心肌组织结构正常,心肌细胞排列有序,未见心肌胶原纤维化,心肌细胞横截面积显著增大(p<0.05),FGF21蛋白表达显著升高(p<0.01);Control-I/R 2h组结扎部位心肌纤维断裂、组织破碎、排列紊乱、心肌细胞数量减少,左心室射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS)下降,心功能降低,氧化应激水平升高,心肌组织中TUNEL阳CX-5461纯度性颗粒数量增加,可见心肌胶原纤维化,FGF21蛋白表达显著升高(p<0.05),Nrf2表达升高但无显著性差异,T-GSH和GSSG含量均有所升高;Control-I/R 24组心肌纤维断裂严重,心肌细胞数量减少,可见胶原纤维沉积,EF和FS下降,左心室舒张期内径(LVIDd)和左心室收缩期内径(LVIDs)上升,ROS水平升高,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量增加,FGF21表达显著升高(p<0.01),Xct表达显著降低(p<0.01)。与Control-I/R 2h组相比,Control-I/R24h组心肌破碎,EF降低,心功能下降,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2表达升高但无显著性差异;ET-I/R 2h组EF升高,心功能改善,ROS水平下降,心肌组织中TUNEL阳性颗粒数量降低,FGF21和Xct表达显著升高(p<0.05)。与Control-I/R 24h组相比,ET-I/R 24h组心肌纤维排列较为整齐,组织破碎程度较轻,胶原纤维化程度减轻,FS和LVIDd显著升高(p<0.05),心功能改善,ROS水平降低,FGF21表达显著升高(p<0.05),GPX4、Xct和Nrf2升高。T-GSH含量升高。与ET-Sham组相比,ET-I/R 2h组心肌纤维断裂,心肌细胞数量减少,EF和FS下降,Xct表达升高。ET-I/R24h组心肌纤维断裂,组织破碎,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2升高。T-GSH含量升高,GSSG含量下降。与ET-I/R 2h组相比,ET-I/R 24h组ROS水平升高,FGF21表达显著升高(p<0.05),Nrf2、GPX4和Xct表达均有升高。研究结论:6周有氧运动可上调I/R心肌组织中FGF21的表达,降低心脏ROS水Primary B cell immunodeficiency平,抑制心肌细胞凋亡和铁死亡,改善心肌损伤,发挥心脏保护作用。

目的 探讨加减薯蓣丸(MSP)改善血管性痴呆(VaD)小鼠焦虑、抑郁行为Crizotinib的机制。方法 在药效研究中,选择60只C57BL/6小鼠,以颈总动脉缩窄/束缚应激(BCAS/CRS)构建VaD行为异常模型,假手术处理作为对照。按干预条件分为对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、MSP组(7、14、28 g/kg)、氟西汀(10 mg/kg)组。在机制研究中,40只BCAS/CRS模型小鼠,分别接受空载病毒、髓鞘基因调节因子(MyRF)过表达病毒、MSP(14 g/kg)、MSP+MyRF敲低病毒处理。旷场实验、高架十字迷宫实验、悬尾实验评估行为学变medical screening化;Western Blot检测髓鞘相关糖蛋白(MAG)、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)、髓鞘碱性蛋白(MBP)及髓鞘基因调节因子(MyRF)表达;免疫荧光染色检测MBP表达;胼胝体复合动作电位记录评估有髓轴突动作电位传导。结果 与对照组比较,模型组小鼠开放臂次数/时间、中央区时间/距离减少,不动时间延长(P<0.01);mPFC和BLA脑区MAG、MOG、MBP和MyRF表达降低(P<0.01),MBP荧光强度和动作电位N1振幅降低(P<0.01)。MSP及氟西汀增加模型小鼠开放臂次数/时间和中央区时间/距离,缩短不动时间(P<0.0PF-07321332体内实验剂量1,P<0.05),上调髓鞘相关蛋白及MyRF表达(P<0.01,P<0.05),增加MBP荧光强度和动作电位N1振幅(P<0.01)。MyRF敲低减弱了MSP对模型小鼠行为学、髓鞘相关蛋白表达和动作电位N1振幅的改善效应(P<0.01,P<0.05)。结论 加减薯蓣丸通过上调mPFCBLA环路MyRF表达,促进髓鞘修复和信号传导,改善VaD小鼠焦虑和抑郁行为。

目的 探讨内收肌管阻滞(ACB)联合局部浸润镇痛(LIA)对全身麻醉下膝关节镜手术患者术后疼痛的影响。方法 将在膝关节镜下接受择期前交叉韧带重建(ACLR)手术的军事训练伤者60例按简单随机方法分为ACB+LIA组(n=30)和LIA组(n=30)。ACB+LIA组患者接受超声引导下ACB(获悉更多0.375%罗哌卡因15 mL)。Lselleck产品IA组在全身麻醉诱导前先在超声引导下进行ACB(15 mL等渗盐水),然后在缝合切口前2组均使用局部麻醉剂(0.25%罗哌卡因40 mL)进行关节周围浸润镇痛。观察主要结局为术后24 h的疼痛发生率。次要结局包括股四头肌无力的发生率和术中阿片类药物的用量等。结果 ACB+LIA组术后24 h疼痛发生率低于LIA组[10%(3/30)vs 33%(10/30),P=0.028]。2组术后24 H股四头肌无力发生率比较差异无统计学意义(13%(4/30)vs 7%(2/30),P=0.667]。ACB+LIA组瑞芬太尼和舒芬太尼用量明显低于LIA组(P=0.immunity innate006)。结论 与单独接受LIA的患者相比，ACB联合LIA可降低膝关节镜患者术后疼痛的发生率，同时保留股四头肌的力量，并减少手术期间阿片类药物的用量。

研究背景:微小染色体维持蛋白5(minichromosome maintenance proteins 5,MCM5)是微小染色体维持蛋白家族(minichromosome maintenance proteins,MCMs)的成员,MCMs主要包括了MCM1-10,其中MCM2-7在真核生物及古细菌中都有被发现,且MCM2-7蛋白彼此之间的序列明显相似,其相互作用共同构成MCM复合物六聚体,在真核生物的基因复制中发挥作用。MCM5主要参与DNA的复制起始的解旋与复制叉的延伸,而MCM5在细胞中的含量远超其复制过程所需的量,随后发现MCM5也参与RNA转录过程。目前MCM5研究主要集中在肿瘤的发病机制中,MCM5的异常表达与许多肿瘤的诊断、治疗及预后都密切相关。MCM5缺失也可导致神经系统及胚胎发育障碍。近年有文献报道MCM5具有年龄依赖性,在细胞衰老中也发挥着关键作用。然而MCM5在脑中的定位仍不清楚,因此本项目将探索MCM5在小鼠脑中的分布,为MCM5在中枢神经系统中的作用机制研究提供形态学参考。研究目的:探索MCM5在小鼠脑中的表达定位及表达的细胞类型,探讨MCM5在小鼠及藏酋猴脑中的物种表达差异性,为后续研究MCM5在脑发育及疾病中的作用奠定基础。材料与方法:1.选用C57/BL6雄鼠,进行心脏灌注取脑、后固定及脱水、脑冠状面冰冻切片,使用MCM5兔源单克隆抗体标记脑切片,进行免疫荧光染色,荧光显微镜扫描脑切片,观察MCM5在小鼠脑中的表达定位;选取已固定的藏酋猴部分脑区进行石蜡包埋切片,正置荧光显微镜观察藏酋猴部分脑区中MCM5的表达。2.将小鼠脑组织进行石蜡包埋及切片,使用MCM5兔源单克隆抗体分别与鼠源抗神经元核抗原抗体(Neu N,神经元标记物)、抗少突胶质细胞转录因子2抗体(OLIG2,少突胶质细胞标记物)、离子钙接头蛋白1抗体(Iba1,小胶质细胞标记物)、抗神经胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP,星形胶质细胞标记物)、酪氨酸水解酶抗体(TH,多巴胺能神经元标记物)、抗胆碱乙酰转移酶抗体(CHAT,胆碱能神经元标记物)、囊泡型谷氨酸转运体-1抗体(VGLUT1,谷氨酸能神经元标记物)、谷氨酸脱羧酶67抗体(GAD67,γ-氨基丁酸能神经元标记物)进行共同免疫荧光染色,荧光显微镜观察MCM5在小鼠不同类型神经元及神经胶质细胞中的表达。3.选用C57/BL6野生型3月龄成年雄鼠及18月龄老年雄鼠,进行心脏灌注取脑、后固定及脱水、石蜡切片,使用MCM5兔源单克隆抗体分别标记成年小鼠、老年小鼠脑石蜡切片,观察MCM5在不同年龄中的表达。4.选用C57/BL6野生型3月龄成年雄鼠及18月龄老年雄鼠,提取小鼠大脑皮层、纹状体、海马、丘脑、中脑五个脑区的蛋白,BCA法测蛋白浓度,使用蛋白印迹检测比较成年与老年小鼠这五个脑区的MCM5蛋白含量,并进行统计学分析。结果:1.MCM5阳性信号在小鼠大脑中广泛分布,在嗅脑的突触球层/小球周细胞层(GI)、外丛状层(EPI)、前嗅区(AO)、大脑皮质(Cortex)的腹侧眶皮质(VO)、外眶皮质(LO)、眶内侧皮质(MO)、次级运动皮质(M2)、岛叶皮质(AI)、梨状皮质(Pir)及其1-3层、梨状核(En)、初级感觉皮质(S1)、次级感觉皮质(S2)、初级运动皮质(M1)、扣带皮质29C区域(A29C)、初级视皮质(V1)、次级视皮质外侧(V2L)、次级听皮质(Au D)、初级听皮质(Au1)等、大脑基底核的纹状体的尾状核(CPu)、苍白球(VP)等、隔区的伏隔核(Acb)、中间隔核(MS)、斜角带核(VDB)等、海马结构的海马锥体层(Py)、海马乳头分子层(Lmol)、齿状回(DG)等区域阳性信号较明显。在嗅脑的颗粒细胞层(Gro)、胼胝体(cc)及胼胝体小钳(fmi)、外囊(ec)未观察到MCM5阳性信号。随后我们选择性观察了嗅脑的GI、AO、大脑皮质的M2、LO、En、隔区的Acb、基底核的CPu、VP、海马结构的DG、Py局部区域,发现MCM5在细胞核及核周细胞质中呈点状阳性。2.MCM5阳性标记在小鼠间脑中也广泛分布,在丘脑的室旁核(PVA)、中央内侧核(CM)、前背侧核(AD)、丘脑网状核(Rt)、外侧背核(LDDM)、腹外侧核(VL)、腹后外侧核(VPL)、腹内侧核(VM)、腹后内侧核(VPM)、丘脑下核(Sub)、后丘脑的背侧膝状体核(DLG)、上丘脑的髓纹(sm)、缰核(Hb)、外侧下丘脑(LH)、下丘脑前侧(AHA)、底丘脑的底丘脑核(STh)等脑区观察到较强的阳性标记。接着我们观察了丘脑的外侧背核(LDDM)、腹外侧核(VL)、中央内侧核(CM)、上丘脑的髓纹(sm)、下丘脑前侧(AHA)、底丘脑核(STh)、后丘脑的背侧膝状体核(DLG)局部区域,发现MCM5在细胞核及核周细胞质中呈点状阳性。3.在小鼠脑干中也发现了广泛分布的MCM5阳性信号,脑干中阳性信号较明显的区域为中脑的顶盖前核(APTD)、顶盖腹前核(APTV)、腹侧被盖区(VTAR)、黑质(SN)、导水管周围核群(DK)及导水管周围灰质(PAG)pre-formed fibrils、红核(RPC)、脚间核(IP)、被盖核(Tg)、下丘的皮质(CIC)、脑桥的脑桥核(Pn)、脑桥网状核(Pn C)、脑桥网状被盖核(Rt Tg)、三叉神经主支(Pr5VL)、前庭神经核(VE)、面神经核(7N)等区域。在中脑的导水管周围核群(DK)、红核(RPC)、脚间核(IP)、被盖核(Tg)及脑桥的网状被盖核(Rt Tg)、前庭神经核(VE)、面神经核(7N)区域的细胞核及核周细胞质中MCM5呈点状阳性表达,在黑质(SN)中MCM5呈胞质内弥漫强阳性。4.在小鼠小脑中MCM5的阳性信号也分布广泛,阳性信号较强的在小脑的蚓叶(cb)、小脑间位核(Int A)、小脑外侧神经核团(Lat)及内侧核(med)等部位,并且我们观察了小脑的这四个部位,发现MCM5在细胞核周围呈点状阳性。5.在藏酋猴大脑皮质、海马结构、纹状体、中脑黑质、丘脑中均发现MCM5阳性信号。6.MCM5与Neu N在大脑皮质及丘脑神经元的细胞核及细胞质中均共标,在海马及黑质神经元的细胞质中共标。MCM5与TH在黑质的多巴胺能神经元的细胞质中呈弥漫阳性。MCM5与CHAT在大脑皮质及海马的胆碱能神经元的细胞质中共标;在纹状体与斜角带核,MCM5在CHAT标记的胆碱能神经元的细胞核中为阳性CB-839。MCM5与VGLUT1在海马、纹状体及丘脑的谷氨酸能神经元的细胞质中均共标,但在大脑皮质中谷氨酸能神经元的细胞核及细胞质中均表达。MCM5在大脑皮质、纹状体、海马的γ-氨基丁酸能神经元的细胞质及细胞核中均存在阳性信号,在下丘脑后核,MCM5与GAD67标记的γ-氨基丁酸能神经元共标于细胞质。MCM5与OLIG2在大脑皮质、中脑黑质、面神经核(7N)、丘脑这四个脑局部区域的少突胶质细胞的细胞质中共标。MCM5与Iba1在小鼠大脑皮质、海马、纹状体、中脑黑质的小胶质细胞的细胞质中共标。MCM5与GFAP在大脑皮质、海马、纹状体、中脑黑质的星形胶质细胞中均不共标。7.我们通过免疫荧光染色发现MCM5阳性信号在正常成年及老年小鼠的大脑皮质、纹状体、海马、丘脑、黑质均存在,但在老年小鼠中MCM5阳性信号均明显较成年小鼠强,蛋白质免疫印迹再次证明了老年小鼠中表达均较成年小鼠高。结论:1.MCM5在小鼠脑中广泛存在,在嗅球部分区域、大脑皮质、大脑基底核、隔区、海马结构、丘脑、下丘脑、后丘脑、底丘脑、中脑及小脑等部位呈弥漫阳性,尤其在黑质致密INCB018424部呈明显特异的胞质内弥漫强阳性表达,在嗅球的颗粒细胞层、胼胝体、外囊处未见MCM5阳性标记。这表明MCM5在脑中可能存在较为广泛的作用,尤其在黑质处可能存在较为特异的功能;在藏酋猴的大脑皮质、纹状体、海马、丘脑、黑质中MCM5也均表达,说明在这两种物种之间MCM5的表达具有保守性。2.MCM5在神经元、小胶质细胞、少突胶质细胞、胆碱能神经元、谷氨酸能神经元、γ-氨基丁酸能神经元、多巴胺能神经元中均存在,但在不同脑区的同一类型的神经细胞中,MCM5阳性信号既可能只存在于细胞核或者细胞质中,也可能在细胞核及细胞质中均存在。MCM5在多巴胺能神经元胞质内表达呈相对特异的胞质内弥漫强阳性,表明MCM5在多巴胺能神经元中可能存在更为特异的作用。MCM5在星形胶质细胞中为阴性。3.MCM5在正常成年及老年小鼠的大脑皮质、纹状体、海马、丘脑、黑质均表达,但MCM5在老年小鼠表达均明显较成年小鼠高,蛋白质免疫印迹再次验证了这个结论,说明其表达具有年龄差异性。

引言:急性ST段抬高型心肌梗死是急性冠脉综合征最严重的类型,也是当今人类的主要死因之一。每年在全世界造成180多万人死亡,是一个全球主要的健康负担。在我们医院常点击此处规使用心梗三项(c Tn I、CK-MB和Myo)对STEMI做出早期的判断。c Tn I在起病后3-4小时升高;CK-MB在起病4小时升高;Myo在起病后2小时升高。随着中国胸痛中心的建立,优化院前时间的管理,绝大部分患者就诊时的胸痛时间缩短在4小时以内,传统的心梗三项很难对STEMI做出准确的判断,因此积极探寻敏感度和特异度高的新型心肌损伤标志物成为临床研究的焦点。目的:研究血清mi RNA-203对急性ST段抬高型心肌梗死的预测价值。方法:选取2020年12月至2021年12月在我院确诊的STEMI患者70例,选取同期在我院心内科因其他疾病住院同时具有一过性胸痛症状的患者35例,分别收集两组患者血清并进行mi RNA-203半定量实验。收集所有患者的临床资料,对比两组之间的差异、进行ROC分析和多因素Logistic回归统计分析。结果:STEMI组的mi RNA-203高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);mi RNA-203在预测STEMI的AUC面积为0.912,以最大约登指数计算得出其最大AUC面积相应参数截阀值为0.672(敏感性84.3%,特异性82.9%);Logistic回归分析显示,mi RNA-203和白细胞是STEMI的独立危险因素(P<0.05),其OR(95%CI)分别为3.913(1.574-9.728)和2.13(1.247-3.641)。结论:胸痛患者入GSKJ4配制院时检测血清中mi RNA-2HIV infection03的表达水平,可能有助于对急性ST段抬高型心肌梗死的诊断。

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种高度接触性传染病,对全球养猪业造成重创。猪只感染强毒株引起高死亡率,至今尚无安全有效的疫苗可用于防控。非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是大分子DNA病毒,基因组结构复杂且多变,随着ASFV在国内的流行,病毒基因组不断出现变异,变异弱毒株逐渐成为流行毒株,其潜伏期长、隐蔽性强,给ASF的早期诊断带来巨大挑战,因此亟需研制出高效、灵敏、特异的检测技术,并研发安全有效的疫苗。TGF-beta/Smad抑制剂本研究通过CHO悬浮细胞系统表达了 ASFV pK205R、p17及p12蛋白,并分析以上蛋白作为诊断抗原的抗原性;通过开发稳定表达ASFV pK205R重组蛋白的CHO细胞株,实现抗原蛋白的大规模生产,并以其作为抗原蛋白,建立以ASFV pK205R蛋白为靶标的间接ELISA方法;利用纯化的pK205R蛋白作为免疫原,制备抗pK205R蛋白的单克隆抗体,并对其抗原结合表位进行鉴定。另一方biobased composite面,通过反向遗传操作技术拯救出能表达ASFV pK205R蛋白的重组PRRSV弱毒疫苗株,并对免疫抗体水平进行评估。主要研究内容如下:为了验证ASFV pK205R、p17及p12蛋白作为诊断抗原的潜力,根据我国流行毒株 ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R、D117L及 061R基因序列,利用同源重组的方法分别将基因连接到pCDNA3.1载体上,构建真核表达质粒 pCDNA3.1-pK205R-strep、pCDNA3.1-p17-strep 和 pCDNA3.1-p12-strep。将真核表达质粒转染至CHO细胞,通过strep标签纯化pK205R、p17及p12重组蛋白,以纯化蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠,制备了相应的多克隆抗体,通过Western blotting及IFA验证了多克隆抗体具有良好的特异性。为了获得可稳定高效表达ASFV pK205R蛋白的CHO细胞株,实现优势抗原蛋白的大规模生产,将融合Twin strep标签的K205R基因片段同源重组至pCDNA3.4载体上,通过G418加压筛选结合有限稀释法的方法构建了可分泌表达ASFV pK205R蛋白的稳转细胞株CHO-pK205R。通过RT-PCR的方法从连续传代20代的细胞样品中扩增出K205R基因,表明该基因成功整合到细胞基因组中;通过CCK-8及细胞计数的方法验证了重组蛋白表达细胞系具有良好的细胞活性;通过Twin strep标签对重组pK205R进行纯化并定量,结果显示蛋白纯化量可达0.3～0.43mg/mL。将纯化的pK205R蛋白免疫BALB/C小鼠,取免疫4次的小鼠脾细胞与SP2/0杂交瘤细胞进行融合,通过3次亚克隆获得了 2株抗ASFV pK205R蛋白的单克隆,经IFA和Western blotting鉴定,获得的单克隆抗体特异性良好。取其中抗体分泌更稳定、效价更高的2H11单克隆抗体进行亚型鉴定及其识别的B细胞表位鉴定,结果显示2H11单克隆抗体重链为IgG1,轻链为Kappa链,其识别的最小表位序列为2 VEPREQFFQDLLSAV16,通过生物信https://www.selleck.cn/products/Staurosporine.html息学分析,该表位在不同分型毒株中高度保守。为了建立一种灵敏的、可早期诊断ASFV的ELISA检测方法,通过构建的稳转悬浮细胞系CHO-K205R纯化pK205R重组蛋白,将其作为抗原包被酶标板,并对各反应条件进行优化,建立了既可检测野毒感染又可监测表达ASFV pK205R蛋白的重组PRRSV活载体病毒体内抗体水平的间接ELISA方法。对建立的间接ELISA检测方法进行评估,证明该方法特异性强,灵敏度高,稳定性好,与试剂盒符合率高达98.1%。pK205R蛋白抗原免疫性较强,具有开发疫苗的潜力。本研究利用反向遗传操作技术将K205R基因插入到由PRRSV强毒株vHuN4传代致弱的疫苗株vHuN4F112(GenBank ID:EF635006)基因组的ORF1b和ORF2之间,获得了重组K205R基因的PRRSV全长感染性克隆,经过体外转录和病毒拯救获得重组病毒vA-ASFV-K205R株,其生长特性与亲本毒株相似,且外源基因在体外传代具有稳定性。将该重组病毒免疫PRRSV和ASFV抗原和抗体均为阴性的仔猪,通过PRRSV抗体试剂盒及本研究建立的pK205R间接ELISA检测方法监测抗体水平,结果证明该基因工程活载体疫苗候选毒株可诱导产生针对ASFV pK205R的特异性抗体。