SRC信号通路

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)和甲状腺乳头状增生(papillary thyroid hyperplasia, PTH)中Dickkopf-1(DKK1)的表达及与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白的关系。方法 采用生物信息学技术分析TCGA数据库中DKK1在PTC中的诊断价值；采用免疫组化EnVision法检测80例PTC和60例PTH组织中DKK1蛋白的表达，以及PTBaricitinib核磁C组织中MMP-2、E-cadherin和vimentin的表达，并分析其与临床病理特征及cytomegalovirus infection相关性。结果 生物信息学分析和免疫组化结果显示，DKK1对PTC诊断预测的曲线下面积(AUC)分别为0.674和0.874(P均<0.001),其确认细节灵敏度为95.0%,特异性为71.2%,诊断准确度为81.4%,误诊率为28.8%,漏诊率为5.0%,具有较高的诊断价值。PTC和PTH组织中DKK1的阳性率分别为28.8%(23/80)和95.0%(57/60),差异有统计学意义(P<0.001)。DKK1、MMP-2和E-cadherin表达与淋巴结转移相关(P<0.05),vimentin表达与淋巴结转移和患者年龄相关(P<0.05)。PTC组织中DKK1表达与E-cadherin表达呈正相关(r_s=0.272,P<0.05),与MMP-2、vimentin表达均呈负相关(r_s=-0.335、-0.336,P均<0.05)。结论 DKK1可作为辅助PTC和PTH鉴别诊断的重要标志物；DKK1可能参与PTC的EMT过程，可作为预测PTC侵袭和淋巴结转移的潜在标志物。

研究背景:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是一种以肾功能急剧下降为特征的临床危重症,主要表现为近端小管损伤以及血清肌酐和尿素氮水平升高,具有较高的发病率和死亡率。临床大数据随访研究发现,19%～31%AKI患者逐渐演变为慢性肾脏病(CKD,Chronic kidney disease),最终进展至尿毒症状态。尽管开展了大量的AKI研究,但AKI发生发展的内在机制尚未完全阐明,临床也缺乏治疗手段干预AKI向CKD转变,这是临床AKI救治面临的重大难题之一。大量的证据表明,肾小管损伤是AKI的典型特征,而肾小管损伤修复不良是AKI向CKD转变的主要诱发因素。据文献报道及我们课题组的研究发现,AKI中肾小管上皮细胞损伤的主要机制包括缺氧、细胞周期阻滞、持续氧化应激、焦亡、线粒体失能等。值得注意的是,急性肾小管缺氧是缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury,IRI)诱导AKI的典型特征。最近的研究表明,铁死亡作为一种新近发现的死亡方式参与了AKI的发生与发展。铁死亡是一种铁依赖性的细胞死亡,主要表现为铁离子蓄积、脂质活性氧增多、铁死亡抗氧化系统失调和线粒体损伤。有研究发现,敲除谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase 4,GPX4)能诱导小鼠出现AKI的特征,而敲除铁死亡的另一标志物长链脂肪酸辅酶a连接酶4(Long-chain-fatty-acid—Co A ligase 4,ACSL4)能缓解AKI,而且新近研究发现铁死亡抑制剂(如Ferrostatin-1和Lipostatin-1)可预防AKI,但是铁死亡在AKI中的致病机制仍未完全阐明。阻遏因子1沉默转录因子(Repressor element 1-silencing transcription factor,REST)是一种转录抑制因子,通过结合到靶基因的启动子区调节染色质结构或抑制基础转录对靶基因进行调控。早期的研究显示REST参与神经分化以及神经发育的调控,近年来,REST展现出越来越多的生物学功能,且具有细胞特异性。据报道,REST是缺氧时基因表达抑制的主要调节因子,可抑制20%的缺氧相关基因,这提示REST可能在AKI中发挥重要作用。最新的研究报道了REST参与脑IRI的病理过程,但其在IRI诱导AKI中的作用和机制尚不清楚。本研究以肾小管上皮细胞REST特异性敲除小鼠以及原代肾小管上皮细胞为研究对象、采用缺氧复氧(Hypoxia and reoxygenation,HR)损伤下敲低REST的转录组测序、透射电镜、流式检测ROS等方法,首先明确了REST在各种AKI模型中的表达上调,且基因敲除模型证实敲除REST能显著缓解AKI及其向CKD进展。随后,转录组测序以及相关功能实验发现,敲低肾小管上皮细胞REST能通过缓解铁死亡而减轻HR损伤。机制研究表明,REST通过转录调控谷氨酸胱氨酸连接酶修饰亚基(Glutamic cystine ligase modified subunit,GCLM)促进谷胱甘肽(Glutathione,GSH)生成缓解铁死亡。最后,我们利用基因敲除小鼠模型证实了敲除REST不但缓解IRI诱导的肾损伤,还可以延缓AKI向CKD的进展。因此,本研究揭示了REST的新功能及其作用机制。研究目的:探讨肾小管上皮细胞特异性敲除REST通过抑制铁死亡从而缓解AKI的作用和机制,明确靶向干预REST/GCLM/GSH信号通路对铁死亡及AKI向CKD转化的治疗效果。研究方法:1.体外研究(1)在人肾小管上皮细胞(HK-2),小鼠原代肾小管上皮细胞(Renal tubular epithelial cells,RTECs),大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)建立HR模型以及顺铂毒性模型,通过Western blot评估REST的表达水平改变。(2)通过si RNA敲低REST在HK-2细胞的表达并暴露在HR损伤下,采用q PCR、转录组测序、Western blot、PI/Calcein-AM染色、乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、GSH、谷氨酸胱氨酸连接酶(Glutamic cystine ligase,GCL)、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、脂质ROS以及透射电镜检测等方法确定敲低REST对铁死亡的作用。采用铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理细胞后评估铁死亡相关指标,验证敲低REST对铁死亡的抑制作用。selleck产品采用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1以及DFO处理细胞后检测铁死亡相关的指标,探究敲低REST与铁死亡抑制剂的协同作用。(3)通过从REST~(flox/flox)小鼠提取原代肾小管上皮细胞并感染含有Cre酶的腺病毒以敲除REST,在此基础上干扰GCLM并诱导HR损伤,采用q PCR、Western blot、MDA、GSH、GCL、脂质ROS以及透射电镜等方法以探究REST/GCLM轴的干预对铁死亡的作用。此外通过双荧光素酶报告系统、结合位点点突变和免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,Ch IP)探究REST对GCLM的转录调控。2.体内研究(1)分别通过IRI手术以及顺铂腹腔注射建立AKI模型,通过Western blot、免疫荧光等方法评估REST的表达水平。利用REST~(RTKO)小鼠建立IRI诱导的AKI模型,明确REST在肾小管上皮细胞的敲除对AKI中的作用,同时通过IRI手术即刻注射铁死亡抑制剂Ferrostatin-1,评估和REST~(RTKO)缓解AKI的协同效应。通过血清学检测肌酐以及尿素氮、q PCR实验、HE染色评估肾损伤程度。采用免疫荧光染色、Western blot评估REST的表达水平。(2)利用透射电镜技术观察肾小管上皮细胞的线粒体损伤、Western blot检测铁死亡相关蛋白表达、组织匀浆检测GSH、MDA、GCL活性等,探讨在肾小管上皮细胞敲除REST对AKI中铁死亡的影响。(3)在对照小鼠以及REST~(RTKO)小鼠建立IRI诱导的AKI to CKD模型,通过检测血清学指标肌酐、尿素氮,通过HE染色、MASSON染色、Western blot以及免疫组化评估纤维化程度以探究在肾小管上皮细胞敲除REST对AKI向CKD转化的影响。3.临床数据分析通过收集病理诊断为急性肾小管坏死(Acute tubular necrosis,ATN)肾活检标本以及肾肿瘤病人的癌旁组织行REST的免疫组化染色,并与血清肌酐、尿素氮相关性分析评估REST表达和肾损伤的关系。研究结果以及结论1.在AKI状态下,REST表达显著升高首先,在HK-2,NRK52E以及小鼠的原代肾小管上皮细胞中,HR处理和顺铂处理均能显著地诱导REST蛋白表达上调。其次,在IRI诱导的AKI小鼠模型和顺铂处理介导的AKI小鼠模型中,REST在m RNA和蛋白水平的表达均显著升高。最后,对临床肾活检AKI标本中,REST表达水平也显著升高,而且与血清肌酐、尿素氮水平均呈正相关。2.肾小管上皮细胞特异性敲除REST基因显著缓解IRI介导的AKI采用REST~(RTKO)小鼠以及REST~(flox/flox)小鼠建立IRI诱导的AKI模型,1天后取材检测肾损伤。通过肾组织HE染色、血清肌酐和尿素氮检测、q PCR检测肾组织中肾损伤相关标志物,发现在肾小管上皮细胞特异性敲除REST小鼠中,AKI显著缓解,肾功能得到明显恢复。这些结果提示REST上升加重AKI损伤。3.敲低REST表达能缓解HR损伤介导的肾小管上皮细胞铁死亡HK-2细胞敲低REST后经HR处理,PI/Calcein-AM染色、细胞活度以及LDH检测提示敲低REST显著缓解细胞死亡,转录组测序的结果提示敲低REST缓解HR损伤中的铁死亡。透射电镜观察到在HR组中,大量的线粒体固缩,密度增大,外膜破坏,线粒体嵴减少,呈现出显著的铁死亡特征,而REST干扰组显著改善这种线粒体破坏。此外,REST干扰组明显增加GSH生成水平,且减少MDA、ROS、以及脂质ROS的蓄积。为了进一步探索敲低REST对铁死亡的抑制作用,我们通过Erastin以及RSL3诱导HK-2中的铁死亡,LDH以及PI/Calcein-AM检测发现敲低REST显著缓解了RSL3诱导的铁死亡。为了探究REST的缺乏与铁死亡抑制剂的关系,我们在HK-2细胞中孵育铁死亡抑制剂Ferrostatin-1以及DFO并暴露在HR损伤下,GSH、MDA、脂质ROS检测发现敲低RESTY-27632浓度、Ferrostatin-1、DFO都显著缓解了HR损伤中的铁死亡,且敲低REST与Ferrostatin-1以及DFO存在协同作用。这些结果表明,REST能显著缓解HR模型介导的铁死亡。4.敲低REST通过上调GCLM缓解铁死亡为了探究REST调控铁死亡的机制,我们进一步通过q PCR检测了转录组测序中敲低REST后显著上调前10的基因,发现只有GCLM在体内以及体外均被敲低REST显著上调。通过小鼠原代肾小管上皮细胞中诱导REST敲除发现,在此基础上干扰GCLM使恢复的GCL活性、GSH、MDA、脂质ROS水平以及透射电镜下的线粒体损伤再次加重。这些结果提示REST缺乏可能通过促进GCLM表达使GSH生成增加从而抑制铁死亡。5.REST直接结合于GCLM基因启动子区抑制GCLM转录为了探究REST调控GCLM的机制,我们通过JASPR数据库预测了REST在GCLM启动子区域的结合位点,并根据结合位点设计了包含不同长度启动子区域的报告质粒。双荧光素酶报告系统以及Ch IP实验表明REST通过与GCLM启动子区域(-152～-132,gccgcaggccaagggccagtc)结合抑制GCLM的转录。6.肾小管上皮细胞特异性敲除REST缓解铁死亡及其介导的AKI,并延缓AKI向CKD转变采用特异性基因敲除小鼠,建立AKI模型并检测肾功能以及铁死亡相关指标。我们发现和对照小鼠相比,REST~(RTKO)小鼠中铁死亡被显著缓解。在此基础上,我们进一步采用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1治疗AKI。肾功能检测、病理学染色、以及铁死亡相关指标的检测发现,REST的特异性敲除与Ferrostatin-1存在协同效应,但是Ferrostatin-1并不能恢复GCLMMedicopsis romeroi的表达水平,这进一步提示了敲除REST基因能提高GCLM表达增强GCL活性,恢复GSH生成的独特作用。由于AKI是CKD的独立风险因素,我们进一步探索肾小管敲除REST是否延缓AKI向CKD的转变。为此,采用REST肾小管上皮细胞敲除小鼠及其对照,建立了IRI诱导的AKI to CKD模型。HE染色、Masson染色、α-SMA以及Fibronectin的免疫组化表明,肾小管上皮敲除REST可显著恢复肾功能以及延缓纤维化进程,同时GCLM以及GPX4也被显著的缓解。这些结果表明肾小管上皮敲除REST可恢复GCLM的表达,从而缓解AKI且延缓AKI向CKD的进程。研究结论本研究中,我们进行了一系列体外和体内实验,证实REST在AKI损伤后表达上调,直接结合于GCLM基因启动子区而抑制其转录,导致GSH和GPX4下调,从而促进脂质过氧化和铁死亡,最终诱导AKI及其向CKD转化。而敲除肾小管上皮细胞的REST基因则能显著改善上述效应。本课题阐明了转录因子REST及其靶基因GCLM在铁死亡介导的AKI向CKD转化中的重要作用,提示REST及其介导的铁死亡有望成为AKI的潜在治疗靶点。意义本研究通过解析REST在AKI及其向CKD进展中的生物学作用,阐释了AKI的发病新机制,为临床AKI的治疗提供新线索。

目的:1、探讨CIRBP在血管内皮损伤后内膜增生中的作用;2、探讨CIRBP对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的作用;3、明确CIRBP是否通过m TORC1途径调控VSMCs增殖和迁移。方法:本研究分为体外实验和体内实验两部分。1、FUT-175纯度体外实验:将小鼠血管平滑肌细胞分为阴性对照组和腺病毒干扰组,用完全培养基培养48小时后提取细胞总蛋白及RNA,通过western blotting以及PCLiproxstatin-1R实验检测血管平滑肌细胞中CIRBP的蛋白及m RNA表达情况;接着将血管平滑肌细胞分为Adv-NC、Adv-sh CIRBP和Adv-sh CIRBP+胰岛素组,通过western blotting实验检测m TORC1经典底物4Ebiomass liquefactionBP1和S6磷酸化水平;用Ki-67免疫荧光染色、CCK-8比色法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力。2、体内实验:将7周龄左右的C57BL/6J雄性小鼠适应性饲养一周后,白天光照12小时,按时喂予食物和水,将小鼠分为假手术组和颈动脉内皮损伤组,用粗糙导丝来回摩擦小鼠左颈总动脉血管内皮建立血管内皮损伤模型,假手术组不用导丝摩擦,其余手术过程同颈动脉内皮损伤组。术后观察小鼠状态,继续按时喂养食物和水,28天后按照分组进行血管取材,通过western blotting实验检测小鼠颈总动脉中CIRBP蛋白表达情况。为进一步探究CIRBP的作用,将小鼠分为假手术+Adv-NC组、假手术+Adv-sh CIRBP组、损伤内皮+Adv-NC组、损伤内皮+Adv-sh CIRBP组,首先在小鼠颈动脉损伤部位按照分组用干扰CIRBP腺病毒和阴性对照腺病毒孵育30分钟左右,假手术组中同样将上述腺病毒根据分组注射到左颈总动脉部位孵育相同时间,然后分别在术后第7、14、21天通过尾静脉追加注射相应的腺病毒1次,28天后进行血管取材,通过HE染色检测小鼠颈动脉内膜增生情况,免疫组化染色检测增生内膜细胞增殖情况。结果:与对照组相比,用腺病毒干扰血管平滑肌细胞后,CIRBP的蛋白及m RNA的表达均降低,干扰CIRBP之后,m TORC1的底物4EBP1和S6磷酸化水平降低,同时血管平滑肌细胞的增殖及迁移能力减弱;加入胰岛素恢复m TORC1活性后,干扰CIRBP对细胞增殖及迁移的抑制作用有逆转。小鼠颈动脉内皮损伤后,CIRBP的蛋白表达水平升高,血管内皮损伤后,内膜增生明显,与阴性对照组相比,在干扰CIRBP表达后,内皮损伤后内膜增生得到改善。结论:1、血管内皮损伤后增生内膜中CIRBP表达增加,干扰CIRBP后能抑制血管内膜增生;2、增殖期VSMCs中CIRBP表达增加,干扰CIRBP表达后抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移;3、CIRBP可能通过正向调控m TORC1活性促进血管平滑肌细胞增殖及迁移能力。

2018—2019年，以34个强抗寒甘蓝型冬油菜品系为试验材料，对其产量、品质及抗倒性进行分析和评价，挖掘优异种质资源。结果表明：不同材料间的产量、品质及抗倒性存在较大差异，单株产量变异范围为6.50～36.67 g,平均产量为21.08 g, 17NPZ240-1的产量最高；相关分析表明全株角果数(r=0.897~(**))和每角粒数(r=0.534~(**))与单株产量极显著正相关。各材料倒伏系数介于153.74～359.61,17NDL20-7的倒伏系数最低，抗倒性最强；相关分析表明抗折力(r=-0.501~(**))、重心高度(r=502~(**))、茎粗(r=-0.816~(**))、分枝部位(r=0.472~(**))和主花序长度(r=-0.679~(**))与倒伏系数呈极显著相关关系。品质性状中，含油量介于33.40%～49.54%,平均含量为43.32%,17DNL32-3的含量最高；蛋白质含量介于16.87%～27.24%,平均含量为21.18%,16NTS309-4的含量最高；油酸含量介于23.62%～68.81%,平均含量为45.92%,17NPZ242-1的含量最高；亚油酸含量介于10.62%～18.48%,平均含量为14.87%,亚麻酸含量介于5.41%～8.97%,平均含量为7.60%,芥酸含量介于0.15%～27.51%,平均含量为10.80%,17NPZ52-3的亚油酸、亚麻酸含量最高，确认细节芥酸含量最低；硫代葡萄糖苷含量介于18.47～70.35μmol·g~(-1),平均含量为34.41μmol·g~(-1),16Entinostat使用方法NTS309-7的含量最低；相关分析表明油酸、亚油酸、亚麻酸和芥酸含量间存在显著相关关系(0.421≤r≤0.913)。9个性状的综合隶属函数值F介于0.25～0.77,相差0.52,品系间差异较大。聚类分析将34份甘蓝型冬油菜材料划分为3大类群，第Ⅰ类群包含17份材料，综合表现最好，但平均含油量最低；第Ⅱ类群包含4份材料，综合表现较弱，倒伏系数均值最高，其他8个性状的平均值都处于中等水平；第ⅢTibiofemoral joint类群包含13份材料，综合表现最弱，但平均含油量最高，倒伏系数均值处于中等水平，其他7个性状的均值都处于最低水平。

脑卒中（下文简称“卒中”）已成为全球第二大死亡与残疾原因，给个人、家庭和社会造成沉重的负担。脑细胞的损伤和死亡是影响卒中患者神经功能、预后及生存质量的关键因素。炎症反应是卒中发生发展中的关键病理环节。研究表明，细胞焦亡放大了炎症反应，sociology medical加重Gefitinib体内了卒中后病理及神经功能损害。细胞焦亡作为一种新型促炎性程序性细胞死亡方式，在卒中病程中扮演https://www.selleck.cn/products/imidazole-ketone-erastin.html着重要的角色。抑制细胞焦亡可调节脑细胞损伤和死亡的进程，起到神经保护性作用。中药防治卒中具有多通路、多靶点及副作用较少等独特优势，且疗效显著。中药调控细胞焦亡的机制研究是该领域的新热点。该文依据国内外相关研究，从细胞焦亡概述、作用机制、信号通路、在卒中治疗中的应用及基于细胞焦亡的中药研究等方面进行了整理与总结，为进一步提升中药干预卒中的疗效提供新思路。

目的:药物性肝损伤(drug-induced liver injury,DILI)是由药物本身及其代谢产物直接损伤肝细胞或由药物诱发过敏反应所引起的肝脏损伤,是一种常见的药物不良反应,严重的DILI可导致肝功能衰竭甚至死亡。近年来,全球肿瘤发病率逐年上升,化疗在肿瘤综合治疗中应用越来越广泛,药物大多数经过肝脏代谢,大大加重了肝脏的负担,抗肿瘤药物引起的DILI是常见的副反应之一。5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是一种广泛使用的化疗药物,是化疗方案中常用的基础药物。已被证明可导致人类和模型动物的肝功能损伤。然而,5-FU暴露引起肝损伤的确切机制尚未完全阐明。铁死亡是一种新发现的非凋亡细胞死亡形式,是由铁积累和脂质过氧化触发的。铁死亡涉及多种病理过程,包括神经退行性疾病、癌症、溃疡性结肠炎、肝肾缺血-再灌注损伤,在各种疾病的发生发展中发挥着关键作用。但是目前对于铁死亡通路在5-FU引起的肝损伤中未见报道。因此,本实验旨在验证铁死亡途径在5-FU诱导的药物性肝损伤中的作用。研究方法:1、野生型C57BL/6J小鼠按照100 mg/kg 5-FU的剂量进行腹腔注射,连续5天。对照组注射等量生理盐水(10 m L/kg)。5日后对小鼠进行安乐死处理并收集血浆与肝脏组织。实验期间记录AZD9291小鼠体重、进食量与进水量等相关基础指标。2、H&E染色观察小鼠肝脏形态学变化,TUNEL染色检测小鼠肝组织中凋亡小体数量。免疫组织化学检测氧化指标。3、Western blot和实时荧光定量PCR检测肝脏中铁死亡与肝损伤相关因子的变化。4、超氧化物阴离子荧光探针(dihydPidnarulex作用roethidium,DHE)检测组织ROS水平。5、体外实验培养人正常肝细胞L-02细胞,检测经5-FU处理后胞内氧化水平、铁代谢水平及细胞存活率的变化。6、L-02细胞经Fer-1(1μM),DFO(100μM),GSH(1 m M),NAC(1 m M)或Zn PP(1μM)预处理后,进行5-FU(100μM)处理。采用DCFH-DA探针法或DHE探针法检测ROS水平,评价不同处理条件的细胞氧化应激水平。Western blot和实时荧光定量PCR检测细胞中铁死亡相关蛋白及基因水平的表达。结果:1、连续5天腹腔注射5-FU的C57BL/6J小鼠出现腹泻、精神萎靡和体重下降的现象,肝脏组织缩小,体积变小,血浆中ALT、AST含量升高。2、5-FU显著增加了血浆与肝脏组织中的铁含量,激活了铁死亡途径,表现为铁摄入的增加与异常的氧化水平。3、在培养的L-02细胞中,5-FU同样可以诱导铁死亡,表现为细胞中铁水平的上升与氧化/抗氧化的失衡。4、各种铁死亡抑制剂的使用缓解了5-FU诱导的细胞死亡。其中铁死亡抑制剂Fer-1缓解了5-FU引起的铁死亡相关蛋白表达异常的情况。5、HO-1抑制剂可以减缓5-FU引起的L-02的细胞死亡与氧化应激,逆转了5-FU诱导的铁死亡相关蛋白的异常表达的情况。结论:5-FU可引起药物性肝损伤。可能是肝脏中铁水平的上升、脂质过氧化堆积造成的。5-FU通过上调与铁摄入量相关的基因和蛋白来增加细胞内的铁含量,同时伴随着细胞内氧化/抗氧化系统的失调。此外,5-FU通过上调HO-1水平,加剧了铁的积累,从而进一步提高了细胞内脂质过氧化水平。这些都促进了细胞铁死亡。我们的结果为进一步研究5-FU毒性,更好地了解肝损伤HNF3 hepatocyte nuclear factor 3的机制提供新见解。

目的:通过回顾性分析217例子宫内膜不典型增生(AH)患者的术前临床病理参数资料,探索影响AH患者病情进展的危险因素及其与临床病理特征的相关性,进而对临床AH患者术后病理升级状况进行风险预测,为患者临床决策和诊疗方式的选择提供理论依据。方法:收集江苏省苏北人民医院2013年01月至2023年01月间,因子宫内膜不典型增生于妇科就诊并行全子宫手术切除诊治患者的临床病理资料进行回顾性分析,根据术后送检手术标本的病理报告结果将其分为子宫内膜不典型增生组(对照组)和子宫内膜癌组(EC组)两组。收集所有研究对象的一般临床病历资料、术前实验室血液学临床参数指标和术后常规病理特征资料等,通过logistic回归方程及受试者工作特征曲线(ROC曲线)来分析研究多个临床病理参数指标单独和联合对AH术后病理升级状况的诊断价值,应用ROC曲线确定各相关指标诊断子宫内膜不典型增生疾病进展的最佳临界值(cut-off值),根据对应cut-off值将EC组患者的临床参数指标与病理特征资料相关联,比较诸指标AUC下的诊断效能,探寻子宫内膜不典型增生患者术后病理升级的危险因素阈值并进行风险预测。结果:1.本研究217例子宫内膜不典型增生患者中有80例术后病理升级提示并发子宫内膜癌,即癌变率为36.86%,且病理类型均为子宫内膜样腺癌。EC组患者FIGO手术—病理分期IA期有68例(85%),IB期8例(10%),Ⅱ期4例(5%),无Ⅲ期、Ⅳ期患者,组织病理学分化程度以高分化48例(60%)为主。2.两组患者的年龄、绝经状态、绝经时长、术前取样至全子宫手术间隔和术前血液学单因素指标NLR、PLR、LMR、FIB、SII、CA125、CA199及HE4对诊断AH的性质方面差NN2211分子量异具有统计学意义(P<0.05),而BMI值、合并症、生育情况、就诊首发临床表现、术前获取子宫内膜组织方法及影像学检查测量出的子宫内膜厚度、MLR、PNI及CA199水平差异无统计学意义(P>0.05)。3.通过ROC曲线筛选得出,绝经时长、NLR、PLR、LMR、FIB、CA125、HE4及SII单独预测EC诊断效能的AUC值分别是0.586、0.704、0.608、0.647、0.719、0.712、0.723、0.718,其中 NLR、FIB、CA125、HE4 及 SII 五项对 EC 诊断效能中等,其最佳临界值分别为 2.125、2.71 g/L、19.03 U/M1、53.53 pmol/L和 551.625。4.高NLR、PLR、CA125水平组与同期低水平EC患者的手术病理分期和肌层浸润深度差异具有相关性。高HE4、SII水平组与同期低水平的EC患者的手术病理分期、组织学分化程度及肌层浸润深度差异具有相关性,而LMR、FIB分组水平与EC患者的FIGO手术—病理分期、组织学分级、肌层浸润深度及宫颈累及程度无明显相关性(P>0.05)。5.采用Origin的Correlation Hot分析的出PLR、NLR与SII三项指标两两之间相关性JAK抑制剂差异具有统计学意义,而CA125、HE4和炎症指标之间无明显相关性。最终纳入肿瘤标志物CA125、HE4及炎症营养指标FIB、SII四个血液学指标联合诊断筛选预测EC效能,多项联合指标诊断效能均高于单一指标的独立预测,其中四者联合预测EC的AUC值为0.911,敏感度86.30%,特异度83.20%,约登指数0.695。结论:1.本研究中子宫内膜不典型增生患Genetic instability者术后病理升级恶化为子宫内膜癌的发生率为36.86%,并且多为早期分化较好的子宫内膜样腺癌。2.EC组患者外周血炎症营养指标NLR、PLR、FIB及SII水平较高,LMR水平较低,诸相关指标作为一种术前常规检测、简单易行的无创性检查,是预测AH患者疾病进展的潜在性指标。3.血清NLR、PLR、SII、CA125、HE4 水平分组与子宫内膜癌患者的手术病理分期情况、肌层浸润深度等具有相关性,有助于对术前疑有病理升级患者的手术病理分期、组织学分级、肌层浸润程度及宫颈累及情况等病理特征进行评估预测。4.与单一的血液学指标相比,免疫炎症血液学参数联合肿瘤标志物对子宫内膜不典型增生疾病的判断和监测病情进展具有更高的准确性与敏感性。

目Tezacaftor浓度的：探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR) C677T、A1298C基因分布频率与不明原因习惯性流产selleck Alisertib(unexplained habitual abortion, UHA)之间的相关性。方法：将2021年1月—2022年12月于苏州大学附属第二医院就诊的104例UHA患者纳入病例组，589名健康妊娠Reclaimed water女性作为对照组。分别采集两组静脉血并提取DNA，实时荧光基因扩增技术检测MTHFR基因C677T位点和A1298C位点的多态性，分析各基因分布频率与UHA的关系。结果 ：MTHFR C677T基因型频率在病例组分布为野生型(CC)17.31%、杂合突变型(CT)50.96%和纯合突变型(TT)31.73%，对照组为CC 29.03%、CT 48.73%和TT 22.24%，两组分布差异存在统计学意义(χ2=7.909, P<0.05);MTHFR A1298C基因型分布频率在两组间差异无统计学意义(P>0.05)；病例组MTHFR 677的T等位基因频率明显高于对照组(OR=1.532, 95%CI:1.138～2.063, P=0.005);Pearson相关性分析显示，基因型TT、等位基因T是不明原因习惯性流产的危险因素(OR>1, P<0.05)。结论：苏州地区育龄女性携带MTHFR 677T等位基因和携带TT基因型可增加UHA风险，而单独携带MTHFR 1298C等位基因则不增加风险发生。

酵母微囊INCB28060临床试验是一种表面粗糙多孔、核心中空的天然药物递送载体，具有良好的安全性和高靶向性、高稳定性，在口服药物递送系统中具有极佳的应用前景。酵母细胞经过酸碱和有机溶剂处理、洗涤后可获得疏松多孔的酵母微囊，后者可借助静电相互作用、被动扩散、疏水作用等方式包载药物。酵母微囊表面主要由β-葡聚糖组成，可在胃肠环境中保持稳定，可被免疫细胞表面相关受体识别，从而激活免疫反应，并可在被摄取后随淋巴细胞的运动将所载药物运送至病变部位。酵母微囊安全性高，非常适合递送疫苗、抗炎药物及抗肿瘤药物，其不仅可实现上述药物的口服递送，而且能增强药物效果，提https://www.selleck.cn/products/ag-221-enasidenib.html高药物的靶向性。今后可开展更多全身转运机制的相Drug response biomarker关研究或开发更加高效的联合给药系统，以充分发挥酵母微囊的临床价值。

研究背景:脑梗死,又称为Liraglutide NMR缺血性脑血管病,是一种因脑供血动脉狭窄或闭塞,导致脑供血不足而引起的脑组织坏死的疾病。脑梗死是导致死亡和长期残疾的主要原因之一,已成为最常见的威胁人类生命的神经系统疾病。全球每年约有1500万患者发生脑梗死,导致超过50万患者死亡,另有500万患者永久性残疾。此外,5年后复发性脑梗死的发生率为11.3%。虽然通过再灌注恢复血液供应可以改善临床结果,但快速再灌注也可能会导致脑损伤恶化。脑缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,I/R)损伤已成为中风患者日益严峻的挑战。细胞死亡是所有组织中主要的常见的I/R损伤特征,因此是I/R损伤的稳定病理指标。铁死亡是由谷胱甘肽(glutathione,GSH)依赖性脂质过氧化物清除网络失效引起的一种非凋亡形式的调节性细胞死亡。铁死亡的发生依赖于铁和活性氧(reactive oxygen species,ROS),被认为是再灌注损伤的原因。铁死亡通常伴有脂质修复酶(谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4))功能障碍、大量铁积累和多不饱和脂肪酸脂质过氧化。它是由GPX4的活性丧失和随后的基于脂质ROS物质的积累驱动的。大脑由于其高代谢率和相对较低的抗氧化防御能力,易受ROS水平的影响,且由于脑部富含的膜结构中存在高浓度的多不饱和脂肪酸,使得大脑中的氧化损伤主要表现为脂质过氧化。且大脑是一个随年龄增加,铁易在其中逐渐蓄积的器官,而脑内铁蓄积易导致大量氧化自由基、过氧化物等的产生,从而引发脂质过氧化反应与蛋白质功能上的紊乱,最终导致神经元的变性、死亡。二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM)是从木质藤本植物中提取的,主要活性成分是类黄酮。黄酮类化合物具有较好的清除氧自由基、抗氧化、抗血栓、抗炎、抗肿瘤等多种特殊作用。除了黄酮类化合AM-2282 molecular weight物的一般特性外,有研究表明,DHM对心肌I/R损伤、肝脏I/R损伤具有强大的保护作用。另外,DHM在脑梗死疾病中具有改善脑损伤的功效。近期研究表明DHM可通过激活Nrf2/HO-1信号途径抑制氧-葡萄糖剥夺/再恢复(oxygen-glucose deprivation and reoxygenation,OGD/R)导致的 HT22 细胞氧化应激与凋亡。这表明DHM可能在脑I/R损伤中具有保护作用。但目前尚不清楚DHM在脑I/R损伤中是否能改善脑损伤,及其通过何种机制改善脑损伤。我们对DHM可能的作用靶点进行分析,发现神经鞘氨醇激酶(Sphingosine kinase 1,SPHK1)、雷帕霉素靶蛋白mTOR为DHM的相关作用靶点。推测DHM可能是通过作用于SPHK1、mTOR在脑I/R过程中发挥保护作用。第一部分不同剂量DHM对脑I/R损伤大鼠的治疗作用目的:体内探究DHM在脑I/R损伤大鼠中的治疗作用及其对脑组织内铁死亡与SPHK1/mTOR信号途径的作用。方法:1.采用大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebra l artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)手术构建脑I/R损伤大鼠模型,并接受低、中、高剂量DHM(100、200、250mg/kg)的治疗处理。2.采用Zea Longa法进行行为学评分判断大鼠神经功能缺损情况。3.采用湿-干加权法检测脑组织中的含水量。4.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法评估脑梗死体积。5.采用TUNEL染色检测脑组织中细胞凋亡水平。6.Western blot检测脑组织内SPHK1、mTOR、p-mTOR以及铁死亡相关蛋白ACSL4、PEBP1、GPX4表达水平。结果:1.不同剂量DHM可改善脑I/R大鼠神经功能缺损。2.不同剂量DHM可减少脑I/R大鼠脑水肿及脑梗死体积。3.不同剂量DHM可减少脑I/R大鼠脑组织中细胞凋亡。4.不同剂量DHM可抑制脑I/R大鼠脑组织内SPHK1、p-mTOR、ACSL4和PEBP1蛋白表达,促进GPX4表达。结论:DHM能够改善脑I/R损伤,抑制SPHK1/mTOR信号途径和铁死亡相关蛋白的表达,且DHM对脑I/R损伤的治疗作用具有剂量依赖性。第二部分DHM在OGD/R诱导的神经元铁死亡中的作用目的:体外探究DHM对OGD/R诱导的小鼠海马神经元细胞(HT22)活性的影响及其对SPHK1/mTOR信号通路及铁死亡的作用。方法:1.体外通过OGD/R诱导HT22细胞建立脑I/R损伤的细胞模型,并经过不同浓度的DHM(1、10、20、30μM)处理。2.CCK-8实验检测HT22细胞增殖活性。3.流式细胞仪检测HT22细胞凋亡水平。4.ROS试剂盒检测细胞中ROS含量。5.铁含量检测试剂盒检测细胞内铁的含量。6.Western blot检测细胞内SPHK1、mTOR、p-mTOR以及铁死亡相关蛋白ACSL4、PEBP1、GPX4表达水平。结果:1.不同剂量DHM可提高OGD/R诱导的HT22细胞的增殖活性,且呈剂量依赖性。2.不同剂量DHM可减少OGD/R诱导的HT22细胞的凋亡,且呈剂量依赖性。3.DHM可减少OGD/R处理的HT22细胞中的ROS和铁含量。4.DHM 可抑制 OGD/R 处理的 HT22 细胞内 SPHK1、p-mTOR、ACSL4 和 PEBP1的蛋白表达,促进GPX4的表达。结论:DHM呈剂量依赖性增强OGD/R处理的HT22细胞的细胞活性并抑制细胞凋亡。DHM通过SPHK1/mTOR信号通路减少OGD/R处理的HT22细胞内铁死亡。第三部分DHM抑制OGD/R诱导神经元铁死亡的作用机制目的:体外探究DHM改善脑I/R损伤的作用机制。方法:1.体外通过OGD/R诱导HT22细胞建立脑I/R损伤的细胞模型,并经30μM DHM处理,之后转染si-GPX4、SPHK1过表达载体或MHY1485(mTOR激活剂)。2.CCK-8实验检测HT22细胞增殖活性。3.流式细胞仪检测HT22细胞凋亡水平。4.ROS试剂盒检测细胞中ROS含量。5.铁含量检测试eye infections剂盒检测细胞内铁的含量。6.Western blot检测HT22细胞内SPHK1、mTOR、p-mTOR以及铁死亡相关蛋白ACSL4、PEBP1、GPX4 表达水平。结果:1.DHM治疗可增加OGD/R处理的HT22细胞的活性,抑制细胞的凋亡,而沉默GPX4表达可抑制该作用。2.DHM治疗可减少OGD/R处理的HT22细胞内的ROS和铁含量,而沉默GPX4表达可促进ROS和铁含量的积累。3.DHM可抑制OGD/R处理的HT22细胞内ACSL4和PEBP1的蛋白表达,促进GPX4的表达,而沉默GPX4表达可促进铁死亡相关蛋白ACSL4和PEBP1的表达,抑制GPX4表达。4.DHM处理增强了 OGD/R处理的HT22细胞的细胞活力并抑制了细胞凋亡,但SPHK1过表达或MHY1485处理均削弱了 DHM的作用。5.DHM处理降低了 OGD/R处理的HT22细胞中脂质ROS和细胞内铁的水平,而SPHK1过表达或MHY1485处理增加了 ROS和细胞内铁含量。6.DHM处理导致OGD/R处理的HT22细胞中SPHK1表达降低和p-mTOR表达进一步降低。DHM处理对SPHK1和p-mTOR表达的影响通过SPHK1过表达或MHY1485处理得以挽救。结论:DHM通过抑制SPHK1/mTOR信号通路并调节GPX4表达减少了 OGD/R处理的HT22细胞中的铁死亡。