目的:1、探讨CIRBP在血管内皮损伤后内膜增生中的作用;2、探讨CIRBP对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的作用;3、明确CIRBP是否通过m TORC1途径调控VSMCs增殖和迁移。方法:本研究分为体外实验和体内实验两部分。1、FUT-175纯度体外实验:将小鼠血管平滑肌细胞分为阴性对照组和腺病毒干扰组,用完全培养基培养48小时后提取细胞总蛋白及RNA,通过western blotting以及PCLiproxstatin-1R实验检测血管平滑肌细胞中CIRBP的蛋白及m RNA表达情况;接着将血管平滑肌细胞分为Adv-NC、Adv-sh CIRBP和Adv-sh CIRBP+胰岛素组,通过western blotting实验检测m TORC1经典底物4Ebiomass liquefactionBP1和S6磷酸化水平;用Ki-67免疫荧光染色、CCK-8比色法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力。2、体内实验:将7周龄左右的C57BL/6J雄性小鼠适应性饲养一周后,白天光照12小时,按时喂予食物和水,将小鼠分为假手术组和颈动脉内皮损伤组,用粗糙导丝来回摩擦小鼠左颈总动脉血管内皮建立血管内皮损伤模型,假手术组不用导丝摩擦,其余手术过程同颈动脉内皮损伤组。术后观察小鼠状态,继续按时喂养食物和水,28天后按照分组进行血管取材,通过western blotting实验检测小鼠颈总动脉中CIRBP蛋白表达情况。为进一步探究CIRBP的作用,将小鼠分为假手术+Adv-NC组、假手术+Adv-sh CIRBP组、损伤内皮+Adv-NC组、损伤内皮+Adv-sh CIRBP组,首先在小鼠颈动脉损伤部位按照分组用干扰CIRBP腺病毒和阴性对照腺病毒孵育30分钟左右,假手术组中同样将上述腺病毒根据分组注射到左颈总动脉部位孵育相同时间,然后分别在术后第7、14、21天通过尾静脉追加注射相应的腺病毒1次,28天后进行血管取材,通过HE染色检测小鼠颈动脉内膜增生情况,免疫组化染色检测增生内膜细胞增殖情况。结果:与对照组相比,用腺病毒干扰血管平滑肌细胞后,CIRBP的蛋白及m RNA的表达均降低,干扰CIRBP之后,m TORC1的底物4EBP1和S6磷酸化水平降低,同时血管平滑肌细胞的增殖及迁移能力减弱;加入胰岛素恢复m TORC1活性后,干扰CIRBP对细胞增殖及迁移的抑制作用有逆转。小鼠颈动脉内皮损伤后,CIRBP的蛋白表达水平升高,血管内皮损伤后,内膜增生明显,与阴性对照组相比,在干扰CIRBP表达后,内皮损伤后内膜增生得到改善。结论:1、血管内皮损伤后增生内膜中CIRBP表达增加,干扰CIRBP后能抑制血管内膜增生;2、增殖期VSMCs中CIRBP表达增加,干扰CIRBP表达后抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移;3、CIRBP可能通过正向调控m TORC1活性促进血管平滑肌细胞增殖及迁移能力。