背景和目的过量服用对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)是引起药物性肝损伤的常见原因。N-乙酰半胱氨酸(N-acetyNasal pathologieslcysteine,NAC)是FDA唯一批准用于治疗APAP过量的药物,但其作用的时限性限制了它的应用。因此,研究有效的治疗靶点是刻不容缓的。铁死亡是近年来新发现的一种细胞死亡方式,主要特征有GSH耗竭和过量的游离铁过载。研究表明铁死亡是自噬依赖性的,可以通过铁自噬途径释放出过量游离铁,引起细胞铁死亡。但是铁自噬是否在APAP引起的急性肝损伤中发挥作用尚不得而知。因此本研究的目的是探讨铁自噬介导的铁死亡是否引起的APAP诱导的急性肝损伤。方法本研究主要分为DS-3201细胞培养体内实验和体外实验两个方面。体内实验:实验一:建立APAP诱导小鼠急性肝损伤的模型。将24只ICR小鼠(雄性)随机分为4组,所有小鼠禁食12h后分别在给APAP后0、2、6、24h后剖杀留取肝脏血样,进行肝功能、自噬和铁死亡相关指标检测。实验二:使用铁死亡抑制剂Fer-1观察其能否通过抑制铁死亡来保护APAP诱导的急性肝损伤。将24只小鼠随机分为对照、Fer-1组,APAP组,APAP+Fer-1组,预前1小时给药Fer-1(5mg/kg),给药APAP(300mg/kg)6h后剖杀老鼠后取材。实验三:观察铁螯合剂DFO对APAP暴露后小鼠生存率的影响,将20只ICR小鼠(雄性)随机分为APAP组和APAP+DFO组,小鼠腹腔注射APAP(500 mg/kg)前1h腹腔注射DFO(200mg/kg),观察小鼠生存情况至48h。体外实验:实验一:建立APAP(25m M)诱导AML-12细胞Roxadustat试剂游离铁、脂质过氧化物和铁自噬相关蛋白的时效关系:使用Ferroorange检测细胞内游离的亚铁离子,C11-BODIPY检测脂质过氧化物,WB检测铁自噬相关蛋白,使用PI染色检测细胞死亡。实验二:观察铁过载在APAP诱导肝细胞铁死亡中的作用:在APAP(25m M)染毒前1h给予DFO(400m M)预处理,检测游离铁、脂质过氧化物及肝细胞死亡的变化。实验三:观察自噬抑制剂CQ对铁死亡的影响:在APAP(25m M)染毒前给予CQ(5u M)预处理检测蛋白NCOA4和FTH,流式细胞术检测游离铁和肝细胞死亡的变化。实验四:探讨铁自噬在APAP诱导肝细胞铁死亡中的作用:使用RNA沉默技术敲低AML-12肝细胞内的NCOA4,观察其对游离铁和肝细胞死亡的影响.结果本研究显示,铁死亡促进了APAP诱导的急性肝损伤,且铁死亡主要发生在急性肝损伤的早期,即给APAP后的2h和6h,使用Fer-1干预可以保护APAP诱导的急性肝损伤。进一步研究发现,在给药后2h和6h,自噬已经被激活,NCOA4的m RNA处于升高水平,但是蛋白却是下降趋势,表明此时期的铁死亡是由铁自噬介导的;铁离子螯合剂DFO可以提高小鼠的生存率。体外实验表明,APAP刺激后会引起AML-12肝细胞产生脂质过氧化物和游离铁过载。自噬抑制剂CQ能降低APAP诱导的铁离子;敲低NCOA4后再给予APAP刺激,游离铁和细胞死亡率都降低。结论铁死亡参与APAP诱导的急性肝损伤;铁过载可能是APAP诱导肝细胞铁死亡的启动因素;铁自噬介导的铁过载促进APAP诱导的肝细胞铁死亡。