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本文基于荧光共振能量转Gel Doc Systems移（fluorescence resonance energy transfer,FRET）技术设计构建纳米磷光探针。设计构建一种用于活细胞蛋白酶体实时活性检测的更多探针。主要设计思路为利用纳米金和铱金属配位化合物之间产生的FRET现象，通过目标蛋白酶的底物多肽连接二者。纳米磷光探针中的上述底物多肽被相应的蛋白酶体特异性识别和切割。FRET供体（铱）配合物与FRET受体（金纳米颗粒）分离，导致FRET现象消失，呈现铱配位配合物的绿色磷光信号。本研究所设计纳米探针针对蛋白酶体（目标蛋白）产生的磷光信号与其酶活性呈正相关，可用于试管和活细胞水平的蛋白酶体活性检测。此外，本研究中所述的酶活检测探针，针对不同的蛋白酶活性检测具有灵活的转变能力，通过多肽序列的替换，可获得目的蛋白酶活性检测磷光探针，大大拓www.selleck.cn/products/dinaciclib-sch727965展了其应用。

目的:分析贝伐珠单抗联合靶向治疗对表皮生长因子受体(EGFR)突变型非小细胞肺癌患者的临床疗效。方法:选取2022年1月至2023年1月厦门大学附属中山医selleckchem MK-2206院收治的80例EGFRselleckchem突变型非小细胞肺癌患者,采用数字随机分组法分为对照组和观察组,每组40例。对照组患者行常规靶向治疗,观察组患者在常规靶向治疗的基础上加贝伐珠单抗治疗。比较两组患者治疗后临床治疗效果、治疗前后血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)125、细胞角蛋白19片段(CYFRA)21–1]水平、免疫功能(CD3~+、CD4~+、CD8~+)的评估以及不良反应状况。结果:观察组患者总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05);治疗后,观察组患者血清CEA、CA125、CYFRA21–1水平均低于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05);治疗后,观察组患者CD3~+、CD4~+均高于对照组,CD8~+低于对照组,差异具有统计学意义(P <0.05);两组患者activation of innate immune system不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:对EGFR突变型非小细胞肺癌的患者采用贝伐珠单抗联合靶向治疗,不仅安全性高,还可以减少患者肿瘤标志物的水平,提升对疾病的控制率。

青贮是调节反刍动物青饲料盈缺平衡、保存青饲料及减少贮藏过程中营养损耗的最佳方式。青贮饲料在生产和使用过程中，会受到多种霉菌毒素污染。青贮饲料中的霉菌毒素会对反刍动物的生产性能和健康产生不利影响，并危害人类健康。因此，有必要在青贮过程中选择合适的添加剂。目前，由于地衣芽孢杆菌具有提供优异特性功能性酶、益生菌功能以及生物脱氮、改善畜禽肠道健康Immune privilege和调节免疫力等生物学潜力，已被用于现代和可持续的农业系统中，但其作为青贮添加剂的应用甚少。因此，本文着重从地衣芽孢杆菌改善青贮发酵、抑制微生物腐败和霉菌毒素产生的潜在途径等方面进行综述，并selleckchem Dinaciclib提出未来的研究重点是关注地衣芽孢杆菌的特性和作用机制，以更好地实Bemcentinib临床试验现其作为青贮饲料添加剂的潜在应用。

目的卤代乙醛(HALs)是饮用水中权重居第三位的消毒副产物(DBPs),其细胞毒性和遗传毒性强于总量居前两位的三卤甲烷类和卤乙酸类DBPs。除水合氯醛,其余HALs均为非受控DBPs,尽管多数已鉴定HAL-DBPs单独作用的遗传毒性已明确,但很少有研究探析现实饮用水中Barasertib细胞培养HALs暴露组份和浓度混合暴露的遗传毒性及其可能机制。因此,本研究以上海某水厂常规处理工艺出厂水中检出的HALs组份和浓度为基础,研究HAL-DBPs低剂量混合暴露的遗传毒性及其可能机制。方法采用GC-ECD检测出厂水中HALs组份和浓度水平,检测HALs混合暴露的细胞毒性。利用鼠伤寒沙门氏菌(Ames)检测饮用水中实测的HALs混合暴露诱导的基因突变,利用单细胞凝胶电泳实验(SCGE)和细胞胞质阻滞微核实验(CBMN)分别检测HALs混合暴露引起的HepG2细胞DNA损伤和染色体损Empagliflozin体内伤,检测γ-H2AX确认遗传损伤,以全面评价HALs混合暴露的细胞毒性和遗传毒性。同时,探析HALs混合暴露诱导HepG2细胞氧化应激和抗氧化反应NRF2通路相关蛋白表达的影响,利用最低分子轨道测定HALs的亲电性,以明确其发生SN2反应潜能。采用自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HepG2细胞,观察NAC对遗传损伤的拮抗作用。结果饮用水中检出7种HALs,包括:水合氯醛(4.47μg/L)、溴乙醛(3.14μg/L)、一溴二氯乙醛(2.11μg/L)、二溴一氯乙醛(0.78μg/L)、溴氯乙醛(0.25μg/L)、二溴乙醛(0.06μg/L)和三溴乙醛(0.04μg/L),总量为10.85μg/L。现实暴露水平1000X的HALs混合暴露对HepG2细胞的细胞毒性显著强于单一HAL暴露的细胞毒性(P<0.05)。HALs混合暴露可增加鼠伤寒沙门氏菌回复致突变,但与对照无显著性差异(P>0.05)。100X和1000X HALs现实暴露可使HepG2细胞Olive尾矩和尾部DNA含量显著增加(P<0.05),而现实暴露水平1000X HALs显著增加了HepG2细胞核质芽和微核率及细胞的y-H2AX水平(P<0.05)。HALs混合暴露可增加HepG2细胞ROS,激活NRF2通路,增加NRF2、GCLM、GCLC和NQO1相关蛋白表达。亲电性分析显示,除水合氯醛外的其它HALs亲电性呈随卤取代lichen symbiosis增多而增大趋势。HALs混合暴露诱导的氧化应激反应、NRF2通路激活和染色体损伤可被抗氧化剂NAC预处理所恢复,提示氧化应激是遗传毒性的重要机制。结论饮用水中HAL-DBPs低剂量混合暴露有遗传毒性,氧化应激在遗传毒性中发挥重要作用,未来应关注HAL-DBPs长期暴露对人群不同健康效应终点的影响。

玉米(Zea mays L.)是全球种植广泛的禾谷类作物之一,增加单位面积产量不仅依赖于提高单株产量,更重要的是依靠种植密度的增加。然而高密度种植,增加了植株倒伏的风险。茎秆维管束数目和大小(Stalk Vascular Bundle,SVB)、纤维素(Stalk Fiber,SF)含量等与茎倒伏密切相关,而目前国内外对玉米抗倒伏相关性状的分子机制、调控玉米抗倒伏相关性状的功能基因研究报道甚少。本研究利用玉米突变体Sdw3和zmacs7-2进行组织形态解剖学观察、维管束数目及纤维素、半纤维素、木质素含量测定;利用遗传转化拟南芥验证玉米茎秆抗倒伏相关基因ZmA CS7功能;对遗传多样性丰富的172份玉米自交系雄穗主轴基部小维管束(NSVB)和大维管束数目(NLVB)进行差异性分析;选择茎秆高纤维含量黄昌b(HCB)和低纤维含量吉63(JI63)自交系,在十叶期(V10)、吐丝期(DTS)、吐丝后10天(AS10)和吐丝后20天(AS20)四个时期,分别对茎秆第三节间进行转录组学和代谢组学分析,进一步探究不同发育时期ZmA CS7对玉米茎秆纤维发育的影响。结果如下:1.茎秆细胞学观察和成分测定分析发现,突变体Sdw3雄穗主轴基部、穗位节和基部第三节间,细胞壁成分中纤维素、半纤维素和木质素含量均降低。与野生型相比,突变体Sdw3第三节间的半纤维素含量显著降低(2.46%),木质素和纤维素含量均下降(不显著),ZmA CS7基因影响茎节基部第三节间纤维发育,负调控纤维次生细胞壁合成。与野生型相比,突变体Sdw3单位面积NSVB和NLVB均增多。突变体zmacs7-2与野生型玉米自交系B73相比,其成株期节间伸长、穗位和株高均提高。2.细胞学观察发现,拟南芥突变体acs7-d在茎秆维管发育中纤维细胞壁发育和茎伸长受抑制,促进形成层裂殖;遗传转化表明,ACS7基因可通过保守级联反应抑制纤维细胞壁生物合成,并负调控纤维细胞次生细胞壁发育,其过量表达影响植株发育,表现为短花梗、短叶片、植株“侏儒”、果荚小、结实少等,正调控拟南芥维管形成层发育,纯合突变体acs7-d形成层活动依赖WOX4基因,表明两个平行信号通路,即乙烯和 TDIF(tracheary element differentiation inhibitory factor)信号肽通路交点为 WOX4(WUSCHEL-related homeobox 4)。3.通过组织形态解剖学研究发现,隶属五个杂种优势群的172份玉米自交系雄穗主轴基部NSVB和NLVB变异系数分别为16.67%-21.69%、25.83%-32.19%;NSVB和NLVB在不同自交系间的差异均达到极显著水平;NSVB和NLVB的广义遗传力分别为78.87%和82.58%;NSDNA/RNA Synthesis抑制剂VB和NLVB在不同环境下均呈正相关关系。各杂种优势群自交系NSVB和NLVB趋势一致,由少到多排序依次为兰卡斯特群、瑞德黄马牙群、P群、旅大红骨群、塘四平头群。4.对茎秆高纤维含量自交系HCB和低纤维含量自交系JI63进行基于RNA-seq转录组学分析,自交系HCB四个生育时期同时鉴定到102个差异表达基因(DEGs),自交系JI63中鉴定到106个DEGsPLX3397。非靶向代谢分析,HCB鉴定到40个差异积累代谢物(DAtumor suppressive immune environmentMs),JI63鉴定到12个DAMs。进一步明确了ZmACS7基因调控茎秆纤维发育的关键时期是吐丝后20天。综上所述,ZmACS7作为与玉米抗倒伏紧密相关基因,主要在调控玉米茎秆节间SVB和SF中起作用,参试材料SVB存在广泛差异性,最少的是兰卡斯特群、最多的是塘四平头群;初步明确了ZmA CS7基因对茎秆纤维发育影响的关键时期。

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是一种四碳的非蛋白质氨基酸,具有多种生理生化功能,在医药、化工、食品添加等领域有着广泛应用。作为食品安全菌株,谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)在工业上可用于L-谷氨酸及其衍生物的大量生产。为实现利用谷氨酸棒杆菌高效合成γ-氨基丁酸,本研究通过理性设计催化产物前体生成的谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)提高了酶在生产条件下的活力,强化了生产菌株合成谷氨酸的能力。在此基础上,理性设计生产限速酶谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)改善了酶p H特性,进一步结合代谢改造手段,获得了γ-氨基丁酸产量及生产效率提高的重组谷氨酸棒杆菌。研究结果为实现其规模化工业生产奠定了基础。主要研究结论如下:(1)不同来源谷氨酸脱氢酶的筛选及理性设计。本研究从7种不同来源的谷氨酸脱氢酶出发,合成基因后通过载体p ET-28a在E.coli BL21(DE3)中异源表达,SDS-PAGE验证发现蛋白皆成功表达。纯化蛋白测定各酶的酶学性质,发现各来源酶最适p H基本位于碱性范围,其中木聚糖兼性芽孢杆菌(Amphibacillus xylanus)来源的酶最适p H为8.5,最大比活力273.06±6.48 U·mg~(-1),仅次于谷氨酸棒杆菌来源的酶。根据辅酶依赖性及酶比活力选取木聚糖兼性芽孢杆菌来源的谷氨酸脱氢酶为对象,利用Rosetta软件Supercharge算法对其进行理性设计,得到突变点V55D,S150D,T188D,R255D,L257D,Q282D,L302E,K314E,R344E,T389E共10个位点。构建相应重组大肠杆菌,考察特定p H下单点突变酶的相对活力大小,组合有益突变点得到了最优组合突变酶Ax GDH~(S150D/T188D/L257D/L302E)。酶学性质测定和分子动力学模拟比较最优组合突变酶与野生酶在最适条件、稳定性及底物结合等方面的差异。结果显示突变酶最适p H下调1.5个单位,酶比活力得到提升。(2)谷氨酸棒杆菌中谷氨酸脱氢酶编码基因的整合,提高谷氨酸积累量。将上述木聚糖兼性芽孢杆菌来源野生酶及突变酶(Ax GDH~(S150D/T188D/L257D/L302E))的编码基因构建到生产菌C.glutamicum E01敲除整合载体p K18mobsac B上。电击转化、蔗糖筛选后获得整合菌株C.glutamicum E01::axgdh和C.glutamicum E01::axgdh~(S150D/T188D/L257D/L302E)。以葡萄糖为碳源,在5 L发酵罐中补料发酵96 h后,整合菌株C.glutamicum E01::axgdh~(S150D/T188D/L257D/L3Tumor immunology02E)谷氨酸积累量高达115.0 g·L~(-1)。(3)谷氨酸脱羧酶的酶学性质测定及理性设计。从实验室一株高产γ-氨基丁酸的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum HG-06)中克隆谷氨酸脱羧酶编码基因,通过构建重组载体p ET-28a-lpgad在E.coli BL21(DE3)中异源表达Lp GAD酶。测定酶的酶学性质后发现该酶最适p H为4.8且催化反应发生的p H范围较窄。以该酶为对象,利用上述Rosetta软件对其进行理性设计。得到突变点S24R,D88R,L135K,E170R,H196R,A225K,Y309K,A359R,E417K共9个位点。构建相应重组大肠杆菌,考察特定p H下各突变体相对活力大小,得到了最优组合突变酶Lp GAD~(S24R/D88R/MRTX1133 MWY309K)。通过酶学性质测定和分子动力学模拟比较最优组合突变酶与野生酶在最适条件、稳定性及底物结合等方面的差异。结果显示Lp GAD~(S24R/D88R/Y309K)在作用p H区间下的活力得到整体提升,p H 6.0时酶比活力是野生酶的1.68倍且酶作用的p H区间拓宽了0.5个单位。(4)重组谷氨酸棒杆菌发酵法及全细胞转化法生产γ-氨基丁酸。通过穿梭质粒p XMJ19BMN 673作用在上述整合菌C.glutamicum E01::axgdh~(S150D/T188D/L257D/L302E)中分别表达Lp GAD及其最优突变酶,实现谷氨酸棒杆菌从无到有发酵积累γ-氨基丁酸。采用两阶段p H调控策略,在5 L发酵罐中补料发酵96 h后,重组菌γ-氨基丁酸产量最高为32.14 g·L~(-1),葡萄糖到γ-氨基丁酸的转化率为11.94%。因发酵法制备γ-氨基丁酸产量较低,通过穿梭质粒p XMJ19在C.glutamicum E01中分别表达Lp GAD及其最优突变酶,摇瓶优化后确定了转化最适温度为40℃,5’-磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5’-phosphate,PLP)添加量为100μmol·L~(-1),底物L-谷氨酸为100.0 g·L~(-1),菌体量OD_(600)为20。C.glutamicum E01/p XMJ19-lpgad和C.glutamicum E01/p XMJ19-lpgad~(S24R/D88R/Y309K)在最优条件下于5 L罐中分批转化谷氨酸,γ-氨基丁酸产量分别达到247.1 g·L~(-1)和402.8 g·L~(-1)。

目的 观察系统性红斑狼疮（SLE）患者血清过敏毒素（C5a）、高迁移率族蛋白-1(HMGB1)、可溶性单核巨噬细胞血红蛋白清道夫受体（sCD163）水平变化并探讨其临床意义。方法 选取2020年1月至2021年1月在本院确诊的71例SLE患者，根据SLE活动性指标评分结果分组将SLE患者分为无活动组（n=28例）和活动组（n=43例），并选取同期在Anti-CD22 recombinant immunotoxin本院接受体检的健Telaglenastat供应商康志愿者为对照组（n=35例）。采用双抗体夹心ELISA法测定Dolutegravir血清补体C5a、sCD163、HMGB1水平。采用全自动生活分析仪和免疫比浊法测定尿总蛋白浓度并计算24 h尿蛋白水平。采用间接免疫荧光法测定抗双链DNA抗体（抗dsDNA）；采用比浊法测定补体C3、C4水平。采用系统性红斑狼疮疾病活动度评分（SLEDAI）评价SLE患者基本活动度。结果SLE组患者C5a、sCD163、HMGB1水平明显高于对照组（P<0.05）;C5a、sCD163、HMGB1与三者联合检测SLE的AUC分别为0.778、0.824、0.782及0.917(P<0.05);C5a、sCD163、HMGB1与补体C3、C4呈负相关（P<0.05）;C5a、sCD163、HMGB1与抗dsDNA、24 h尿蛋白定量呈正相关（P<0.05）;C5a、sCD163、HMGB1水平与SLEDAI评分均呈正相关（P<0.05）。结论 C5a、sCD163、HMGB1可作为诊断SLE的重要指标；且C5a、HMGB1可较好评估SLE疾病活动度及肾损伤；sCD163能反映SLE疾病严重程度。

玉米(Zea mays L.)学名为玉蜀黍、是原产于南美洲以及中美洲的禾本科植物。在玉米的生长和发育过程中,玉米花粉的发育是否正常直接决定玉米能否进行受精作用,进一步影响玉米的产量。因此,对于花粉发育相关基因的研究具有重要的理论和实践意义。本实验室前期已经获得了玉米花粉败育突变体zmstk1。花粉特异表达基因Zm STK1编码胞质类受体蛋白激酶。在zmstk1突变体中花粉萌发率降低,影响其授粉结实。前期研究发现,Zm STK1与玉米烯醇化酶1互作,可能通过影响糖酵解途径影响花粉发育,但是Zm STK1作用的分子机制尚不明确。本研究通过I_2-KI染色和透射电子显微镜技术分析野生型与zmstk1突变体花粉中淀粉点击此处和脂质的积累情况,明确Zm STK1在平衡花粉中淀粉和脂质合成的作用;利用实时荧光定量PCR的方法分析淀粉合成关键酶同工酶基因的表达量,明确zmstk1花粉淀粉合成缺陷的产生机理;通过脂质代谢组学分析zmstk1突变体花粉中脂质代谢与野生型的差异。取得了如下结论(1)对Mc C野生型,zmstk1突变体的成熟时期花粉进行I_2-KI染色和超微结构的观察。与野生型相比,zmstk1突变体成熟花粉中淀粉积累减少,且主要缺少直链淀粉的积累。成熟花粉粒透射电镜观察结果表明,zmstk1突变体中淀粉粒的数量显著降低,而油体的数FNB fine-needle biopsy量显著增加。上述结果表明,zmstk1突变体中两种物质的积累存在拮抗关系。(2)对野生型Mc C和zmstk1突变体成熟时期花粉中淀粉合成关键酶同工酶基因的表达量进行实时荧光定量selleck合成PCR分析。分析结果表明:几乎大部分花粉内的淀粉合成关键酶在突变型植株和野生型植株中的区别没有太明显的差距。ADPGPase、SSS、DBE、SBE类同工酶基因的表达量没有显著差异。但是,颗粒结合型淀粉合成酶GBSSI的表达量显著降低,说明GBSSI基因表达量的降低可能是淀粉合成减少的原因。(3)对Mc C野生型和zmstk1突变体花粉样品脂质代谢组学进行分析,结果显示在zmstk1突变体的花粉中差异代谢物富集比例最高的为代谢途径和甘油酯代谢通路。结合zmstk1突变体中油体数量增多的表型,进一步分析了突变体和野生型花粉中甘油酯积累的差异。在甘油酯中1种单酰甘油,5种二酰甘油和43种三酰甘油的积累与野生型相比显著增加。zmstk1突变体败育的主要原因是花粉中缺少直链淀粉的积累,造成淀粉积累减少的原因可能与颗粒型淀粉合成酶GBSSI的活力降低有关,花粉中淀粉和脂质积累的平衡关系异常,甘油酯类的积累显著增加。

目的 探讨补气温阳定狂汤治疗虚阳上浮型Phycosphere microbiota躁狂症的疗效及对认知功能和睡眠质量的影响。方法 选择广州医科大学附属脑科医院于2020年1月至2022年1月住院的躁狂症患者100例，依据随机数selleck Liraglutide字表法分为观察组(n=50)与对照组(n=50)。对照组给予丙戊酸钠缓释片和喹硫平片治疗，观察组在对照组基础上结合补气温阳定狂汤治疗。两组治疗疗程4周。比较两组治疗疗效；治疗前与治疗4周主要症候积分，临床总体印象量表(CGI)评分，匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评RAD001分子量分，可反复测查的成套神经心理状态评估工具(RBANS)评分；不良反应情况。结果 观察组总有效率为90.00%,高于对照组的72.00%(χ~2=5.263,P<0.05)。两组治疗4周狂躁不安、渴不欲饮和肢冷积分低于治疗前(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.01)。两组治疗4周BRMS量表评分、CGI评分、PSQI量表低于治疗前(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.01)。两组治疗4周即刻记忆、空间结构、注意力、言语功能和延迟记忆评分高于治疗前，且观察组高于对照组(P<0.01)。观察组不良反应少于对照组(8.00%vs 26.00%,P<0.05)。结论 补气温阳定狂汤治疗虚阳上浮型躁狂症患者疗效较好，可显著改善患者认知功能和睡眠质量。

背景：纳米复合水凝胶在骨关节炎治疗中有很大的EUS-FNB EUS-guided fine-needle biopsy研究前景和应用潜力。目的：综述纳米复合水凝胶在骨关节炎及软骨修复中的研究进展。方法：检索中国知网和PubMed等数据库，英文检索词为“nanocomposite hydrogel,nanogel,获悉更多osteoarthritis,cartilage,physical encapsulation,electrostatic interaction,covalent crosslinking”，中文检索词为“纳米复合水凝胶，纳米水凝Y-27632体内实验剂量胶，骨关节炎，软骨，物理包覆，物理包载，静电作用，共价交联”。根据纳入与排除标准对所有文章进行初筛后，保留相关性较高的71篇文章进行综述。结果与结论：在细胞或动物实验中，纳米复合水凝胶具有改善骨关节炎的效果。纳米复合水凝胶可以从改善关节间力学环境、搭载靶向药物、促进种子细胞软骨化等方面加速软骨修复，改善骨关节炎症内环境，达到治疗骨关节炎的目的。目前纳米复合水凝胶在骨关节炎疾病中的研究仍有巨大的发挥空间，继续深入材料制备研究，积极开展细胞、动物实验将有望为临床治疗骨关节炎开辟新途径。