LSD1抑制剂ORY-1001通过激活Notch1-c-Myc通路调控小细胞肺癌细胞中PD-L1表达

目的:通过对H-146细胞在不同时间和剂量下的ORY-1001处理,选用LSD1、Notch1、c-Myc、PD-L1作为实验的检测指标研究ORY-1001对小Src抑制剂细胞肺癌细胞中程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)的调控及其潜在的机制。方法:体外培养小细胞肺癌H-146细胞,再用不同浓度(0、0.001、0.01、0.1、1、10、20μmol/L)的ORY-1001处理细胞,分别PF-03084014 IC50在48小时、72小时、96小时后,使用CCK-8法测定细胞增殖的抑制率并计算IC50。同时,运用流式细胞术评估各组细胞中PD-L1的表达水平。基于以上结果选定合适的处理时间以及药物浓度进行后续实验。通过Western blot法检测H-146细胞中LSD1、Notch1、c-Myc、PD-L1的蛋白表达水平,并使用荧光定量PCR法测定细胞中PD-L1 mRNA的表达。结果:经ORY-1001处理后,H-146细胞的增殖被抑制,其IC50在48小时、72小时和96小时分别为58.945μmol/L、3.216μmol/L和0.680μmol/L。后续实验选定96小时以及IC50(0.680μmol/L)为处理时间以及药物浓度。与对照组相比,处理后的H-146细胞显示PD-L1的蛋白以及mRNA的表达水平有所提高。进一步的实验表明,LSD1蛋白的表达水平在处理组中有所降低,而Notch1、c-Myc、PD-L1蛋白的表达水平则呈上升趋势。此外,PD-L1 mRNA的表达在细胞中也呈上调现象。结论:ORY-1001可通过抑制LSD1,进而激活NotchImmune infiltrate1通路,上调小细胞肺癌H-146细胞PD-L1的表达。