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目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型，ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中Autoimmune retinopathyIL-6的含量。体外培养MH-S细胞，在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下，再加入IL-6(10 ng/mL～500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后，采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况；Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后，小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加，MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强，Arp2、 FZ-IETD-FMK使用方法–TGF-beta/Smad抑制剂actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后，p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后，IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失，IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。

十字花科根肿病是一种世界性的土传病害,也是影响大白菜产量和品质的主要病害之一。该病造成严重的经济损失,并且被根肿菌污染的土壤会持续对十字花科作物造成危害。因此利用分子生物学技术探究根肿病的发病机制,培育抗性品种尤为重要。本研究通过对大白菜‘CRBJN3-2’分别接种根肿菌Pb1(抗性)和Pb4(敏感),对接种后8,23和37 d的根组织进行代谢组和转录组测序,分析大白菜在不同根肿菌胁迫下代谢物和基因的动态变化,解析大白菜响应根肿菌胁迫的核心代谢途径和关键基因功能验证。探究核心途径中葫芦巴碱及其合成基因Br NANMT的新功能,并筛选Br NANMT互作蛋白。为根肿病抗性育种提供了理论基础,也为十字花科抗根肿病研究提供了新方向。主要研究结果如下:1.基于广靶代谢组共检测到Etoposide346种已知注释代谢更多物,差异最显著的是次级代谢产物生物碱。抗病组中核苷酸及其衍生物、脂类、生物碱、类黄酮等,感病组中氨基酸及其衍生物,维生素类物质显著增加。根肿菌侵染初期抗病组中类黄酮(五羟黄酮衍生物和丁香亭-3-O-葡萄糖甙)和感病组中生物碱(葫芦巴碱)显著增加。2.接种8 d,抗病组中共thyroid cytopathology检测到1,358个基因上调和1,290个基因下调。接种23 d差异基因数量最大(6248个基因),其次是37 d(2989个基因)。差异基因KEGG富集分析发现植物激素信号转导,MAPK信号通路,氧化磷酸化,氨基糖和核苷酸糖代谢,糖酵解/糖异生,半胱氨酸和甲硫氨酸代谢,淀粉和蔗糖代谢,苯丙烷生物合成和甘油磷脂代谢显著富集。参与细胞分裂素介导的信号转导B型ARRs在所有三个感染阶段的抗病组中均高度表达。对差异基因进行WGCNA分析,确定根肿病抗性枢纽基因SNC1、FLA2、ABCG33和BGLU32,敏感枢纽基因ABCE1、GIP、CRK18、EXT2和TIF211。3.基于代谢组-转录组联合分析,确定了三条大白菜响应根肿菌胁迫的核心代谢途径,包括烟酸烟酰胺、酚胺和类黄酮途径。4.外源葫芦巴碱显著提高拟南芥的发病率及发病指数。拟南芥异源过表达Br NANMT株系内源葫芦巴碱含量显著上升,其发病率及发病指数显著增加;nanmt突变体几乎不能合成葫芦巴碱,根肿病发病延迟,发病率和发病指数降低。5.大白菜外源施用葫芦巴碱显著提高了根肿病的发病率及发病指数。大白菜过表达Br NANMT植株发病等级显著增加,基因编辑植株根瘤明显减小。6.酵母双杂交筛选到与Br NANMT互作的60个蛋白,其中互作频率最高的线粒体外膜蛋白孔蛋白2(VDAC2),经酵母共转化验证确定Br NANMT与VDAC2蛋白在体外存在互作关系。

声动力治疗(SDT)作点击此处为新兴的肿瘤治疗方式,以超声刺激为基础,搭载声敏剂,通过超声照射,触发内在机制使得肿瘤细胞凋亡。与传统治疗方式相比,SDT以其穿透力强、能达到深部组织、无创伤性、治疗效果好等优点,受到广大科学家的青睐。然而,以往的研究也揭示其存在一定的局限性。如:大部分声敏剂水溶性较差、单线态氧量子产率不高、无法找到合Navitoclax IC50适的载体来运输、难以改变肿瘤部位的乏氧状态,无法达到较好的治疗效果。研究人员在提纯碳纳米管的时候,在提取工作中发现了这一种全新的荧光纳米材料,即碳点(CDs)。随着深入研究,人们发现CDs可以作为一种优良的纳米载体,并且其可以增加搭载药物的稳定性,也能增加药物在肿瘤部位的富集。结合以上所述的局限性,本论文设计开发了一种多功能纳米平台(KO@CD-Pp IX、CD-Pp IX),选择了较为稳定和单线态氧产率较高的原卟啉(Pp IX)作为声敏剂,以碳点作为载体,将声敏剂接枝到载体之上,作为超声触发的控制开关,并且负载产氧剂过氧化钾。超声照射后,CD-Pp IX、KO@CD-Pp IX上接枝的声敏剂被激活,产生单线态氧来氧化细胞损伤,同时产氧剂释放氧气,改善肿瘤微环境的乏氧状态,从而提高声动力的治疗效果。本文的主要研究结果如下:(1)采用水热法成功制备了CDs,同时通过酰胺反应接枝声敏剂Pp IX,成功负载过氧化物产氧剂,旨在改善肿瘤微环境的乏氧状态。利用TEM、AFM、荧光分光光度计对CDs-Pp IX、KO@CDs-Pp IX进行一系列表征,发现所制备的纳米平台具有优异的荧光性能和超声响应性能。(2)采用CCK-8来评价CD-Pp IX、KO@CD-Pp IX的细胞毒性,研究发现经过处理的H22细胞依然保持65%以上的存活率,证明所设计的纳米药物载体对组织和器官没有明显的毒性。(3)构建小鼠模型来评价CD-Pp IX、KO@CD-Pp IX的生物相容性,研究发现其各项血液指标都在正常范围值内,重要器官的组织切bioactive molecules片也未见任何异常情况,表现出较为优异的生物安全性。(4)采用H22肝癌细胞构建小鼠肿瘤模型,进行15天的治疗评价期,研究发现同其他对照组相比,材料联合超声治疗组(CD-Pp IX+US、KO@CD-Pp IX+US)的肿瘤体积最小,具备较为优异的治疗效果。

目的:对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)因其镇痛和解热特性成为临床上解热镇痛最常用的药物之一,其在推荐剂量下是安全有效的,而过量使用可能导致肝毒性和急性肝功能衰竭(Acute liver failure,ALF)。n-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC),一种已知的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)清除剂,被美国食品和药物管理局推荐作为唯一一种有效的临床治疗APAP诱导的急性肝损伤的药物;然而这种药物有明显的局限性,副作用明显、治疗窗口狭窄。因此,需要开发在有效性和治疗时间框架方面优于NAC的新药。大量研究表明,APAP诱导的肝细胞坏死常伴有炎症,人参皂苷Rc(Ginsenoside Rc)作为人参中最具代表性的特异性生物标志物之一,具有良好的抗氧化应激、抗炎症、神经保护及调节糖脂代谢和护肝等生物活性作用,但对于对乙酰氨基酚过量导致急性肝损伤的治疗作用尚不明晰。因此本研究以肝脏代谢调控的关键靶点FXR(Farnesoid X Receptor)核受体为基础,进一步研究对乙酰氨基酚诱导的急性肝细胞损伤、氧化应激和炎症反应,以及FXR对APAP诱导的急性肝损伤的保护作用。方法:1.WT(Wild Type)小鼠及原代肝细胞验证人参皂苷Rc对于APAP诱导肝损伤分子作用机制在C57BL/6的小鼠原代肝细胞以及小鼠体内体外建立APAP急性肝损伤模型并且给药。小鼠肝脏原代肝细胞分为5组(n=4):Control组、模型组(APAP)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 50μM)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 25μM)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 12.5μM)组,各给药组及损伤模型组分别加入10m M APAP,空白对照组加入等体积DMSO溶媒,诱导24h。小鼠模型通过选取SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(n=8),包括正常对照组、APAP(300mg/kg)肝损伤造模型组、APAP(300mg/kg)+Rc低剂量组(5mg/kg/d)、APAP(300mg/kg)+Rc高剂量组(10mg/kg/d)。各组按照剂量给予人参皂苷Rc腹腔注射给药,正常对照组给予等体积生理盐水。连续给药10d,每天1次。配置浓度为30mg/ml的APAP标准注射液,用l ml注射器迅速吸取标准液注射小鼠腹腔,除正常对照组外,其余各组小鼠腹腔注射APAP(300mg/kg)诱发小鼠急性肝损伤。对照组按照体重给予等容量的生理盐水。用q PCR、Western Blotting、ELISA和免疫荧光等方法检测肝细胞中和APAP代谢、凋亡、氧化、炎症等相关基因的表达变化,试剂盒检测肝细胞/肝脏中ALT、AST等肝损指标,HE染色检测肝组织形态中的变化情况,以TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,GSH和SOD试剂盒检测小鼠肝脏抗氧化的表达情况。2.探讨FXR(Nrlh4)敲除小鼠及原代肝细胞验证Rc对于APAP诱导肝损伤作用机制利用分子对接验证人参皂苷Rc是否能和FXR对接,在FXR~(-/-)小鼠原代肝细胞以及FXR~(-/-)小鼠上建立APAP急性肝损伤模型并且给药Medical countermeasures。FXR~(-/-)小鼠肝脏原代肝细胞分为3组(n=4):Control组、模型组(APAP)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 50μM),各给药组及损伤模型组分别加入10m M APAP,空白对照组加入等体积DMSO溶媒,诱导24h后,进行下一步实验。FXR基因敲除小鼠随机分为3组(n=8),包括正常对照组、APAP(300mg/kg)肝损伤造模型组、APAP(300mg/kg)+Rc组(10mg/kg/d)。各组按照剂量给予人参皂苷Rc腹腔注射给药,正常对照组给予等体积生理盐水。连续给药10d,每天1次。配置浓度为30mg/ml的APAP标准注射液,用l ml注射器迅速吸取标准液注射小鼠腹腔,除正常对照组外,其余各组小鼠腹腔注射APAP(300mg/kg)诱发小鼠急性肝损伤。对照组按照体重给予等容量的生理盐水。用qPCR、Western Blotting、ELISA和免疫荧光等方法检测肝细胞/肝脏中和APAP代谢、凋亡、氧化、炎症等相关基因的表达变化,试剂盒检测肝细胞中ALT、AST等肝损指标,HE染色检测肝组织形态中的变化情况,以TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,GSH和SOD试剂盒检测小鼠肝脏抗氧化的表达情况。比较各组间差异并进一步验证Rc肝保护作用PLX5622分子量通路。结果:1.小鼠肝脏原代细胞中,人参皂苷Rc处AZD1152-HQPA理有效地改善了APAP诱导的炎症和ROS的产生,缓解了APAP诱导的小鼠肝脏原代细胞MPHs细胞凋亡和NAPQI的积累。Western blotting结果显示APAP模型组中,细胞凋亡基因Bcl2/Bax m RNA相对表达水平是上调的,人参皂苷Rc处理可以逆转Bcl2/Bax m RNA相对表达水平。人参皂苷Rc处理后TUNEL染色比较损伤模型组红色荧光标记阳性凋亡细胞数量明显减少。2.在APAP急性肝损伤模型的小鼠中,人参皂苷Rc的给药明显减弱了肝脏毒性,表现为给药组小鼠存活率的提高和肝脏功能障碍的修复。(1)ALT、AST试剂盒结果显示人参皂苷Rc给药后血清ALT和AST水平显著降低,肝脏损伤程度显著降低。(2)HE染色显示,人参皂苷Rc给药后肝脏坏死区域明显减少,明显改善了肝细胞的凋亡。(3)GSH试剂盒显示Rc处理增强了GSH血清水平的表达,m RNA显示增强了抗氧化基因的表达。3.人参皂苷Rc可以上调WT小鼠肝脏原代细胞以及WT小鼠中FXR的m RNA表达;结合分子对接以及KEGG结果表明,人参皂苷Rc可能通过介导FXR蛋白来发挥相关作用。FXR敲除后,人参皂苷Rc对于APAP诱导的炎症反应、细胞凋亡及氧化应激失去保护作用;人参皂苷对FXR~(-/-)MPHs细胞失去抗炎抗氧化的调控作用。结论:从人参中分离得到的化合物人参皂苷Rc可以改善APAP诱导小鼠肝脏及其原代细胞的细胞凋亡,并改善其氧化应激状态,减轻炎症。同时,人参皂苷Rc通过FXR核受体激活依赖性地发挥对APAP诱导肝损伤的保护作用。人参皂苷Rc对肝脏的保护作用因FXR的敲除而失去作用,推测人参皂苷Rc可能是通过介导FXR来发挥上述作用。

抗精神病药物诱发癫痫发作(epileptic seizure)是临床应用过程中需关注的问题。现有证据显示，第1代抗精神病药物诱发癫痫发作的风险较低，但氯丙嗪(cBMS-907351半抑制浓度hlorpromazine)除外；第确认细节2代抗精神病药物中氯氮平(clozapine)诱发癫痫发作的风险最高，而奥氮平(olanzapine)、利培酮(risperidone)、喹硫平(quetiapine)、齐拉西酮(ziprasidone)及阿立哌唑(aripiprazole)风险较低。多种因素会影响抗精神病药物诱发癫痫发作的阈值，例如癫痫发作史、同时服用其他降低发作阈值的药物、合并其他慢性疾病(如器质性脑部疾病)、个体易感性及年龄等，其中抗精神病药物血药浓度与癫痫发作次数的增加关系最为密切。为减少癫痫发作，抗精神病药物起始治疗阶段应从小剂量开始缓慢滴定，监测血药浓度，并保持在最低有效剂量。服用抗精神病药物期间可伴随脑电图改变，但脑电图异常率与癫痫发作风险关系并不明确。虽然大量证据表明抗精神病药物可降低癫痫发作阈值，但Anthocyanin biosynthesis genes部分抗精神病药也可以发挥抗癫痫作用。该文对既往探讨抗精神病药物与癫痫发作相关文献作简要综述。

目的 探究胃癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages, TAMs）白细胞分化抗原68(cluster of differentiation68, CD 68)CD68、程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1, PD-L1)表达及对胃癌患者临床预后的影响。方法 收集2019年7—12月JNJ-42756493使用方法东莞市人民医院36例胃癌患者的病理标本和临床信息，采用免疫荧光法检测癌组织和癌旁组织中CD68和PD-L1表达，并进行统计分析。结果 胃癌组织中CD68阳性细胞平均值为（143±63）个，高于癌旁组织（81±35）个，差异有统计学意义（t=-12.713,P<0.05）；胃癌组织中CD68和PD-L1双阳性细胞平均值为（56±31）个，高于癌旁组织（39±23）个，差异有统计学意义（t=-11.928,P<0.05）;CD68高表达患者平均生存时间为26个月，总生存率（overall survival rate,OS）为27.8%,显著低于CD68低表达患者平均生存时间36个月，OS为63.2%，差异有统计学意义（P<0.05）;TAMs PD-L1高表达患者平均生存时间为25个月，Colforsin生产商OS为33.3%，显著低于TAMs PD-L1低表达患者平均生存时间37个月，OS为53.9%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 CD68、PD-L1在胃癌组织中高表达，CD68、PD-LMedullary carcinoma1高表达患者平均生存时间缩短，OS显著降低，预后更差。

种子在储藏过程中活力逐渐丧失,每年稻谷在储藏过程中所造成的损失约占稻谷总储藏量的3%左右。脱落酸(abscisic acid,ABA)在植物种子local infection休眠、萌发和逆境响应过程中发挥重要作用,拟南芥ABA合成和信号途径相关基因参与种子的耐储藏性调控。OsABA2是ABA合成途径关键基因,可能受OsMAPK6磷酸化调控,本论文以OsABA2、OsMAPK6突变体和构建的转基因株系为材料,开展水稻种子耐储藏性研究,旨在了解OsABA2在水稻种子耐储藏性中的功能。获得如下结果:1.水稻中过表达OsABA2基因,在不影响单株产量的前提下可以提高种子耐储藏性。宜香1B中过表达OsABA2,株高显著降低,种子粒长变长,粒宽变宽,千粒重显著提高,结实率、有效分蘖数和穗长无显著变化,最终导致产量并无显著变化。种子加速老化处理20天后,野生型的发芽率为53%,两个OsABA2-OE株系发芽率分别为92%和80%。2,3,5氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色也进一步证实OsABA2-OE株系种子的耐储藏性强于野生型。2.OsABA2通过增强水稻种子胚部活性氧的清除能力从而提高种子的耐储藏性。加速老化过程中OsABA2-OE株系种子储藏物质变化幅度较小。丙二醛(malondiadehyde,MDA)含量、种子浸出液电导率测定结果显示OsABA2-OE株系种子膜损伤程度弱于野生型。二氨基联苯胺(diamino benzidine,DAB)组织染色和H_2O_2定量结果显示OsABA2-OE株系种子胚部积累了较少的H_2O_2。总抗氧化物含量测定显示OsPF-03084014ABA2-OE株系种子中总抗氧化物含量显著高于野生型。OsABA2-OE株系种子在H_2O_2溶液处理后,种子的发芽率显著高于野生型。OsABA2-OE株系种子在加速老化处理后可溶性糖、总淀粉含量变化幅度较小,种子更耐储藏。3.OsABA2可能通过影响谷胱甘肽代谢途径、苯丙烷类合成途径和MAPK信号途径相关基因的表达来增强种子的耐储藏性。RNA-Seq数据分析发现,在加速老化处理过程中共有80个差异表达基因在OsABA2-KO株系中下调表达,而在OsABA2-OE株系中上调表达。对差异表达基因进行GO分析与KEGG Pathway分析,差异表达基因主要富集在谷胱甘肽代谢途径、苯丙烷类合成途径和MAPK信号途径。4.OsMBelnacasan抑制剂APK6可能在OsABA2上游调控水稻种子的耐储藏性。加速老化处理后,突变体aba2和双突变体mapk6:aba2发芽率显著低于野生型和突变体mapk6。双过表达OsMAPK6、OsABA2不会进一步提高种子的耐储藏性。5.冈46B中过表达OsABA2基因,在不影响单株产量的前提下可以提高种子耐储藏性。过表达株系粒长、粒宽、穗长、有效穗数、结实率、千粒重、单株产量与野生型相比没有显著性差异。加速老化处理后,G46B的发芽率为21%,而过表达株系种子的发芽率为35%。稻米储藏物质测定结果显示加速老化处理对过表达株系种子中储藏物质的影响较小。

目的:评估原发性帕金森病(PD)合并抑郁患者脑类淋巴系统形selleck MG132态学及引流功能的改变及其临床意义。方法:35例原发性PD合并抑郁患者(PD+D组)、36例PD不合并抑郁患者(PD组)及32例正常对照纳入研究。行MRI检查，在T2WI的轴向图像上分析额叶皮层和基底节区血管周围间腔(PVS)相对面积，并分plant immunity析PD+D组PVS相对KD025说明书面积与汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分的相关性；使用3.0T动态增强MRI的T2W1轴向图像分析额叶所有PVS的浓度-时间曲线(CTC)特征性参数，采用K-means聚类算法基于洗入率和峰浓度对CTC进行聚类分析。结果:在额叶和基底节区，PD组PVS相对面积大于正常对照组，PD+D组大于PD组(P<0.05)。PD患者额叶和基底节区PVS相对面积与HAMD评分均呈正相关，r_P=0.571(P=0.004)和r_P=0.622(P=0.002)。CTC聚类为两型，Ⅰ型CTC斜率较Ⅱ型更陡峭，峰浓度更高。PD+D组Ⅰ型CTC占比(0.30±0.09)高于PD组(0.18±0.04),P<0.05。结论:类淋巴引流功能受损可能在原发性PD患者抑郁症状的发生及进展中发挥重要作用。

目的 采用网络毒理学与分子对接技术初步探究准噶尔乌头炮制减毒的作用机制。方法 通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)、毒理学数据库(TOXNET)、反向药效团匹配数据库(Pharmmapper)和文献筛选准噶尔乌头的毒性成分和潜在靶点，乌头碱和准噶尔乌头碱为准噶尔乌头炮制前的主要成分，经炮制后乌头碱主要水解生成苯甲酰乌头原碱，准噶尔乌头碱结构稳定，未发生变化。比较毒理基因组学数据库(CTD)、疾病靶点筛选数据库(TTD)、疾病基因数据库(DisGeNET)、基因名片数据库(GeneCards)挖掘心脏毒性靶点。通过韦恩平台(Venny)获取准噶尔乌头心脏毒性的关键靶点，再从关键靶点中获取乌头碱、准噶尔乌头碱和苯甲酰乌头原碱的交集靶点。采用R软件对关键基因功能注释分析，运用Cytocape 3.7.2绘制准噶尔乌头-作用靶点关系网络图。辅以分子对接技术和心肌细胞H9c2对炮制前后主成分-准噶BLZ945化学结构尔乌头碱、乌头碱和苯甲酰乌头原碱的心脏毒性进行验证。结果 共得到准噶尔乌头毒性成分18个，关键靶点22个。草乌甲素、3-脱氧乌头碱、准噶尔genetic counseling乌头碱、乌头碱为准噶尔乌头的主要毒性成分，通过作用于丝裂原激活蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原激活蛋白激酶14(MAPKRegorafenib溶解度14)、血清白蛋白(ALB)等靶点，介导有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、白细胞介素17(IL-17)信号通路、叉头框蛋白O(FoxO)信号通路等途径，诱发心脏毒性作用。分子对接验证了准噶尔乌头的主要毒性成分草乌甲素、乌拉尔宁、准噶尔乌头碱等，与ALB、MAPK1、胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)等靶点的结合潜能较好。心肌细胞实验结果显示乌头碱、准噶尔乌头碱和苯甲酰乌头原碱的IC_(50)分别为0.357、0.617、1.070 mg/mL,乳酸脱氢酶(LDH)释放量和细胞凋亡率均随药物浓度增加而升高(乌头碱>准噶尔乌头碱>苯甲酰乌头原碱),乌头碱的心脏毒性最大，大约是其水解产物苯甲酰乌头原碱的3倍。结论 准噶尔乌头炮制品通过多成分多靶点多通路介导心脏毒性发生。准噶尔乌头经炮制后心脏毒性降低，减毒机制可能与调控纤溶酶原(PLG)靶点有关。

目的 分析豫北地区2016—2018年乙型肝炎患者乙肝病毒(寻找更多hepatitis B virEntinostat浓度us, HBV)逆转录酶基因与替诺福韦酯(tenofovir disoprox fumarate, TDF)、替比夫定(telbivudine, LDT)、阿德福韦(adefovir dipivoxil, ADV)、拉米夫定(lamivudine, LAM)、恩曲他滨(emtricitabine, FTC)、恩替卡韦(entecavir, ETV)等核苷(酸)类药物耐药相关的10个位点上的突变情况，为乙型肝炎患者合理用药和抗病毒治疗提供依据。方法 提取乙型肝炎患者血清HBV DNA,针对YMDD突变位点，在保守区域设计特异性引物，采用PCR扩增方法结合双脱氧终止测序法，对PCR产物进行DNA测序，对测序成功的样本进行基因型分析，检测Yinflamed tumorMDD的突变情况，同时对核苷(酸)类药物耐药相关的10个位点上的突变情况进行分析。结果 148例乙型肝炎患者标本中，其中C基因型为97.97%,耐药突变率为35.86%;B基因型为2.03%,耐药突变率为33.33%。耐药情况分析：拉米夫定LAM和恩曲他滨FTC耐药突变各32例，阿德福韦ADV和恩替卡韦ETV耐药突变各19例，替比夫定LDT耐药突变17例，替诺福韦酯TDF耐药突变1例。拉米夫定LAM和恩曲他滨FTC耐药突变中以M204V和M204I最常见，其中M204V突变常以M204V+L180M和M204V+L180M+V173L两种组合出现，而M204I突变则常单独出现或者以M204I+L180M组合出现；阿德福韦ADV耐药中以N236T+A181位碱基替换为主；恩替卡韦ETV耐药突变则在拉米夫定LAM和恩曲他滨FTC耐药基础上，以T184位和S202碱基替换为主；替比夫定LDT的耐药突变主要为M204I。结论 豫北地区乙型肝炎患者基因型多为C型，耐药突变组合较为复杂，多药耐药基因突变比率较高，临床用药时要注意合理混合用药，防止耐药的发生。