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目的 通过细胞学实验和动物实验来研究替加环素是否对脂多糖（LPS）诱导的炎性反应具有调控作用。方法 (1)检测替加环素对plant innate immunity小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的增殖活性影响；(2)检测替加环素对LPS诱导的RASCH727965核磁W264.7产生炎性反应的调控作用。RAW264.7细胞液中先后加入替加环素和LPS，不同时间点收集LPS组和替加环素+LPS组等各组上清液，ELISA检测细胞因子含量；(3)低剂量LPS诱导小鼠炎症反应及替加环素干预实验。小鼠先尾静脉注射替加环素（6.5 mg/kg）再注射LPS(15 mg/kg),ELISA检测各时间点血清细胞因子，24 h处死后取脾脏行流式检验，并记录24 h内小鼠的死亡情况。结果 (1)替加环素对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的增殖活性有促进作用；(2)替加环素对LPS诱导RAW264.7产生的炎性反应有抑制作用，减少IL-6、IFN-更多γ、CCL5等细胞因子的分泌，增加IL-10分泌；(3)替加环素对LPS诱导小鼠的炎症反应也有类似的抑制作用；流式细胞仪检测发现替加环素可促进内毒素血症状态下巨噬细胞的M2极化；对小鼠死亡有一定的保护作用。结论 替加环素对宿主感染LPS具有免疫调节作用，可以抑制宿主产生的过度免疫反应，对宿主具有保护作用。

目的：分析血清过氧化还原酶1(PRDX1)水平与2型糖尿病（T2DM）患者抑郁症状及Primary B cell immunodeficiency主观应激的相关性。方法：选择2019年7月至2021年12月陕西省榆林市第二医院的256例T2DM患者，根据抑郁—焦虑—压力量表-21(DASS-21)抑郁评分将患者分为抑郁症状组（n=56）及无抑郁症状组（n=200）。采用酶联免疫吸附法检测血清PRDX1水平。根据DASS-21评估患者心理状态。采用压力知觉量表（PSS）评估患者的主观应激程度。结果：根据DASS-21评分，抑郁症状组中血清PRDX1水平显著高于无抑郁症状组的患者（P<0.05）；所有T2DM患者血清PRDX1水平为（12.98±3.70）ng/mL，且血清PRDX1水平与DASS-21抑郁评分和压力评分均呈正相关关系（P<0.05）；经受试者工作特征曲线分析，血清PRDX1水平诊断T2DM合Decitabine MW并抑郁症状的曲线下面积为0.767(95%CI:0.699～0.835)，灵敏性、特异性分别为87.5%、68.5%；经Pearson相关性分析和校正多种干扰因素的多元线性回归分析，血清PBlebbistatinRDX1水平与有抑郁症状的T2DM患者PSS评分呈正相关关系（P<0.001），但与无抑郁症状的患者PSS评分无相关关系（r=0.076,P=0.283）。此外，对于有抑郁症状的T2DM患者，血清PRDX1水平与IL-6、TNF-α水平亦呈正相关关系（P<0.001）。结论：血清PRDX1水平对诊断T2DM患者是否合并抑郁症有良好的效能，且对于出现抑郁症状的T2DM患者，血清PRDX1水平持续增加与患者机体低度炎症反应以及主观应激程度有关。

目的 观察抑郁症患者孤独感现状，并分析其相关影响因素。方法 选取2019年1月至2022年8月江西省荣军优抚医院精神科收治的72例抑郁症患者进行研究，采用孤独感自评量表（UCLA）对患者的孤独感现状进行评估，自Z-IETD-FMK体内制一般资料调查表，记录患者相关资料，比较不同资GSK1120212体内实验剂量料的患者UCLA评分，并经线性回归分析抑郁症患者孤独感的影响因素。结果 本研究72例抑郁症患者经评估，UCLA量表得分27～59分，平均为（36.6±4.7）分，处于中度孤独感；归属需求量表得分平均为（59.9±6.2）分。不同病程、文化水平、家庭人均月收入、居住情况资料的患者UCLA评分比较，差异有统计学意义（P<0.05）；其他不同资料特征患者UCLA评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）。经线性回归分析，结果显示，病程≥24个月、文化水平高中及以下、家庭平均月收入<3 000元、独居均为抑郁症患者孤独感的Antibiotic urine concentration影响因素（P<0.05）。结论 抑郁症患者孤独感处于中等水平，病程、文化水平、家庭经济、独居均为抑郁症患者孤独感的相关影响因素。

木质纤维素来源广泛、数量巨大,是一种自然界丰富的可再生资源,对其开发利用在节能减排、环境保护、优化能源结构和社会可持续发展等方面具有重要意义。但needle prostatic biopsy是由于纤维素的高度结晶组织、木质素的复杂结构以及半纤维素的高度多样性和异质性造成其难以被降解,从而限制了其开发利用。而在自然界中存在许多可以降解利用木质纤维素的微生物,主要包括产游离酶系的好氧真菌如里氏木霉(Trichoderma reesei),和复合体酶系的厌氧细菌如解纤维素梭菌(Ruminiclostridium cellulolyticum)。解纤维素梭菌(R.cellulolyticum)是一种厌氧嗜中温梭菌,它能够分泌多种纤维素酶的复合体-纤维小体(cellulosome)来高效降解木质纤维素,其中无催化活性的骨架蛋白的(Scafoldin)的黏附域能够与酶组分的锚定域特异性的相互作用。在R.cellulolyticum,其纤维小体cip-cel基因簇中有12个编码纤维素降解所必需的纤维素酶基因和骨架蛋白基因。我们前期转录组数据发现,cip-cel基因簇为一个转录单位,即操纵子(operon)。同时还发现该基因簇的5′UTR转录一个游离的s RNA(small RNA),该s RNA和下游纤维小体基因在不同的碳源下转录丰度发生显著差异。为此,该5′UTR发PLX4032 IC50挥什么样的作用来调控下游纤维小体基因的表达?本研究以R.cellulolyticum为主要研究对象,分析了纤维小体编码基因簇cip-cel中5′UTR的功能。首先,对纤维小体编码基因簇cip-cel 5′UTR与下游基因的表达进行分析,发现5′UTR与下游基因在不同碳源下的表达具有显著差异。通过q PCR与Northern blot实验分析发现fbfp转录本在https://www.selleck.cn/products/kpt-330.html木糖下转录水平最高,纤维二糖次之,葡萄糖下最低。同时,利用Gus A报告系统在纤维二糖、葡萄糖、木糖及纤维素下对Pcip-UTR和Pcip的启动子活性进行比较,发现Pcip-UTR启动子活性在葡萄糖下表达量低,而在纤维素下表达量较高。此外,通过等温滴定微量热法(ITC)检测了糖信号分子与5′UTR的相互作用,发现葡萄糖与5′UTR具有亲和力,K_a值能达到10~6,而纤维二糖与5′UTR没有相互作用。因此,推测cip-cel基因簇的5′UTR潜在具有核糖开关的功能来调控下游纤维小体基因的表达。其次,在转录组数据的基础上,对纤维小体cip-cel基因簇5′UTR的剪切发生进行了鉴定。将5′UTR克隆到Fb FPs荧光蛋白报告系统中,通过PCR扩增以及Northern blot实验鉴定了5′UTR剪切事件的发生。然后通过利福平稳定性实验分析并计算了fbfp转录本的半衰期,结果表明5′UTR的剪切能显著提高下游基因转录本的稳定性。除此之外,我们通过自剪切验证了5′UTR不具有glm S核酶的功能,游离的s RNA的产生是由于细菌细胞内核糖核酸酶作用的结果。再次,纤维小体cip-cel基因簇5′UTR的结构功能分析。在确认s RNA由5′UTR剪切产生的基础上,利用Mfold二级结构预测软件对cip-cel基因簇5’UTR的结构进行了解析。根据转录方向将5′UTR分为五部分,依次命名为R1,R2,R3,CS和R4。为了进一步解析该结构,我们构建了不同的突变体,并将其克隆到双荧光蛋白报告系统中。Northern blot结果表明在R3和R4中分别存在一个RNA剪切加工位点,并且发现R3和R4中的剪切位点均位于茎环的上游。除此之外,在R3中还发现存在一个转录终止子,信号分子通过与5′UTR的结合引起其结构的变化,激活5′UTR的转录终止活性进而控制下游基因转录提前终止。最后,开发了一种荧光染料Cy5.5标记DNA探针的核酸印记杂交方法。以R.cellolyticum为研究对象,通过Southern blot和Northern blot方法检测了Cy5.5标记DNA探针的特异性和敏感性。通过Cy5.5标记的DNA探针,我们成功通过Southern blot鉴定了基因的插入失活,并通过Northern blot分析了基因的差异表达和RNA的剪切加工。使用Cy5.5标记DNA探针避免了使用危险的放射性同位素标记试剂,并且杂交信号可以通过荧光成像系统直接检测,特异性和灵敏度更强。在研究生物成像和生物分子间相互作用等方面具有良好的应用前景。总之,通过以上的研究,我们初步对5′UTR的结构和功能进行了分析。发现5′UTR在不同碳源下影响下游基因的转录水平。位于纤维小体cip-cel基因簇的5′UTR潜在具有核糖开关的功能,通过感受细胞内糖分子信号进而调控下游纤维小体基因的表达,当细胞内存在葡萄糖时,5′UTR与其结合后结构发生改变,进而终止下游基因的转录。因此,纤维小体编码基因的5′UTR在其表达调控方面潜在扮演重要角色。本研究不仅进一步丰富核糖开关和5′UTR的分子识别和纤维小体的表达调控机制,而且为进一步理解RNA作为新的调控手段在细菌生命活动中发挥的作用等方面具有重要意义。

癌症是威胁人类健康的主要疾病之一,具有早期不易发现和中晚期难以治疗的特点,发病后往往给患者的身心造成巨大伤害。尽管近年来在外科手术治疗、放射线治疗、靶向药物治疗和免疫治疗等方面取得了一些进展,但其治疗效果仍远不能满足患者的需求。因此,不断探索和创新癌症的治疗方法仍具有重大的现实意义和社会价值。癌症的本质原因是原癌细胞基因的突变,从基因角度研究癌症的治疗方法具有重要意义。作为一种强有力的基因编辑工具,CRISPR基因编辑系统已广泛应用于促癌/抑癌基因、癌症模型构建和癌症诊断等领域的研究。然而,当前利用CRISPR直接对癌细胞进行杀伤的研究还相对较少。即使当前有限的研究,也主要集中在利用CRISPR破坏癌细胞表达功能性蛋白的外显子上。这种杀伤策略的有效性会受到CRISPR编辑效率和癌症异质性的限制。CRISPR在直接杀伤癌细胞方面的研究相对较少,是因为面临着以下难点:如何特异性地编辑癌细胞而不影响正常细胞;如何将CRISPR系统高效地、特异性地递送到癌细胞内;如何在保证编辑特异性和递送特异性的前提下,提高CRISPR系统在癌细胞内的编辑效率。本文聚焦于利用CRISPR直接杀伤肿瘤细胞这一主题,致力于解决上述难题,以期为肿瘤治疗提供新的思路和方法。本研究以人类基因组中非编码区最大的重复序列——Alu序列Medical toxicology为编辑目标,利用CRISPR剪切癌细胞基因组中广泛分布的Alu重复序列。通过这种方法,使癌细胞染色体产生海量断裂,整体破坏癌细胞基因组DNA,最终杀死癌细胞。这项研究为探索新的癌症治疗方法提供了一条新的思路。本文主要在以下四个方面开展了研究:1.Alu一致序列的筛选与确定Alu序列是人类基因组中一种重要的重复序列,伴随人类的漫长演化历程,可以细分为多个亚家族。这些亚家族的一致序列存在一定的差异,因此需要从中选择一个合适的Alu一致序列作为CRISPR系统的攻击靶标。为了寻找合适的Alu一致序列,本研究使用了BLAST方法在不同家族的Alu一致序列在人类基因组GRCh38.p14中的分布进行了检索。实验结果表明,由位置频率矩阵统计得到的Alu一致序列大量且广泛地分布于人类细胞每一根染色体上,相对于其他家族的Alu一致序列,更适合作为破坏基因组DNA的CRISPR剪切靶标。2.胞外剪切Alu一致序列对基因组DNA的损伤为了探究CRISPR系统对Alu一致序列的剪切是否会破坏基因组DNA,我们进行了细胞外切割实验。实验中使用了Cas12a核酸内切酶和靶向Alu序列的cr RNA,分别对Alu一致序列的DNA片段、Alu一致序列的PCR扩增产物、HEK-293T细胞基因组DNA、五种癌细胞基因组DNA和五种不同生物的基因组DNA进行切割。同时,我们还对比了切割Alu一致序列和切割单拷贝基因对基因组DNA的破坏程度。实验结果表明,CRISCobimetinib体内PR可以切断Alu一致序列的DNA片段,并且可以切断癌细胞扩增所得的Alu序列。此外,我们发现CRISPR对Alu一致序列的剪切会导致人类基因组DNA的完全降解,并且可以完全消化五种癌细胞的基因组DNA。然而,这种剪切造成的破坏仅限于含有Alu序列的人类基因组DNA。相比之下,剪切单拷贝基因对基因组DNA的破坏并不明显。实验结果证明了CRISPR系统对Alu一致序列的剪切可以破坏基因组DNA,并且这种破坏主要局限于含有Alu序列的人类基因组DNA。3.胞内切割Alu一致序列对癌细胞毒性的考察为了研究在细胞内剪切Alu一致序列对基因组DNA的破坏以及剪切所产生的细胞毒性,我们将剪切Alu序列的CRISPR系统克隆至质粒并整合绿色荧光蛋白报告系统,然后使用Lipofectamine 3000将质粒转染至HEK-293T等细胞。对转染后的细胞进行荧光镜检、流式细胞术统计和细胞毒性分析,以考察被剪切Alu序列后的细胞的生理状况。此外,我们还使用免疫荧光表征了剪切Alu序列后产生的大量DNA双链断裂现象。为了提高CRISPR系统的递送水平,我们将切割Alu一致序列的CRISPR系统包装至Ad5重组腺病毒。实验结果显示,传统的编辑单拷贝基因杀伤癌细胞的方法会使少量细胞逃脱基因编辑带来的不利影响,进而存活下来并再次增殖,而Cselleck MDV3100RISPR对Alu重复序列的剪切使细胞难以存活和继续增殖。此外,我们发现剪切Alu一致序列的不同位点和使用不同的Cas酶会造成不同的细胞毒性。免疫荧光分析显示,剪切Alu一致序列使癌细胞产生大量的DNA双链断裂。以腺病毒为载体递送CRISPR系统至癌细胞提高了转导效率。此外,我们将表达Cas12a蛋白的元件和cr RNA的元件包装至不同的重组Ad5腺病毒进行转导,既降低了生物安全风险,又保证了较高的共感染效率及细胞毒性。这些实验结果证明了在细胞内剪切Alu一致序列可以破坏基因组DNA并产生显著的细胞毒性。4.特异性剪切癌细胞Alu一致序列的CRISPR系统的设计和优化为了特异性地靶向癌细胞进行Alu序列的剪切,本文提出了一种基于甲胎蛋白(Alpha-Fetoprotein,AFP)启动子和位点特异性重组酶的CRISPR编辑系统,并对其进行了设计和优化。甲胎蛋白启动子是一种肿瘤特异性启动子,本文以甲胎蛋白阳性的肝癌细胞系为研究对象,比较了不同结构的甲胎蛋白启动子驱动CRISPR-Cas12a表达的效率,并选择了最优的甲胎蛋白启动子p AFP(a2b)进行后续实验。通过结合位点特异性重组酶和串联终止子元件,本文构建了多种肝癌细胞内特异性表达CRISPR系统的模型,并对其特异性和杀伤效率进行了评估。实验结果表明,本文成功构建了一种兼具表达特异性和高表达效率的双重组腺病毒系统,实现了对多种AFP阳性肝癌细胞的靶向杀伤。基于m CMV启动子、甲胎蛋白启动子、位点特异性重组酶和串联终止子元件构建的双重组腺病毒系统,在表达特异性上,与使用纯甲胎蛋白启动子的系统持平;在表达效率上,达到了纯m CMV启动子系统的74.5%。此项研究打破了以往CRISPR系统仅限于编辑外显子基因位点以消灭癌细胞的框架。实验结果显示,剪切Alu重复序列相较于剪切单拷贝基因,能更有效地提高CRISPR杀死癌细胞的功效。在递送方式上,本研究运用了双重组腺病毒系统,既确保了安全性,又显著提升了传递效率,超越了脂质体转染法。特别值得一提的是,本项研究提出了肿瘤特异性启动子与位点特异性重组酶配合使用的创新构架,从而在表达效率和表达的特异性上都取得了显著的提升。总之,这项研究提供了一种全新的从基因层面治疗癌症的创新策略,通过高效破坏癌细胞基因组,为癌症的治疗前景带来了新的希望。

通过点击化学（CuAAC反应）设计、合成了22个香豆素衍Baf-A1体内实验剂量生物。多数化合物在微摩尔范围内表现出良好的AChE和MAO-B双抑制活性，具有良好的生物相容性。尤其是一种名为A2Hgenetic exchange5的化合物，对AChE（IC_(50)=0.23±0.02μmol/L）和MAO-B（IC_(50)=0.31± 0.03μmol/L），是最佳的AChE/MAO-B双抑制剂。实验结果表明香豆素基团是一类有效的Talazoparib化学结构AChE和MAO-B双抑制活性基团，羟基取代苯环的存在能够增强抑制活性。分子对接研究发现A2H5是双位点抑制剂，苯基部分结合到AChE的CAS位点，香豆素结合到PAS位点，三氮唑环占据两个活性位点的中间峡谷。A2H5的香豆素部分结合到MAO-B的入口空腔，苯基部分结合到底物空腔，并嵌入到Tyr435、Tyr398 和FAD形成的“芳香笼”。总之，香豆素C7位置取代衍生物可以被开发为AChE/MAO-B双抑制剂，为进一步开发抗AD的双靶点药物提供一个新的起点。

叉虫责科(Nemouridae)隶属于襀翅目(Plecoptera)北襀亚目(Arctoperlaria),是襀翅目中最大的科之一。目前叉虫责科的分类地位一直存在争议,属间亲缘关系不清晰。当前主要是传统的形态学分类和少量基因片段的分子系统学的研究,而利用线粒体全基因组分析的研究相对来说较少。线粒体基因组的排列方式与其系统进化和基因功能息息相关。通过分析线粒体基因组的碱基组成、基因顺序和基因组结构的变化来研究线粒体基因组的多样性;利用线粒体基因组序列,通过系统发育重建,可以揭示物种间的进化关系、种群遗传演化,以及功能基因演化的历程。在襀翅目中,利用线粒体基因组的系统进化分析,成功地解决了一些selleck NMR有争议的属和种的分类问题。本研究对叉虫责科8属15种昆虫样本进行高通量测序,获取线粒体基因组序列,通过对其拼接和注释,分析比较其线粒体基因组基本结构、核苷酸组成、密码子使用、蛋白质编码基因、t RNA、r RNA和控制区结构。研究还结合Gen Bank已发表的真颚组28种昆虫线粒体基因组数据和2种外群(始虫责科)线粒体基因组数据,使用13个PCG和2个r RNA数据集进行叉虫责科和真颚组系统发育分析。结果显示叉虫责科昆虫线粒体基因组高度保守没有发现needle prostatic biopsy重排现象;t RNA和r RNA的结构也相对保守;叉虫责科蛋白质编码基因起始密码子使用最多的是ATT密码子,其次是ATG密码子,终止密码子偏好使用TAA密码子;基于PCG和PCG12数据集的ML和BI分析结果表明,叉虫责科内两个亚科的单系性仍无法较好地重建,但都支持Soyedina和Zapada的姊妹群关系,以及球尾叉虫责属和中叉虫责属的姊妹群关系,R428抑制剂不支持Malenka和倍叉虫责属的姊妹群关系。此外,所有的拓扑结构均重建了真颚组昆虫的系统发育关系为:((((叉虫责科+背虫责科)+卷虫责科)+(黑虫责科+带虫责科)+裸虫责科);均支持叉虫责科和背虫责科的姊妹群关系,以及黑虫责科和带虫责科的姊妹群关系。

外泌体是几乎所有细胞都会分泌、直径约为30～150 nm,具有脂质双分子层结寻找更多构的盘状囊泡,广泛分布于各种体液中,作为细胞间物质运输和信息通讯的重要媒介,直接影响了细胞的各种生理状态,并参与了多种疾病的发生发展。作为一种非侵入、具有细胞特异性的治疗性纳米载体,外泌体能有效地将货物输送到靶细胞,减少对正常细胞的伤害,增强治疗效果。本论文利用基因工程技术和外源性外泌体分离后修饰技术对天然外泌体进行定制化改造,制备具有特定生物功能的外泌体,并应用于重编程肿瘤细胞与免疫细胞的靶向识别,增强免疫细胞识别肿瘤细胞的能力。针对免疫原性低和癌细胞脱靶等问题,通过内源性改造获得膜表面表达水泡性口炎病毒糖蛋白(VSVG)的融合外泌体,利用膜表面修饰技术得到重编程修饰肿瘤细胞的功能化外泌体,并对其生物功能进行验证,探究了其增强免疫识别方面的应用潜力。主要研究内容如下:1.融合外泌体的构建及膜融合效应。外泌体自身生物特性受其亲本细胞的影响,并对其靶细胞具有特定的特征和作用。在本项工作中,通过基因工程修饰技术对亲本细胞进行改造,使其表达具有特定生物功能的病毒性融合蛋白,并分泌获得膜表面负载VSVG的融合性外泌体(VSVG-Exos)。以小鼠乳腺癌细胞为研究对象,通过一系列实验探究了 VSVG-Exos与小鼠乳腺癌细胞的膜融合效应,证明VSVG蛋白能在酸性条件下调控VSVG-Exos与小鼠乳腺癌细胞的相互作用,促进VSVG-Exos与肿瘤细胞膜融合。2.功能化外泌体重编程肿瘤细胞与免疫细胞之间靶Medical diagnoses向识别。肿瘤细胞与免疫细胞之间的相互作用是癌症免疫治疗成功的关键,增强肿瘤细胞与免疫细胞的相互识别对有效清除肿瘤细胞,Liraglutide作用抑制癌症发展具有重要作用。本项工作以小鼠乳腺癌细胞和小鼠树突状细胞为研究对象。利用细胞瞬时转染手段和膜表面修饰技术对天然外泌体进行定制改造,获得膜表面展示VSVG和DC-SIGN核酸适配体的功能化外泌体。外泌体膜表面表达的VSVG蛋白能在酸性条件下促使功能化外泌体与肿瘤细胞膜融合,并将膜表面信息转移至肿瘤细胞表面。与此同时,在DC-SIGN核酸适配体的作用力下,促进免疫细胞与肿瘤细胞相互识别,从而实现增强细胞间精准识别和特异性靶向作用。

目的目前肥胖是全球最严重的健康问题之一。食物摄入过多是导致肥胖的主要原因。因此深入研究摄食的调节机制,有助于寻找靶点,治疗肥胖。摄食功能主要受中枢神经系统和肠道内分泌系统的调控。已有研究显示,钙离子敏感受体(CaSR)在中枢和摄食调控有关的脑区广泛分布,包括下丘脑,脑干和边缘系统,尤其在脑干极后区(AP)中有丰富的表达。AP与孤束核(NTS)之间有紧insect microbiota密的纤维联系,而NTS中的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)阳性神经元与臂旁核(PBN)有单突触联系,因此本研究主要探究AP中CaSR通过NTS-PBN GLP-1通路影响摄食的机制。方法1.摄食行为分析法,观察AP微量给予CaSR激动剂-R568后对正常和肥胖小鼠摄食量的影响;GABA-A受体阻断剂、GLP-1R阻断剂Canagliflozin化学结构对R568引起的摄食抑制作用的影响;2.酶联免疫吸附法(ELISA),检测正常及肥胖小鼠AP中神经递质γ-氨基丁酸(GABA)、CaSR、NTS中GLP-1及PBN中GLP-1R的含量;3.AP中微量注射顺行示踪病毒(rAAV-hSyn-mCherry-WPRE-hGH pA),观察AP-NTS的神经纤维投射及其与GLP-1阳性神经元解剖关系;4.利用Gcg-IRES-CreERT2小鼠,采用化学遗传法(NTS注射AAV-EFla-DIOh M4D(Gi)-EGFP-WPRE)抑制NTS中GLP-1神经元,观察对R568引起的摄食抑制作用的影响;5.采用免疫荧光染色法,观察NTS中GLP-1和c-fos免疫阳性细胞及PBN中胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)与c-fos的共染情况;6.制作高脂饮食诱导肥胖小鼠模型,AP连续微量注射R568两周后,观察小鼠体重变化。结果1.摄食结果显示,AP中微量注射R568后,与DMSO组相比,在0-1h,1-2h内,小鼠的摄食量明显减少(P<0.05)。2.ELISA法结果显示,AP微量注射R568后,与对照组相比,AP中GABA的含量明显增加(P<0.05),同时,NTS中GLP-1的释放也显著增加(P<0.05)。3.免疫荧光染色结果显示,AP中微量注射R568后,与对照组相比,NTS中GLP-1,c-fos免疫反应阳性神经元及GLP-1与c-fos免疫反应阳性共表达神经元数目明显增加(P<0.05)。4.预先在AP中微量注射GABA-A受体阻断剂BicuElexacaftorculline,R568引起的厌食效应减弱(P<0.05)。5.顺行追踪技术联合免疫荧光染色结果显示,AP中微量注射顺行病毒后,在荧光显微镜下观察到NTS中有明显顺行纤维,IF结果显示GLP-1阳性神经元周围有顺行纤维。说明AP有神经元发出投射到NTS GLP-1阳性神经元。6.Elisa结果显示,AP中微量注射GABA-A受体阻断剂Bicuculline后,减弱了R568引起GLP-1含量增加(P<0.05)。7.化学遗传法结果显示,抑制NTS的GLP-1神经元后,R568引起的厌食效应减弱(P<0.05)。8.荧光免疫组织染色方法研究显示,AP中微量注射R568后,与对照组相比,PBN中GLP-1R、c-fos免疫阳性及GLP-1R与c-fos免疫阳性共表达神经元的数量显著增加(P<0.05)。9.预先在PBN中微量注射GLP-1R阻断剂Exendin(9-39),R568引起的厌食效应被抑制(P<0.05)。10.摄食结果显示,在肥胖小鼠的AP中微量注射R568后,与对照组相比,在0-1h,1-2h内,肥胖小鼠的食物摄入量明显减少(P<0.05)。11.Elisa结果显示,肥胖小鼠中CaSR的含量明显增加,NTS中GLP-1及PBN中GLP-1R水平显著降低(P<0.05);IF结果也显示肥胖小鼠中CaSR阳性神经元的数目明显增加,而NTS中GLP-1以及PBN中GLP-1R阳性神经元的数目明显降低。12.肥胖小鼠AP连续14天微量注射R568之后,与DMSO组相比,小鼠体重明显降低;NTS中GLP-1的含量及PBN中GLP-1R的含量也明显增加(P<0.05)。荧光免疫组化观察到NTS GLP-1阳性神经元和PBN GLP-1R表达量增加。结论在正常小鼠,AP的CaSR激活可以通过促进GABA的释放,进而引起小鼠短时间内食物摄入量降低。该作用与AP-NTS-PBN的GLP-1通路激活有关,但AP的GABA神经元不参与该作用。肥胖小鼠NTS-PBN的GLP-1通路活性降低可能和肥胖的发生有关;肥胖小鼠AP中CaSR表达量明显增加,AP微量注射R568 2周,可通过激活CaSR,提高AP-NTS-PBN的GLP-1通路兴奋性,进而抑制摄食,降低小鼠体重。我们的研究将为肥胖的治疗提供新的靶点,为能量代谢疾病的研究提供新的方向。

【目的】确定蛹虫草甲羟戊酸途径中的2个关键酶——磷酸甲羟戊酸激酶(CmErg8)和焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶(CmErg19)的功能及其对麦角甾醇和虫草素含量的影响。【方法】通过生物selleck抑制剂信息学分析鉴定蛹虫草中CmErg8和CmErg19，并采用酵Hepatoma carcinoma cell母互补确定其功能是否保守；以蛹虫草尿嘧啶营养缺陷型CmΔpyrG为背景菌株，利用农杆菌介导的转化方法对CmErg8和CmErg19进行过表达，观Etoposide察其对麦角甾醇和虫草素含量的影响。【结果】CmErg8和CmErg19不能互补酵母erg8和erg19突变体的温度敏感表型；CmErg8和CmErg19过表达菌株中麦角甾醇和虫草素含量均有所增加，特别是CmErg19基因过表达可以使虫草素含量提升5倍左右。【结论】本研究揭示了蛹虫草CmErg8和CmErg19的功能，并且发现蛹虫草麦角甾醇合成通路基因可能会影响虫草素含量。