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微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)是一类重要的人畜共患的原生动物,可导致宿主严重或致命的腹泻,是发展中国家婴幼儿中度和严重的腹泻病的第二大病原。微小隐孢子虫缺乏三羧酸(TCA)循环和β-氧化过程,其能量代谢主要依赖糖酵解。因此,糖酵解关键酶是药物研发的潜在靶标。糖酵解通常在细胞浆进行,其中葡萄糖磷酸变位酶(phosphoglucomutase,PGM)催化1-磷酸葡萄糖hepatic fibrogenesis(G1P)与6-磷酸葡萄糖(G6P)的转化。微小隐孢子虫含两种进化上同源的PGM酶,即CpPGM1A(cgd2＿3260)和CpPGM1B(cgd2＿3270)。前者呈经典PGM结构,而后者含N-端信号肽和一段链接序列。微小隐孢子虫代谢途径的特征是极度简化,因此为什么保留两个PGM同工酶是个很有意义的病原生物学问题。本研究通过原核表达获得CpPGM1A和1B的重组蛋白,并确定了两种蛋白都具酶活性,可催化G1P与G6P相互转化。测得MBP-CpPGM1A的Vmax值为7.30 U(μmol/mg/min,即1mg酶蛋白在1min内催化多少μmol底物),Km=0.17 m M;MBP-CpPGM1B的Vmax值为2.76 U,Km=0.13 m M;制备了抗CpPGM1A和CpPGM1B的多克隆抗体。通过Western blot分析观察到CpPGM1A和CpPGM1B具有膜蛋白的一些特性,有蛋白聚集现象;通过免疫荧光标记(IFA)观察到CpPGM1A主要在子孢子胞浆分布,并在细胞核前后有聚集点。CpPGM1B主要定位于子孢子前半部分的表PR-171半抑制浓度膜,部分成颗粒状。在胞内时期,CpPGM1A主要定位于裂殖子表膜,而CpPGM1B定位于带虫泡膜(PVM)。我们也观察到CpPGM1A基因在虫体发育各阶段的转录水平皆比CpPGM1B高数倍,及CpPGM1A在子孢子内的蛋白量比CpPGM1B高数倍。综合以上观察和数据,可判断这两种同工酶具有不同的生物学功能,其中CpPGM1A为糖酵解管家蛋白之一,而CpPGM1B则主要在表膜GSI-IX体内和PVM上发挥酶活或结构功能。

目的探讨二肽基肽酶-4抑制剂(Dipeptide Peptidase-4 Inhibitor,DPP-4i)联合二甲双胍(Metformin,Met)和阿卡波糖(Acarbose,Aca)与胰岛素(Insulin,Ins)联合Met和Aca治疗2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)患者的不良事件发生风险,旨在为临床治疗T2DM的药物选择提供参考。方法采用回顾性队列研究方法,选取2017-11至2020-08期间在石家庄市第二医院被确诊为T2DM且使用Met+Aca+DPP-4i或Met+Aca+Ins治疗的患者为研究对象。电话随访从2017年11月开始,随访日点击此处期截止至2020年8月,发生预设的结局事件即为随访终止,并记录信息,若没发生,即到随访结束。预设的4个结局事件为非致命性CVD、全因死亡、SH事件、综合事件(包括全因死亡、复合非致命性CVD和SH事件)。采用倾向评分匹配(Propensity Score Matches,PSM,1:1的比例进行资料PSM,卡钳值设为0.02),采用Cox比例风险回归模型分析T2DM患者药物治疗后结局事件发生风险。分层分析各协变量对不同药物治疗患者结局事件发生风险的影响。结果本研究共纳入T2DM患者1570例,其中接受Met+Aca+Ins治疗患者1089例(Met+Aca+Ins组),接受Met+Aca+DPP-4i治疗者481例(Met+Aca+DPP-4i组)。1:1 PSM后,两组均为434例。与Met+Aca+Ins组比较,Met+Aca+DPP-4i组患者综合事件(6.53/100人年)、复合非致命性CVD(5.03/100人年)、全因死亡(0.73/100人年)、SH事件(0.73/100人年)发病密度相对降低。Cox比例风险回归模型分析结果显示,与Met+Aca+Ins组比较,Met+Aca+DPP-4i组患者发生综合事件风险减少67%[HR=0.34,95%CI(0.23～0.50),P<0.001];发生复合非致命性CVD风险减少52%[HR=0.48,95%CI(0.30～0.77),P=0.002];发生全因死亡风险减少81%[HR=0.19,95%CI(0.07～0.56),P=0.003];发生SH事件风险减少80%[HR=0.20,95%CI(0.07～0.59),P=0.003]。以综合事件发生与否作为结局变量绘制生存曲线,Log-rank检验结果显示,Met+Aca+DPP-4i组患者生存率高于Met+Aca+Ins组,差异具有统NSC 125973计学意义(x~2=32.849,P<0.001)。协变量交互作用分析结果显示,在Ccr>120 ml/min、无其他冠心病、睡眠充足(>7 h/d)、不吸烟、无CVD家族史的患者中,Met+Aca+DPP-4i治疗比Met+Aca+Ins治疗T2DM患者在降低综合事件的发生风险方面更为显著(P值分别为0.018、0.013、0.035、0.031、0.042);在TC<5.2 mmol/L、LDL≤3.59 mmol/L、Ccr≤120 ml/min、无CVD家族史的患者中,Met+Aca+DPP-4i治疗比Met+Aca+Ins治疗T2DM患者在降低复合非致命性CVD的发生风险方面更为显著(P值分别为0.043、0.049、0.018、0.014)。结论在接受Met和Aca治疗失败的T2DM患者中,与添加Ins相比,添加DPP-4i可明显降低综合事件、复合非致命性CVD、全因死亡和SH事件的发生风险,在随访期间,与Met+Aca+Ins组相比,接受Met+Aca+DPP-4i组治疗方案的T2DM患者总生存时间更长,生存情况更好。并且在Ccr>120 ml/min、无其他冠心病、睡眠充足、不吸烟和无CVD家族史T2DM患者中,在降低综合事件发生风险方面效果更佳;在TC<5.2 mmol/L、LDL≤3.59 mmol/L、Ccr≤120 ml/min、无CVD家族史的T2DM患者中,在降低复合非致命性CVD方面效果更佳。图14幅;表12个;参1Cultural medicine68篇。

目的 基于肝激酶(LK)B1/磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨黄芪总皂苷对人类乳腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响及作用机制。方法 以人乳腺癌细胞ZR-75-1为研究对象，通过噻唑蓝(MTT)法观察人乳腺癌细胞ZR-75-1增殖活力变化；苏木素-伊红(HE)染色观察人乳腺癌细胞ZR-75-1形态biologicals in asthma therapy变化；流式术检测人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡率及细胞周期变化；RT-聚合酶链反应(PCR)检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA水平；Western印迹检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK蛋白表达。结果 乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖受到黄芪总皂苷的影响，随黄芪总皂苷剂量(0、50、100、150 mg/μl)攀升，癌细胞增殖抑制率逐渐强，差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡受到黄芪总皂苷影响，黄芪总皂苷剂量越大，乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡率越高，差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的细胞周期，随黄芪总皂苷剂量攀升，G0/G1期细胞比例明显增加，S期、G2期明显降低。受黄芪总皂购买MLN8237苷影响，乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA及蛋白表达上升，黄芪总皂苷剂量越高，LKB1、AMPK mRNA表达上升越明显selleck NMR，差异有统计学意义(P<0.001)。结论 黄芪总皂苷能够抑制人乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖活力，诱导人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡并在细胞增殖周期G0/G1期中阻滞，其中的作用机制与LKB1、AMPK信号通路密切相关。

血管生成与骨生成是骨骼生长发育与骨CH-223191配制量维持的重要组成部分，二者间的相互耦联贯穿骨的生长及骨重塑的整个过程，在骨生成、骨折愈合、骨缺损及骨质疏松症等方面发挥着重要的作用。血管不仅能够通过对骨骼输送氧气、营养、生长因子及代谢产物促进骨骼发育、重建和修复，还可通过分泌因子、信号传递、功能调控等方面促进骨骼生长。随着H型血管的发现，拓宽了成血管-成骨耦联这一机制对骨质疏松症治疗的作用，血管内皮生长因子、血小板衍生生长因子-BB、血管生成素-1、碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β、低氧诱导转录因子-1α、轴突导向分子3及音猬因子不仅能促进骨内血管生长并且能够提高成骨分化能力促进骨形成。现代医学对骨质疏松症的防治主要通过服用雌激素、钙剂及降钙素等，但长期服用患者依存性差，胃肠道等不良反应明显。近年来，中医药防治骨质疏松症疗效颇优，随着网络药理学及细胞生物学等领域研究的深入，发现中药可通过调节成血Invasion biology管-成骨耦联相关因子防治骨质疏Laduviglusib价格松症。本文拟通过对相关研究成果进行综述，以期为中医药防治骨质疏松症提供新的诊疗思路及靶点。

1.研究背景原发免疫性血小板减少症(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是一种以血小板过度破坏和血小板生成减少为特征的自身免疫性疾病,成人ITP的患病率约为10/105[1],发病率为1.6-3.9/105/年[2]。ITP患者B细胞可以产生针对自身血小板的自身反应性抗体,ITP患者体内血小板破坏主要由IgG抗体介导。抗血小板抗体可以通过补体依赖的细胞毒性参与血小板破坏[3,4],也可以作用于巨核细胞,影响巨核细胞的成熟、分化及血小板的生成[5,6]。利妥昔单抗通过与B细胞特异性表达的CD20相结合诱导B细胞裂解[7],但有超过40%的患者对利妥昔单抗治疗无反应[8],因此寻求调节B细胞自身免疫反应的新靶点对ITP的治疗具有重要意义。树突状细胞(Dendritic cells,DCs)作为机体主要的抗原呈递细胞[9]。ITP患者单核细胞源性树突状细胞(monocytes-derived dendritic cells,moDCs)能够吞噬凋亡血小板并刺激自身抗原反应性B细胞产生[10],提示DCs功能异常可能是ITP发生的重要因素,但其具体机制尚不明确。综上所述,本研究共分为2个部分。第一部分中,旨在利用转录组测序技术寻找调节ITP患者B细胞免疫反应的关键分子通路,探讨特异性分子靶向药物是否可以改善ITP患者B细胞自身免疫反应及其机制。第二部分中,通过对ITP患者moDCs进行转录组测序,探讨树突状细胞在ITP异常免疫反应中的作用及其机制,以期为ITP患者寻找新的治疗策略。2.研究目的(1)第一部分①通过检测ITP患者外周血B细胞分化状态、分化转录标志物、抗体分泌和抗原呈递共刺激分子,明确ITP患者外周血B细胞的免疫功能异常。②利用转录组测序技术,对ITP患者与正常人外周血B细胞进行生物信息学分析,寻找调节ITP患者B细胞免疫反应的关键分子通路。③探究特异性分子靶向药物对改善ITP患者外周血B细胞免疫功能异常的作用及机制。(2)第二部分利用转录组测序技术,对ITP患者与正常人moDCs进行生物信息学分析,寻找调节ITP患者moDCs免疫功能的关键分子通路。3.研究方法(1)第一部分①纳入24例单克隆抗体特异性血小板抗原固定实验阳性的ITP患者及性别、年龄相匹配的健康志愿者,分为ITP组和正常组,采用流式细胞术、聚合酶链式反应、酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析两组人群B细胞分化状态、分化转录标志物、抗体产生能力和抗原呈递共刺激分子的表达。②收集选取4例ITP患者及5例性别、年龄相匹配的健康志愿者外周血样本,分选CD19+B细胞进行转录组测序。③根据差异基因分析和富集分析结果,确定ITP患者外周血B细胞中表达异常的信号通路-mTOR信号通路,并采用蛋白免疫印迹和Protein Simple Wes技术验证mTOR信号通路在ITP患者外周血B细胞中表达情况。④采用CellTiter-Glo确定mTORC1特异性抑制剂雷帕霉素和mTORC1/mTORC2双重抑制剂Torin1对B细胞的半抑制浓度。加入1μg/ml CD40L、10ng/ml rhIL-4、2.5μg/ml CpG、1nM雷帕霉素或Torin-1培养CD19+B细胞,采用流式细胞术、聚合酶链反应和ELISA检测B细胞分化状态、分化转录标志物、抗体分泌和抗原呈递共刺激分子的表达。(2)第二部分①收集选取3例ITP患者及3例性别、年龄相匹配的健康志愿者外周血样本,分选CD14+单核细胞并在含有100ng/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和50ng/ml白介素4的RPMI 1640培养基中培养5天,随后加入1μg/ml脂多糖继续培养2天以诱导moDCs成熟。②采用Trizol试剂提取细胞总RNA,采用琼脂糖凝胶电泳和超微量分光光度仪检测RNA完整性和纯度,并选取浓度大于0.2μg/ml,OD260/280在1.9-2.1之间的样品进行转录组测序。RNA文库构建、质检及转录组测序由北京诺禾致源科技有限公司使用Illumina Hiseq 平台完成。③根据差异基因分析和富集分析结果,确定ITP患者moDCs中表达异常的信号通路-mTORC1信号通路,并采用蛋白免疫印迹技术验证mTORC1信号通路在ITP患者moDCs中的表达情况。4.研究结果(1)第一部分①ITP患者外周血B细胞存在免疫功能亢进。ITP患者外周血中CD27+CD38+细胞(浆母细胞)比例显著增加,BLIMP1和IRF4的表达显著增加。ITP患者血浆中IgG和IgM抗体显著增多,且B细胞抗原呈递共刺激分子CD80和CD86表达增加。②生物信息学分析显示,ITP患者外周血B细胞基因富集于BP条目中的“靶向内bio-based crops质网蛋白”、“蛋白质内质网定位”、“核转录mRNA分解代谢”和MF条目中的“核糖体结构”,并富集于“核糖体”、“氧化磷酸化”和“蛋白质在内质网的加工”等KEGG条目。GSEA分析结果显示,ITP患者外周血CD19+B细胞mTOR信号通路基因表达显著上调。验证结果表明,ITP患者外周血B细胞磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化S6K(p-S6K)和磷酸化Akt(p-Akt)表达显著上调。③1nM雷帕霉素处理的B细胞中,mTORC1信号通路受到强烈抑制,p-S6K表达显著降低,而p-Akt表达无显著变化。雷帕霉素可以减少浆母细胞的比例,抑制B细胞中BLIMP1和IRF4的表达,并显著减少细胞培养上清中IgG和IgM的含量。同时雷帕霉素可以抑制抗原呈递共刺激分子CD80和CD86的表达。④1nM Torin1可以降低ITP患者外周血B细胞中mTORC1和mTORC2的磷酸化水平,导致p-S6K和p-Akt显著降低,Troin1和雷帕霉素对mTORC1的抑制作用无显著差异。Torin1可以减少浆母细胞的比例,抑制BLIMP1和IRF4的表达,并显著减少细胞培养上清中IgG和IgM的含量。Torin1也可以降低B细胞表面CD80和CD86的表达。(2)第二部分①GO富集分析结果表明,ITP患者moDCs差异基因主要集中在T细胞分化、T细胞共刺激、T细胞活化等生物学过程。KEGG富集分析显示,差异基因集中在T细胞受体信号通路、造血细胞谱系、细胞因子-受体相互作用等相关信号途径中,同时有10个基因注释在自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号通路中。②GSEA分析显示,ITP患者moDCs中mTORC1信号通路基因表达显著上调,此外,包括糖酵解、炎性因子反应性和对干扰素γJNJ-42756493体外的反应3个相关信号通路的基因集在ITP患者moDCs中显著上调。③Western blot结果表明,ITP患者moDCs中p-mTOR表达显著升高,且mTORC1信号通路的活化标志更多物S6K磷酸化水平显著升高。5.研究结论(1)第一部分①ITP患者外周血B细胞存在免疫功能亢进。②ITP患者外周血B细胞中mTOR信号通路高度激活,mTOR信号通路可能是调控ITP患者B细胞免疫功能的重要靶点。③雷帕霉素可以通过抑制mTORC1活性抑制B细胞向浆母细胞分化,并抑制B细胞转录分化标志物的表达和抗体分泌,抑制抗原呈递共刺激分子的表达。④Torin1可以通过抑制mTORC1和mTORC2活性抑制B细胞向浆母细胞分化,并抑制B细胞转录分化标志物的表达和抗体分泌,抑制抗原呈递共刺激分子的表达。但雷帕霉素和Torin1对ITP患者外周血B细胞分化状态、分化转录因子表达、抗体分泌和抗原呈递共刺激分子的调节作用无明显差异。(2)第二部分ITP患者moDCs可能通过mTORC1信号通路介导的T细胞和NK细胞免疫功能调节参与ITP发病过程,mTORC1信号通路可能是调节ITP患者moDCs功能异常的新靶点。

目的 探讨miR-221/222与乳腺癌临床病理的关系，及是否参与ERα的调节并影响他莫昔芬（TAM）的敏感性。方法 分析2019年1月至2021年12月石家庄市妇幼保健院经手术切除的104例乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织标本，采用茎环引物实时荧光定量PCR(qPCR)法检测癌组织和相应癌旁组织中miR-221/222的表达水平，采用免疫组织化学法检测ERα表达，分析miR-221/222与ERα表达的关系。MCF-7细胞转染空白试剂、miR-221抑制剂、miR-222抑制剂和miR-221/222抑制剂，转染后均给予TAM 5μg/mL进行培养并检测其细胞增殖抑制率和细胞凋亡率。结果 乳腺癌组织中的miR-221/222表达明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义（t=17.541,P<0.05;t=12.911,P<0.05）;miR-221/222的表达水平在ER-α表达阴性、PR表达阴性组均显著高于阳性表达组（t=7.039,P<0.05;t=5.357,P<0.05）Immunosandwich assay,miR-221/222的表达水平在Her-2表达阳性显著高于阴性组（t=9.827,P<0.05）；在三阴性分子亚型中的表达显著高于Her-2过表达型、luminal A及luminal B1型乳腺癌（F=23.1STM2457生产商27,P<0.05）。miR-221/222抑制组转染后24、48 h细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均明显高于空白对照组、miR-221抑制组、miR-222抑制组（F=19.736,P<0.05;F=36.09selleck SB2035801,P<0.05）。结论 miR-221/222水平与腺癌患者的ERα表达相关，且miR-221/222可影响乳腺癌细胞对TAM的敏感性。

目的：针对冠心病诊断中使用64排螺旋CT冠状动脉CTA的临床价值展开分析与研究。方法：选择芜湖市繁昌区人民医院在2PLX4032半抑制浓度020年4月—2022年1月期间收治的52例疑似冠心病患者作为研究对象，所有研究对象均接受冠状动脉造影检查、64排螺旋CT冠状动脉CTA检查，并以前者为“金标准”，对检查结果展开分析与研究。结果：64排螺旋CT冠状动脉CTA诊断效能统计结果显示，其阳性率、阴性率、阳性预测值、阴性预测值、准确率、敏感度、特异度依次为82.69%、17.31%、95.56%、71.43%、92.31%、95.56%、71.43%；“金标准”冠状动脉造影检查结果显示，总计出现冠状动脉狭窄问题80处，轻度狭窄、中度狭窄、重度狭窄、冠状动脉闭塞占比分别为20.00%、31.25%、30.00%、18.75%，冠状动脉CTA检查结果显示，总计出现冠状动脉狭窄问题74处，轻度狭窄、中度狭窄、重度狭窄、冠状动脉闭塞均有较高检出准确率，分别为93.75%、92.00%、91.67%、93.33%。结论direct immunofluorescence：使用64排螺旋CT冠状动脉CTA对冠心病患者实施临床诊断具有较高的临床应用价值，其诊断效能较高，与冠状动脉造影检查Transmembrane Transporters抑制剂结果基本一致，且具有较高的安全性，因此更加适合普及推广使用。

目的 探讨去氢木香内酯（DCL）对鼻咽癌细胞CNE1自噬和凋亡的影响及可能机制。方法 含不同浓度DCL培养液（0、5、10、20、40μmol/L）培养对数生长期CNE1细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率；Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态；流式细胞术检测细胞凋亡率；透射电子显微镜检测CNE1细胞自噬体形成情况；WesterLaboratory biomarkersn blotting法检测CNE1细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活性水平及微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)、p62、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl2）、Bcl2相关X蛋白（Bax）、cleaved caspase-3蛋白相对表达水平。结果 CNE1Tamoxifen细胞存活率、PI3K、Akt和mTOR蛋白活性水平及p62、Bcl2蛋白相对表达水平均随DCL作用浓度增大而降低，CNE1细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Bax和cleaved caspase-3蛋白相对表达水平随DCL作用浓度增大而升高（P<0.05），同时DCL给药可显著促进CNE1细胞凋亡小体及自噬体的形成；DCL作用效果呈剂量依赖性（P<0.05）。结论 DCL可促进鼻咽癌细胞发生凋亡，其作用机制JNJ-42756493可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路激活有关。

目的观察温肾益气法对重症肌无力（MG）患者的临床疗效、西药减停情况以及眼肌型MG转化率。方法筛选于2019年10月至2021年9月就诊以温肾益气法治疗的MG患者资料，利用SPSS25.0软件对治疗前、治疗6月后的selleck化学临床绝对评分、中医证候评分进行检测。在治疗过程中及时询问患者西药（胆碱酯酶抑制剂或激素等）的减停情况，并及时做好记录，眼肌型患者在治疗1年后进行随访了解临床转归情况。结果77例患者经温肾益气法治疗后临床疗效显selleck抑制剂著，治疗6月后西医、中医临床有效率分pooled immunogenicity别达83.12%和87.01%，并且临床绝对评分及中医证候评分均有所下降（P＜0.05），治疗过程中西药可逐渐减量，部分患者可停服西药，以胆碱酯酶抑制剂（溴比斯的明）为主。在治疗1年后对眼肌型患者进行随访研究其转归情况，结果发现有6名患者转为全身型，5例患者痊愈以儿童和青少年为主。结论温肾益气法治疗MG临床疗效显著，能够缓解患者临床症状，减少西药用量，降低西药带来的毒副作用，降低眼肌型MG向全身型MG的转化。

中药治疗椎间盘退变（intervertebral disc degeneration， IDD）具有缓解疼痛、延缓组织与细胞退变等良好的作用与疗效。近年来，大量的体内、外实验部分揭示了中药延缓IDD的作用机制。确认细节相对于体内实验，体外实验能在细胞层面上更直观地阐释其作用机制，其作用机制的发挥可能与IDD相关信号通路具有密切关系。中药经相关信号通路缓解IDD的机制可分为激photobiomodulation (PBM)活信号通路后缓解IDD与抑制信号通路后缓解IDD两种，针对不同因素所诱导的IDD，信号通路的选择具有靶向性。但由于中药成分较为复杂、同一种中药通过多条信号通路产生作用、部分信号通路激活后产生的作用取决于被激活细胞的类型selleck化学等问题，未来需要推进中药延缓IDD过程中信号通路间协同或拮抗作用机制的研究，为中药靶向相关信号通路延缓IDD机制的研究提供新思路。