E3泛素连接酶FBXO11泛素化降解ZEB1调控肺癌细胞侵袭转移的机制研究

2020年GLOBOCAN全球癌症统计数据显示,肺癌是发病率第二、致死率第一的恶性肿瘤[1]。肿瘤转移是造成肺癌患者死亡的主要原因,但肺癌侵袭转移的机制目前尚不明确。上皮间质细胞转化(Epithelia to Mesenchymal Transition,EMT)与肿瘤的侵袭转移密切相关,上皮细胞标示物E-cadherin的表达下调是EMT的重要标志。Snail家族、Twist家族、ZEB家族是EMT的重要驱动因子,其中ZEB1可通过其锌指结构与E-cadherin基因启动子区域E-box结合而直接抑制E-cadherin表达,启动EMT。泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)利用E3泛素连接酶识别底物蛋白质,将泛素转移至底物,并由蛋白酶体降解,是生物体内常见的降解方式。FBXO11是一种广泛研究的E3泛素连接酶。因此,本研究试图将FBXO11与EMT核心转录因子ZEB1建立联系,揭示FBXO11泛素化降解ZEB1进而调控肺癌细胞侵袭转移的表观遗传机制。本论文利用人肺癌细胞株、肺癌数据库及小鼠深入展开研究。我们通过Ni Cl2在人非小细胞肺癌细胞系A549中诱导EMT,发现在肺癌细胞中起主要调控作用的转录因子是ZLGX818化学结构EB1,并且利用GEPIA分析肺癌数据,也进一步证实了FBXO11与ZEB1存在相关性;通过Co-IP和GST pull-down实验,明确了FBXO11与ZEB1存在相互作用;同时也在HEK293T细胞中共转染FBXO11与ZEB1,并通过降解实验、泛素化实验以及半衰期Tamoxifen实验,证明了FBXO11能够通过泛素蛋白酶体途径降解ZEB1;利用sh RNA在A549细胞中敲低FBXO11,通过Western Blot、Real-time PCR以及免疫荧光实验,明确敲低FBXO11,ZEB1表达升高,同时EMT上皮标示物E-cadherin表达下降、间质标示物N-cadherin表达增加;结合形态变化、Wound-healing以及Transwell实验,发现敲低FBXO11后,A549细胞形态更加狭长、分散,迁移、侵袭能力Liquid Handling增强,并且共同敲低FBXO11、ZEB1后,由敲低FBXO11引起A549的变化基本消失,这些均表明FBXO11可以通过ZEB1调控肺癌细胞的迁移与侵袭。最后,我们通过小鼠皮下成瘤实验,再次证实FBXO1…

VEGFR2、miR-21在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系

目的 探讨VEGFR2、mi R-21在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与患者预后的关系。方法 回顾性分析本院行肺切除术的52例NSCLC患者临床资料。采用免疫组化法和实时PCR法测定肺癌组织及癌旁组织VEGFR2、mi R-21的表达情况,并比较表达差异。建立受试者工作特征(ROC)曲线分析mi R-21在NSCLC中的诊断效能,分析VEGFR2、mi R-21表达与患者病理特征的关系。采用K-M法分析VEGFR2、mi R-2AG-221供应商1表达与患者预后的关系。结果 NSCLC患者癌组织VEGFR2高表达率(46%vs. 13%)及mi R-21相对表达量水平(1.03±0.36 vs.0.62±此网站0.25)明显高于癌旁组(P <0.05)。mi R-21诊断NSCLC的ROCMycobacterium infection曲线下面积为0.833(95%CI:0.755~0.910),cut-off值为0.870,灵敏度为61.5%,特异度为90.4%。不同年龄、性别、病理类型、肿瘤最大径、分化程度、T分期、N分期、淋巴结转移情况患者VEGFR2及mi R-21表达情况比较均无显著差异(P> 0.05),有无远处转移患者VEGFR2表达比较无显著差异(P> 0.05),有远处转移患者mi R-21高表达率高于无远处转移患者(P <0.05)。VEGFR2、mi R-21高表达患者生存期较低表达患者均明显缩短(P <0.05)。结论 VEGFR2、mi R-21在NSCLC患者癌组织中均有高表达,VEGFR2、mi R-21高表达会缩短患者生存时间,影响患者预后。

低HMGB1含量的肿瘤细胞裂解物增强树突状细胞的抗肺癌作用

目的 探讨低含量高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的肿瘤细胞裂解物(TCL)对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法 反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸(GA)抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1的表达,进而制备低含量HMGB1的TCL(LH-TCL)。用未处理的Lewis肺癌细胞制备正常含量HMGB1的TCL(NH-TCL)。分为不同剂量NH-TCL负载DC组、LH-TCL负载DC组及PBS对照组,用流式细胞术检测体外诱导的小鼠树突状细胞(DC)表面CD11b、CD11c、CD86表达或细胞凋亡,用酶联免疫吸附试验检测DC细胞IL-12分泌情况。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,用流式细胞术检测小鼠脾细胞表面CD69的表达情况,酶联免疫吸附试验检测小鼠脾细胞TNF-β的分泌。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组,并设5∶1、10∶1、20∶1三个效靶比进行体外杀伤实验,采用CCK8法检测小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞的活性。分为未活化DC组、NH-TCL活化的DC组、LH-TCL活化的DC组及PBS对照组,通过体内抑瘤实验,评估DC过继免疫细胞疗法抑制小鼠皮下移植瘤生长的效果。结果 GA作用后的Lewis肺癌细胞制备的TCL中,HMGB1的含量显著降低(P<0.05)。与NH-TCL相比,LH-TCL具有更好的减少DC凋亡的能力(P<0.001),并促进DC表面CD86的表达Biogenic Fe-Mn oxides和IL-12的分泌,而负载LH-TCL的DC也能更好地激活脾淋巴细胞并诱导更强的抗肿瘤免疫作用(PZD1839<0.01)。在体外,负载LH-TCL的DC激活脾淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的杀伤活性显LGX818作用著提高(P<0.01);在实验动物体内,免疫负载LH-TCL的DC可明显抑制肿瘤组织生长(P<0.05)。结论 用LH-TCL负载DC,可以增强DC诱导的抗肿瘤免疫作用,提高DC过继免疫细胞治疗的疗效,为该免疫治疗方法的改进提供了一个新的途径。

鼻内针刺联合中药穴位贴敷治疗变应性鼻炎的临床效果

目的 探究鼻内针刺联合中药穴位贴敷治疗变应性鼻炎的临床应用效果。方法 用随机数字表法将2020年7月—2022年6月于泰安市中医医院治疗的变应性鼻炎患者100例分为对照组(50例)和观察组(50例),对照组采用鼻内针刺治疗,观察组在对照组治疗的基础上联合中药穴位贴敷治疗,两组治疗均持续2个月。比较两组患者的临床NN2211临床试验症状评分、免疫学指标、生活质量评分。结果 治疗后,观察组流鼻涕、鼻黏膜肿胀的临床症状评分低于Medical officer对照组(P <0.01);CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平均高于对照组,CD8~+水平低于对照组(P <0.01);生活质量综合评定问卷-74 (GQOL-74)的物质生活状态、心理功能、躯体功能评分均高于对照组(P <0.01)。结论 应用鼻内针刺GSI-IX临床试验联合中药穴位贴敷治疗变应性鼻炎,能够改善患者的临床症状,调节患者免疫指标,提高患者生活质量。

乐洗一号方坐浴联合补中益气汤治疗对轻中度贫血痔术后恢复的影响

目的:观察乐洗一号方坐浴联合补中益气汤治疗对轻中度贫血痔术后恢复的影响。方法:选取74例行外剥内扎术治疗的贫血痔患者,随机分为对照组和治疗组,每组37例。治疗组术后采用乐洗一号方坐浴联合补中益气汤治疗,对照组术后采用高锰酸钾溶液坐浴治疗。2组均治疗14 d,随访至术后20 d。比较2组临床疗效,肛门疼痛、水肿、坠胀评分,血红蛋白(Hb)、血管内皮生长因子(VEGF)水biomass liquefaction平,住院、创面愈合时间。记录不良反应。结果:术后20 d,治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05)。术后第3天,2组肛门疼痛、水肿、坠胀评分均较术后第1天降低(P<0.05),治疗组肛门疼痛、水肿、坠胀评分均低于对照组(P<0.05)。术后第14天,2组Hb、VEGF水平均较术后第1天升高(P<0.05),治疗组Hb、VEGF水平均高于对照组(P<0.05)。治疗组住院及创面愈合时间均短于对照组(P<0.05)。治疗期间,2组均无明显不良反应发生。结论:乐洗一号方坐浴联合补中IDN-6556小鼠益气汤治疗能Gefitinib价格有效缓解轻中度贫血痔术后患者的临床症状,提高Hb、VEGF水平,加快创面愈合,缩短住院时间。

温针灸调控mTOR自噬信号在气道重塑中的作用

目的:观察温针灸对支气管哮喘大鼠肺组织病理损伤情况及自噬相关蛋白表达的影响,探讨温针灸调控mTOR自噬信号在支气管哮喘气道重塑中的作用和可能的相关机制。方法:SD大鼠分为对照组,模型组和温针灸组,每组10只。采用致敏、激发的方法制备哮喘模型。温针灸组在造模15 d后,选择肺俞穴、脾俞穴、肾俞穴温针灸30 min,1次/d、治疗14 d。通过苏木精-伊红染色(HE)和Masson染色观察肺组织损伤、气道重塑和肺组织胶原纤维沉积情况,酶联接免疫吸收测定法(ELISA)测定各组大鼠血清中转化生长因子-β1(transforming growth factor βCP-6905501,TGF-β1)、血管内皮生长因子(vascular epidermal growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γLY294002体外)的表达,透射电镜观察支气管平滑肌细胞自噬小体的数量,WB法检测自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、p-mTOR蛋白水平。结果:模型组肺脏组织支气管结构受损,气道壁增厚。与模型组相比,温针灸组大鼠肺脏组织支气管轻微受损,炎性浸润程度减轻,且TGF-β1、VEGF、TNF-α含量降低(P<0.05),Beclin1的表达降低(P<0.05),p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05),自噬体及凋亡小体数量明显减少。结论:温针灸能够改善支气管哮喘大鼠的气道炎症反应,减轻气道结构改变程度,抑制平滑肌细胞的增生及胶原纤维沉积。其机制可能通过下调TGF-β1、VEGF和Beclin1的表达抑制细胞的自噬和凋亡来减轻大鼠气道炎症及气道重flamed corn straw塑。

低分子肝素对老年髋关节置换术后患者住院期间下肢深静脉血栓形成的影响

目的 探讨低分子肝素对老年髋关节置换术后患者住院期间下肢深静脉血栓形成的影响。方法 收集2018年3月至2022年5月于首都医科大学附属北京天坛医Telaglenastat使用方法院接受髋关节置换术治疗的8selleckchem CCRG 810450例老年患者的临床资料,根据是否使用低分子肝素将患者分为治疗组和对照组,每组40例。观察并比较两组患者术后住院期间下肢深静脉血栓形成的发生情况、D-二聚体水平及出血情况。结果 两组患者的疾病类型、手术相关指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。术后住院期间,治疗组患者D-二聚体水平升高的比例为7.5%(3/40),低于对照组患者bio-analytical method的25.0%(10/40),差异有统计学意义(P=0.034)。下肢深静脉超声复查结果显示,治疗组患者下肢深静脉血栓的发生率为5.0%(2/40),低于对照组患者的20.0%(8/40),差异有统计学意义(P=0.042)。两组患者住院期间均无出血现象发生。结论 低分子肝素可以安全、有效地预防老年髋关节置换术后患者住院期间下肢深静脉血栓形成。

胸腔镜下肺叶切除术对NSCLC患者临床效果及TPA、SCC、CYFRA21-1水平的影响

目的 探究胸腔镜下肺叶切除术对非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床效果及组织多肽抗原(TPA)、鳞癌相关抗原(SCC)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)水平的影响。方法 选取2020年1月至2022年6月首都医科大学附属北京世纪坛医院收治的96例NSCLC患者,根据治疗方式不同分为传统组42例(传统开放性肺叶切除术)和胸腔镜组54例(胸腔镜下肺叶切除术)。对比两组手术一般情况、1年后肿瘤控制效果、肺功能相关指标、肿瘤标志物及并发症。结果 胸腔镜组术中出血量少于传统组,胸LY294002抑制剂腔引流时间及住院时间明显短于传统组,差异有统计学意义(P<0.05)。胸腔镜组手术3个月后疾病控制率(DCR)高于传统组,差异有统计学意义(P<0.05)。胸腔镜组括第1秒用力呼气容积(FEVSBE-β-CD作用1)、FEV1/用力肺活量(FVC)比值、最大通气量(MVV)及最大呼气流量(PEF)均高于传统组,History of medical ethics差异有统计学意义(P<0.05)。与术前相比,两组TPA、SCC、CYFRA21-1水平均有所下降,且术后3个月胸腔镜组TPA、SCC、CYFRA21-1水平低于传统组,差异有统计学意义(P<0.05)。胸腔镜组并发症总发生率低于传统组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胸腔镜下肺叶切除治疗NSCLC患者效果显著,可有效改善患者肺功能,降低TPA、SCC、CYFRA21-1水平,相比传统开放性手术其术后并发症风险低,短期预后更好。

针刺与艾灸对哮喘大鼠肺功能及气道炎症的影响

目的 观察针刺与艾灸改善哮喘大鼠肺功能及气道炎症的作用,并比较疗效差异。方法 将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组和艾灸hepatic fat组,每组12只。采用卵清白蛋白致敏和雾化激发制备哮喘大鼠模型。造模成功后,针刺组和艾灸组大鼠分别给予双侧“肺俞”穴针刺与艾灸干预30 min,每天1次,连续14天。干预结束后,使用肺功能测定仪测定大鼠肺功能[最大呼气流量(PEF)、肺阻力(RL)、动态肺顺应性(Cdyn)、呼出25%肺活量时最大呼气流量(FEF 25%)、用力呼气量占用力肺活量比(FEV/FVC)、最大呼气中期流量(MMEF)];分别经HE和Masson染色后,光镜下观察大鼠肺组织的病理形态学变化及胶原沉积程度;运用酶联免疫吸附法检测各组大鼠肺组织中半胱氨酸白三烯(LT)、白介素(IL)-17、IL-4、IL-13、IL-33、IL-5、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、前列腺素D2(PGD2)表达。结果 与正常组比较,模型组PEF、Cdyn、FEF 25%、FEV/FVC、MMEF下降,RL、胶原纤维沉积、肺组织中LT、IL-17、IL-4、IL-13、TSLP、IL-33、PGD2、IL-5表达增加(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,针刺组大鼠FEF 25%、FEV/FVC增加,胶原纤维沉积、肺组织LRP56976采购T、IL-17、IL-4、IL-13、TSLP、IL-33、PGD2、IL-5表达降低(P<0.05,P<0.01);艾灸组大鼠Cdyn、FEF 25%、MMEF增加,胶原纤维沉积、肺组织IL-17、IL-4、IL-13、TSLP、IL-33、IL-5表达降低(P<0.05,P<0.01)。与艾灸组比较,针刺组大鼠肺组织中LT、IL-13、PGD2、IL-5表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 针刺与艾灸“肺俞”穴Z-IETD-FMK研究购买均能改善哮喘模型大鼠的肺组织损伤、肺功能及气道炎症;且两者在改善肺功能和气道炎症的相关指标上存在一定差异性。

低剂量辐射降低PM2.5对肺泡上皮细胞损伤的作用与机制

目的探讨低剂量辐射(low dose radiation,LDR)是否可以降低PM2.5对肺泡上皮细胞MLE-12的损伤作用及其作用机制。方法采用CCK8法筛选PM2.5(25、50、100、200、400和800μg/mL)对MLE-12细胞的作用浓度,建立PM2.5致肺泡上皮细胞损伤模型,并利用光学显微镜观察细胞形态变化。采用7GW4869试剂5mGy X射线照射MLE-12细胞,6 h后进行PM2.5处理,罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化,Western Blot检测凋亡和EMT相关蛋白的表达。实验分为Control、PM2.5(25μg/mL)、LDR(75 mGy)和LDR+PM2.5组。结果 CCK8结果显示,MLE-12细胞增殖能力呈PM2.5浓度依赖性降低(P<0.05),根据细胞活力的变化,选取25μg/mL作为PM2.5致肺损伤体外模型的暴露浓度。同时,光学显微镜下可见,PM2.5暴露后的MLE-12细胞形态发生变化,随着PM2.5暴露Medial pons infarction (MPI)浓度的升高,MLE-12细胞由无方向性呈卵圆形紧密排列的上皮样细胞形态转变为有方向性的呈长梭形松散分布的间质细胞样形态。流式细胞术结果显示,与Control组相比,PM2.5组MMP显著降低,LDR组MMP显著升高(P<0.05);与PM2.5组相比,LDR+PM2.5组MMP显著升高(P<0.05)。Western Blot结果显示,与Control组相比,PM2.5组caspase-3和Bax蛋白表达增加,而LDR组两种蛋FUT-175化学结构白表达降低,且低于PM2.5组两种蛋白表达;同时,PM2.5组EMT相关蛋白E-cadherin表达降低,N-Cadherin和Vimentin表达增加,而LDR组E-cadherin表达增加,N-Cadherin和Vimentin表达降低。结论 PM2.5引起肺泡上皮细胞发生形态学的改变,凋亡和EMT表型增加,而LDR能够减轻PM2.5对肺泡上皮细胞的损伤作用,可能与降低凋亡和EMT的作用有关。