SRC信号通路

采用转录组测序的方法挖掘防风SSR位点信息并设计特异引物，以期为防风的种质资源遗传多样性研究提供有力依据。对防风种子净度、千粒重、发芽率、活力等种子特性进行统计，并对转录组数据库中长度1 kb以上的12 606条unigene,利用MISA软件搜Iodinated contrast media索SSR位点信息，使用Primer 3设计引物，以筛选得到的43对SSR引物分析28份不同来源防风材料的多LY2157299化学结构态性。结果显示不同种源防风在净度、千粒重、发芽率、活力、种子长宽等方面存在差异，其中发芽率、活力的差异较为明显，HB-ZJK1、NMG-CF4、NMG-BT、NMG-HLE1、NMG-CF2的千粒重、发芽率、活力方面明显高于其他种源。在得到的86 233条unigene序列中利用MISA软件发现有12 606条unigene序列上共包含了15 958个SSR位点，SSR位点unigene数占unigene总数的14.62%,平均每5 009 bp出现1个SSR位点，SSR位点的重复类型以单核苷Transmembrane Transporters抑制剂酸和二核苷酸为主，G/C、TC/AG是单核苷酸和二核苷酸的优势基元，利用28个不同产地防风材料对所有引物进行筛选，得到条带清晰、稳定多态性好的引物。聚类分析表明，28份防风种质资源的生物性状及遗传多样性的聚类结果大致吻合，相同产地(HB-AG1、HB-AG2、HB-ZJK1、HB-ZJK2)的大多聚在一起，亲缘关系较近。防风转录组中SSR出现频率较高、类型丰富且多态性高，为其种质资源鉴别、遗传图谱构建和分子辅助育种等提供了候选分子标记。

镁(EPZ-6438Magnesium,Mg)基可生物降解合金及其复合材料因其具有优异的生物活性和力学性能而引起了临床医学领域和材料科学领域科研工作者极大的兴趣。然而打造集耐腐蚀和抗菌一体化的医用可降解Mg合金及Mg基复合材料,对于将Mg合金大规模推广至骨科临床应用而言至今依旧面临诸多挑战。本研究以保证Mg合金抗菌性能的同时提高Mg合金的耐蚀性能为主线,采用了具有广谱抗菌效果的Ag元素和具有优异生物相容性的羟基磷灰石(HA)作为主要介质,通过两步法对AZ31BMg合金进购买Dinaciclib行一系列表面改性,即第一步通过搅拌摩擦加工(FSP)对AZ31BMg合金进行一系列表面改性制备了含有羟基磷灰石(HA)的Mg-Ag-HA复合材料,第二步采用微弧氧化的策略在上一步基础上原位生长出含Ag的MgO基陶瓷涂层,旨在利用本研究采用的双联工艺开发出一种新型的适用于医用金属材料的组装结构。本文采用多种科学研究方法,包括XRD、SEM、EDS、TEM、XPS、电化学工作站和生物学性能检测方法,研究了Ag含量对复合材料(涂层前驱体)及其涂层微观组织、腐蚀行为、抗菌性能和生物相容性的影响规律。以下是本文的主要结论:(1)利用FSP技术制备了含有几乎等量HA但不同含Ag量的Mg-Ag-HA复合材料,结果表明,加入平均粒径为1μmTethered cord的Ag颗粒在10道次FSP作用下被打碎成平均粒径为10 nm左右的纳米Ag颗粒并弥散分布在Mg基体中。(2)复合材料中少量Ag的引入可以提高复合材料的耐蚀性能,但随着Ag含量的逐渐提高,电偶腐蚀作用增强,复合材料耐蚀性能降低。得益于Ag纳米颗粒释放的Ag离子使得即便最低含Ag量的FAg0.1也拥有高于99%的抗菌效果。与BM相比,少量Ag的加入可以提高生物相容性,但随着Ag含量的逐渐提高细胞毒性提高。(3)采用MAO在Mg-Ag-HA复合材料的基础上原位生成了一层含Ag的MgO基陶瓷涂层,结果表明,基底和电解质产生的元素可以复合到涂层中,涂层中来自前驱体的HA促进了涂层的生长和成型,涂层中来自前驱体的Ag颗粒尺寸未发生明显改变。前驱体中Ag的含量变化引起了涂层微观组织的相变,电偶腐蚀作用越强,涂层中MgO相的比例越低。(4)MgO相的比例与Ag含量变化共同决定的涂层的耐蚀性能,其中Ag的作用占主导地位,前驱体中Ag含量在1%以内提升时,涂层耐蚀性能逐渐提高,MFAg1.0拥有最佳的耐蚀性能,前驱体中Ag含量在大于1%的范围外提升时,涂层耐蚀性能逐渐降低。涂层中来自前驱体的Ag纳米颗粒依旧可以赋予涂层优异抗菌性能,即便最低含Ag量的MFAg0.1也拥有高于90%的抗菌效果。涂层中少量Ag和HA的引入使涂层生物相容性的提高效果放大,但随着Ag含量的提高细胞毒性逐渐提高。

为探究影响小鼠糖尿病肾病（diabetic kidney disease，DKD）进展的免疫细胞及细胞间相互作用，本研究应用CellChat软件对单细胞RNA测序（single-cell RNA-sequencing，scRNA-Seq）数ATM/ATR抑制剂据进行分析。预测在早期DKD肾脏免疫细胞中，作为CCL、MIF和CXCL三个主要的信息流之一的MIF信号显著降低，这主要表现在Mif和其受体基因Cd44、Cxcr4和Cxcr2的表达降低；同时，F13a1~(+)巨噬细胞不再响应MIF信号。早期DKD肾脏中，F13a1~(+)巨噬细胞是细胞间相互作用数量和强度变化最大的免疫细胞。F13a1~(+)巨噬细胞信号配体表达的改变导致细胞间信号ANGPTL、IL2和IL16消失Hepatic lipase以及KIT和PROS信号出现。值得注意的是，在早期DKD肾脏中，F13a1~(+)巨噬细胞显著降低了与免疫细胞活化相关的转录因子基因Etv1 (ETS Variant Transcription Factor 1)的表达。采用基因集富集功能分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）法对差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs）的功能研究发现，早期DKD肾脏中F13a1~(+)巨噬细胞的趋化因子媒介的信号通路、免疫反应和髓系白细胞介导的免疫等生物过程下调；Etoposide溶解度而免疫反应激活、吞噬作用和造血前体细胞分化等生物过程上调。应用饮食诱导的糖尿病小鼠肾脏验证发现，除KIT信号外，以上结果均有良好复现性。本研究揭示F13a1~(+)巨噬细胞可能通过降低Etv1的表达调节其免疫相关活性，并通过改变MIF信号以及TSLP-(IL7R+CRLF2)、IL16-CD4、ANGPTL4-SDC3/4和PROS1-AXL配体-受体的相互作用调控F13a1~(+)巨噬细胞与免疫细胞间的通讯，从而在小鼠DKD的发生发展中发挥关键作用。

由尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc)引起的香蕉枯萎病是香蕉上最重要的病害之一,其中以4号小种(Foc4)危害最为严重。在前期已建立Foc4分泌蛋白质数据库基础上,本文对其中的一个未表征蛋白UncTelaglenastat核磁haracterized protein (命名为FoUPE4)功Medical Scribe能进行了研究。FoUPE4不含有N-端信号肽,SecretomeP 2.0预测其NN-score≥0.5,属于非经典分泌蛋白,在植物病原真菌中高度保守。EffectorP 3.0预测其为候选效应子。qRT-PCR分析表明,FoUPE4表达水平在Foc4侵染香蕉早期显著上调。采用同源重组策略,获得了敲除突变体ΔFoUPE4和基因回补突变体ΔFoUPE4-com。与野生型菌株相比,ΔFoUPE4在菌落形态、生长速率、分生孢子形态、对胁迫因子的敏感性等方面均无显著变化,但产孢量显著减少,产孢相关基因NSC 119875体内实验剂量表达显著下降。同时,ΔFoUPE4致病性显著下降,致病相关基因表达量显著下调;而ΔFoUPE4-com致病性恢复到Foc4野生型水平。在ΔFoUPE4侵染早期,巴西蕉根活性氧积累增强、水杨酸和茉莉酸信号途径等相关基因表达量显著上调;说明FoUPE4敲除影响了Foc4对巴西蕉的定殖能力,并导致巴西蕉防御相关基因表达上调,进而影响了Foc4的致病力。

目的 通过随机双盲对照研究，探索左前额叶高频重复经颅磁刺激(repetitivetranscranial magnetic stimulation, rTMS)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的精神行为症状(behavioral and psychological symptoms of dementia, BPSD)的疗效及安全性。方法 筛选2020年4月至2022年1月在上海市精神卫生中心老年科住院的AD患者45例，年龄60～85岁，符合简明精神状况量表(MMSE):2～24分；临床痴呆评定量表(CDR):1～3分；Hachinski缺血指数量表(HIS)≤4分；痴呆病理SAHA浓度行为评定量表(BEHAVE-AD)≥8分。采用随机、双盲、伪刺激对照的临床实验设计，将患者分为rTMS干预真刺激组和伪刺激组，每天治疗1次，持续约22 min左右，每周5次，4周，共20次，最终AZD9291小鼠完成实验的患者28例(真刺激组13例，伪刺激组15例)。2组均给予常规药物治疗，在基线期和4周干预结束后，分别进行疗效和安全性评估。结果 干预后，真刺激组的神经精神症状量表(NPI)、 AD病理行为评分表(BEHAVE-AD)及柯恩-曼斯菲尔德激越情绪行为量表(CMAI)的减分高于伪刺激组，分别为(28.85±8.23)vs(8.20±6.79)、(12.85±7.76)vs(7.07±4.57)、(16.31±6.68)vs(9.47±6.86),差异均存在统计学意义(p<0.05);真刺激组的NPI量表妄想、激越、情绪不稳和异常行为4个因子减分高于伪刺激组，差异存在统计学意义(p<0.05);真刺激组抗精神病药物日剂量增量低于伪刺激组(9 vs 50),差异存在统计学意义(p<0.05);真刺激组不良反应为短暂的头皮发紧2例和轻度头痛1例，伪刺激组为短暂的头皮发紧1例和面部肌肉收缩感1例，2组患者均能耐受，发生率无统计学差异，均无严重不良事件。结论 左前额叶高频rTMS可能可以改善阿尔茨海默病患flow mediated dilatation者精神行为症状，是一种安全有效的治疗方法。

目的:观察清肺凉血方联合双波长强脉冲光治疗女性肺LGK-974经风热型玫瑰痤疮的临床疗效，并对其可能的机制进行初步研究。方法:2020年5月—2020年12月治疗玫瑰痤疮女性患者105例，按照随机数字表法分为强脉冲光组、中药组和联合组，每组35例。强脉冲光组治疗第0周、第2周、第4周、Behavioral medicine第6周、第8周进行双波长强脉冲光照射治疗，中药组服用清肺凉血方，联合组在强脉冲光组治疗的基础上服用清肺凉血方；疗程为8周。采用玫瑰痤疮观察指标评分表评价3组患者的治疗效果，治疗前后采用酶联免疫吸附法检测血清IL-17和IL-37含量。结果:联合组总有效率为88.5%,高于强脉冲光组的71.4%和清肺凉血方组的74.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后，联合组的红斑、毛细血管扩张、灼热、干燥等症状体征评分均低于治疗前，差异具有统计学意义(P<0.05);联合组的红斑及毛细血管扩张评分低于中药组，PD-0332991分子量而灼热及干燥评分低于强脉冲光组，差异具有统计学意义(P<0.05)。联合组血清IL-17和IL-37水平较治疗前下降，差异具有统计学意义(P<0.05),联合组治疗后血清IL-17和IL-37水平低于强脉冲光组，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:清肺凉血方联合双波长强脉冲光可以有效改善玫瑰痤疮患者的临床症状体征，其作用机制可能与下调IL-17及IL-37水平有关。

电针已在多种疾病的临床应用和科学研究中被证实拥有良好的镇痛效果,其对神经病理性疼痛和内脏疼痛的治疗效果尤为显著。研究发现,多种腺苷受体在电针缓解内脏超敏(Visceral Hypersensitivity,VH)中发挥重要作用,其中腺苷受体A1亚型(Adenosine Receptor A1,ADORA1)已被证实在外周组织中通过抑制IL-1β和P物质(SP)的表达缓解VH症状,但中枢ADORA1是否参与电针缓解VH仍不明确。反刍动物的电针镇痛效果优于其他物种,本试验在山羊上建立VH模型,研究电针缓解VH效果,了解其对山羊下行痛觉调制系统中ADORA1及其下游分子的影响,在此基础上采用化学法诱导小鼠内脏超敏,探究电针小鼠脊髓中ADORA1配体及其通路信号分子的变化,阐明电针通过ADORA1缓解VH的中枢机制。1.电针通过下行痛觉调制系统中的ADORA1-PLCB3信号通路缓解山羊内脏超敏为探究电针缓解VH的中枢机制,本试验通过回肠壁注射TNBS建立山羊的回肠炎性VH模型。自造模第7天开始,每3天通过电针刺激山羊“后三里”穴30 min,共7次。每次电针后,记录结直肠扩张(CRD)引起的山羊疼痛行为和内脏运动反应(VMR)变化。第7天和25天采集山羊回肠,通过宏观与微观病理变化以及炎性物质浓度变化评估其炎症状态。第25天采集山羊大脑中PAG、RVM和脊髓(SC)T11段组织,检测其中的c-Fos和CGRP的蛋白表达水平,评估山羊中枢敏化状态;检测腺苷(ADO)和磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)在PAG、RVM和SC中的含量变化;检测ADORA1、PLCB3和TRPV1在PAG、RVM和SC中的表达水平和ADORA1的分布情况。结果显示,在造模后第7天TNBS可以诱导山羊严重的回肠炎以及明显的VMR升高,并引起山羊中枢c-Fos和CGRP的表达水平升高,产生中枢敏化。在试验第25天检测发现,TNBS下调了山羊中枢ADORA1和PLCB3表达水平,但上调了TRPV1的表达。相比于TNBS组,电针显著抑制了由TNBS诱导的VMR升高,逆转了TNBS引起的c-Fos和CGRP上调,抑制了山羊中枢敏化;同时,电针增加了PAG、RVM和SC中ADO的浓度以及ADORA1和PLCB3的表达水平,下调了TRPV1的表达,并降低山羊中枢中PIP2的含量。以上结果表明,电针可能通过激活ADORA1-PLCB3信号通路减少中枢中PIP2从而抑制TRPV1激活缓解山羊内脏超敏。2.电针通过脊髓中ADORA1-PLCB3信号通路缓解小鼠内脏超敏关于ADO和ADORA1的近期研究结果表明它们在对各种疼痛的治疗中发挥积极作用。笔者已经在山羊中通过试验证明电针可能通过ADORA1-PLCB3信号通路缓解山羊VH,并在小鼠上成PF-02341066功建立了回肠炎性内脏超敏模型。但电针在小鼠中是否通过与山羊相同或相似的机制缓解小鼠VH仍不明确。因此在山羊试验结果的基础上,本研究以小鼠为模式动物继续探索电针缓解VH的中枢机制。本试验首先通过TNBS乙醇溶液回肠腔内注射建立小鼠VH模型:小鼠麻醉后,手术取出回肠和盲肠,在距回盲韧带处3 cm的回肠腔内注入100μL含5 mg TNBS的40%乙醇溶液,对照组注入等量生理盐水。分别在3、7和20天,评估小鼠疾病活动指数和痛阈变化情况,采集小鼠的回肠和脊髓T11段,观察回肠的宏观和微观病理变化;检测小鼠脊髓中c-Fos和CGRP的蛋白表达水平,评估小鼠的中枢敏化状态。结果显示,TNBS可以诱导小鼠严重的回肠炎症,在第3天病理变化显著;第7天仍显著高于对照组;至第20天时各种炎症检测指标之间的差异已经消失。小鼠的痛阈变化自造模开始后,期间虽有一定程度上升,全程均显著低于对照组,持续至第20天;TNBS造模小鼠脊髓中的c-Fos和CGRP的蛋白表达水平在第7和20天显著高于对照组,提示第20天小鼠仍处于中枢敏化状态。以上试验结果表明,100μL含5 mg TNBS的40%乙醇溶液回肠腔内注射可以引发小鼠回肠炎,并诱导小鼠产生持续至少20天的VH。对VH小鼠进行电针处理,通过检测发现,电针产生和其在山羊模型上相似的结果:即电针缓解了小鼠的VH并上调了ADORA1在小鼠脊髓中的表达。在以上试验基础上,鞘内注射ADORA1激动剂或拮抗剂后对VH小鼠进行电针处理,结果显示ADORA1的拮抗剂逆转了电针的镇痛作用,证明电针PF-03084014发挥镇痛作用需要ADORA1的参与。试验结果还显示,单次电针可以增加小鼠脊髓中ADO的含量,且小鼠的痛阈与脊髓中ADO含量存在正相关关系,电针在升高ADO浓度的同时减少了PIP2的含量。本研究在小鼠原代神经元上对ADO和ADORA1下游通路进行了进一步探究:ADORA1激活后,神经元中的PIP2含量显著下降,同时Ca~(2+)的浓度明显下降,这与单独激活PLCB3的结果一致;相反地,在先抑制PLCB3后再激活ADORA1,神经元中的PIP2和Ca~(2+)则一直保持较高浓度,说明ADORA1激活后通过PLCB3途径快速消耗神经元内的PIP2和Ca~(2+)发挥功能。以上结果表明电针通过升高小鼠脊髓中的ADO从而激活ADORA1-PLCB3途径发挥对小鼠VH的缓解作用。电针的治疗效Bioconversion method果具有累积作用,即多次电针的效果优于单次电针,因此本试验还探究了电针与ADORA1表达量及其与ADO含量的量效关系,结果显示:随着电针次数的增加(7次内),ADORA1表达量逐渐升高,而电针与ADO的含量变化则不存在这种量效关系;电针与小鼠脊髓中的TRPV1的表达量同样存在量效关系:随着电针次数的增多,TRPV1的表达量逐渐下降。以上结果共同证明:电针通过增加小鼠脊髓中ADO含量,激活ADORA1-PLCB3信号通路快速消耗神经元内PIP2和Ca~(2+)缓解小鼠内脏超敏,并通过上调ADORA1表达和下调TRPV1的表达实现多次电针对小鼠内脏超敏的累积缓解作用。

目的 分析研究抑郁症患者服药依从性与家庭关怀度、病耻感及社会适应能力的关系。方法 选取2021年6月～2023年2月某院收治的409例抑郁症患者作为研究对象，根据Morisky服药依从性量表将得分<3分的患者分为依从性良好组（n=337），得分≥3分的患者分为依从性不良组（n=72）。比较两组患Periprosthetic joint infection (PJI)者的家庭关怀度指数问卷（APGAR）、病耻感量表及社会功能缺陷筛选量表（SDSS）评分；采用多因素Logistic回归分析抑郁症患者获悉更多服药依从性与家庭关怀度、病耻感及社会适应能力的关系。结果 依从性良好组的APGAR、病耻感量表及SDSS评分均优于依从性不良组，差异具有统计学意义（P<0.05）；多因素Logistic回归分析显示，年龄≥60岁（OR=1.898）、初中及以下学历（OR=1.872）、APGAR低评Bucladesine分（OR=2.061）、病耻感量表高评分（OR=2.061）及SDSS高评分（OR=1.972）均是抑郁症患者服药依从性的独立危险因素（P<0.05）。结论 抑郁症患者的服药依从性受到多种因素影响，与家庭关怀度、病耻感及社会适应能力密切相关。

【目的】分析蒺藜苜蓿Medicago truncatula生物钟基因MtTOC1a的蛋白结构，探究MtTOC1a在生物钟系统中的生物学功能，比较其与拟南芥Arabidopsis thaliana的AtTOC1功能相似性和差异性。【方法】通过生物信息学分析，在全基因组范围内鉴定了TOC1在蒺藜苜蓿中的同源基因。构建MtTOC1a基因的表达载体，利用农杆菌介导法引入到拟南芥野生型Col、及相应的功能丧失突变体toc1-2中，进行遗传互OXPHOS抑制剂补分析。【结果】Mt TOC1a和MtTOC1b均具有保守的功能结构域和三维结构。遗传分析表明，在早期光形态建成中，外源转化的MtTOC1a完全恢复了toc1-2的下胚轴伸长表型，但对toc1-2的提前开花表型没有显著影响。在引入CAB::LUC报告基因的株系中，外源转化MtGenetic-algorithm (GA)TOC1a在连续光照下使短周期突变体toc1-2的近日节律周期延长，但仍不能完全恢复至野生型水平。【结论】MtTOC1a和拟南芥AtTOC1的功能存在相似性，但在不同的下游调控途径中所扮演购买MK-2206的角色存在差异。本研究结果为进一步探索MtTOC1a基因的功能，利用MtTOC1a基因改造苜蓿的重要性状提供了理论依据。

【目的】分析蒺藜苜蓿Medicago truncatula生物钟基因MtTOC1a的蛋白结构，探究MtTOC1a在生物钟系统中的生物学功能，比较其与拟南芥Arabidopsis thaliana的AtTOC1功能相似性和差异性。【方法】通过生物信息学分析，在全基因组范围内鉴定了TOC1在蒺藜苜蓿中的同源基因。构建MtTOC1a基因的表达载体，利用农杆菌介导法引入到拟南芥野生型Col、及相应的功能丧失突变体toc1-2中，进行遗传互OXPHOS抑制剂补分析。【结果】Mt TOC1a和MtTOC1b均具有保守的功能结构域和三维结构。遗传分析表明，在早期光形态建成中，外源转化的MtTOC1a完全恢复了toc1-2的下胚轴伸长表型，但对toc1-2的提前开花表型没有显著影响。在引入CAB::LUC报告基因的株系中，外源转化MtGenetic-algorithm (GA)TOC1a在连续光照下使短周期突变体toc1-2的近日节律周期延长，但仍不能完全恢复至野生型水平。【结论】MtTOC1a和拟南芥AtTOC1的功能存在相似性，但在不同的下游调控途径中所扮演购买MK-2206的角色存在差异。本研究结果为进一步探索MtTOC1a基因的功能，利用MtTOC1a基因改造苜蓿的重要性状提供了理论依据。