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【目的】确定蛹虫草甲羟戊酸途径中的2个关键酶——磷酸甲羟戊酸激酶(CmErg8)和焦磷酸甲羟戊酸脱羧酶(CmErg19)的功能及其对麦角甾醇和虫草素含量的影响。【方法】通过生物selleck抑制剂信息学分析鉴定蛹虫草中CmErg8和CmErg19，并采用酵Hepatoma carcinoma cell母互补确定其功能是否保守；以蛹虫草尿嘧啶营养缺陷型CmΔpyrG为背景菌株，利用农杆菌介导的转化方法对CmErg8和CmErg19进行过表达，观Etoposide察其对麦角甾醇和虫草素含量的影响。【结果】CmErg8和CmErg19不能互补酵母erg8和erg19突变体的温度敏感表型；CmErg8和CmErg19过表达菌株中麦角甾醇和虫草素含量均有所增加，特别是CmErg19基因过表达可以使虫草素含量提升5倍左右。【结论】本研究揭示了蛹虫草CmErg8和CmErg19的功能，并且发现蛹虫草麦角甾醇合成通路基因可能会影响虫草素含量。

前列腺癌(Prostate cancer,PCa)是一种雄激素驱动的疾病,使用新型雄激素受体(androgen receptor,AR)抑制剂联合雄激素剥夺治疗可以获得明显的生存优势。尽管前列腺癌发展早期这种治疗手段能明显缓解病情,但几乎所有患者最终都会出现去势抵抗,对激素疗法产生耐药。多种基因组靶向药物、抗体偶联物和免疫疗法有望在未来改善前列腺癌患者的治疗现状。基因突变和免疫抑制是去势抵抗性前列腺癌(Castration-Resistant Prostate Cancer,CRPC)进展的重要原因。研究表明,约50%CRPC患者的磷酸酯酶与张力蛋白同源物(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)低表达。PTEN缺失可调控AR转录因子、激活PI3K/AKT通路,促进肿瘤生长。此外,炎症因子白介素23(interleukin-23,IL-23)是CRPC发展过程中的重要驱动因子。IL-23能够促进雄激素受体的转录和信号传导,并在维持前列腺癌细胞增殖方面起重要作用,间接促进去势抵抗性前列腺癌的发展。基于以上问题,Rapamycin采购本研究拟从基因治疗和免疫治疗两个方面考虑,制备递送效率良好的脂质纳米粒(Lipid nanoparticles,LNP)用于PTEN质粒的递送,以恢复PTEN的抑癌功能,同时使用IL-23抑制剂Apilimod阻断IL-23在CRPC进展中的驱动作用,二者协同发挥抗肿瘤作用,抑制CRPC的进展和转移。本研究构建了载PTEN质粒的脂质纳米粒(简称LNP@PTEN)并将其与IL-23抑制剂Apilimod组成联合治疗体系,以期从基因治疗和免疫治疗两个方面入手,延缓CRPC的发展进程,提高抗肿瘤疗效。本课题主要分为三个章节,第一章是脂质纳米粒的构建及表征。本章节我们通过迈克尔加成反应合成了脂质纳米粒的重要组成部分——阳离子脂质246C10。我们使用246C10、DSPC、β-谷甾醇和PEG_(2K)-DMG,通过自组装形成空白脂质纳米粒(简称LNP-Blank)。LNP-Blank为正电性纳米粒,可以与带负电的PTEN质粒通过静电吸附作用形成复合物LNP@PTEN。随后我们对所制备的脂质纳米粒进行了表征。空载的LNP-Blank粒径为(129.55±2.35)nm,Zeta电位为(29.7±1.4)m V。加入质粒形成LNP@PTEN后粒径增加至(131.8±3.1)nm,Zeta电位为(-2.35±0.75)m V。使用透射电子显微镜(Trbiotic elicitationansmission Electron Microscope,TEM)观察脂质纳米粒形态,LNP-Blank和LNP@PTEN均为类球形,且载PTEN质粒前后纳米粒形态没有出现明显变化。纳米粒可在20天内保持稳定,并通过琼脂糖电泳证明了脂质纳米粒对PTEN质粒的包载能力。第二章是联合治疗体系的体外研究,在细胞水平研究脂质纳米粒和抑制剂联合治疗体系的体外特征。首先对脂质纳米载体的毒性进行了考察,使用200μg/m L的LNP-Blank处理后的细胞活力良好,且细胞毒性远低于Lipo8000。流式细胞检测仪检测RM-1细胞对脂质纳米粒的摄取情况,并采用激光共聚焦检测摄取后的荧光分布。脂质纳米粒被RM-1细胞成功摄取,EGFP质粒表达的绿色荧光蛋白在细胞质中被观察到。使用EGFP质粒代替PTEN质粒进行核酸转染实验,通过设置不同的LNP/EGFP质粒质量比,确定了当质量比为7时,脂质纳米粒的转染效果最好。LNP@EGFP在拥有比Lipo8000更好的转染效率的同时显示出较Lipo8000更低的细胞死亡率。最后,对联合药物治疗体系的体外抗侵袭转移能力进行了考察。Apilimod组和LNP@PTEN组均表现出一定的抗侵袭转移效果,且二者表现出协同作用,联合治疗组具有较单药组更强的抗侵袭转移能力。第三章是联合治疗体系的抗去势抵抗性前列腺癌体内研究,对治疗体系的体内安全性、抗肿瘤效果等方面进行了考察。构建了C57BL/6J小鼠CRPC骨转移动物模型。采用小动物活体成像技术记录24 h内的药物体内分布情况,检测到LNP@DIR在肿瘤部位出现明显的荧光聚集。对Apilimod+LNP@PTEN的体内抑瘤作用进行考察,通过肿瘤体积生长变化情况、小鼠生存期等评价了联合治疗体系的抗肿瘤作用,证实了联合治疗具有协同作用,能够明显缓解肿瘤进展,延长小鼠生存期。另外,从组织切片HE染色、血生化指标检测等方面证明了联合治疗体系有良好的生物安全性。对Apilimod+LNP@PTEN的免疫调节机制进行了考察,结果显示联合治疗提高了CD8~+/CD4~+T的比例、减少了抑制性免疫细胞MDSCs的比例。最后,通过微计算机断层扫描技术(Micro computed tomography,Nirogacestat临床试验Micro CT)分析证实了PTEN质粒和IL-23抑制剂Apilimod的联合治疗对骨代谢的保护作用。本研究构建了脂质纳米粒LNP@PTEN,并将其与IL-23抑制剂Apilimod联合用于CRPC治疗。该脂质纳米粒可以利用EPR效应聚集于肿瘤部位,将PTEN质粒运送至肿瘤部位并释放在肿瘤细胞内,恢复PTEN的抑瘤功能。LNP@PTEN与Apilimod的联合使用可以从基因治疗与免疫治疗两方面协同治疗CRPC,抑制其进展和转移。本研究验证了两种药物具有良好的协同治疗效果,与单一用药相比显示出更加明显的肿瘤抑制作用。因此,这项研究可以为CRPC的治疗提供新策略。

目的:本研究通过基因编辑技术构建B细胞缺失小鼠模型(hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO mice),并通过体内及体外实验对构建的小鼠模型进行验证,以期建立不发生大分子生物药免疫原性的动物模型,为抗体类药物候选分子的筛选及临床前的药效评价研究等提供高效合理的动物模型。方法:1.采用基因编辑技术构建Bcancer – see oncology细胞selleckchem RSL3缺失小鼠模型。2.采用PCR法检测子代小鼠基因型,以确定子代小鼠是否为目标小鼠;采用流式细胞术分析小鼠脾、骨髓细胞中Ig M及Ig D蛋白表达情况,以确定构建的小鼠体内B细胞是否缺失。3.采用流式细胞术分析小鼠脾、外周血及淋巴结中白细胞亚群及T细胞亚群变化情况,以评估B细胞缺失对小鼠各淋巴细胞亚群分布的影响。4.通过流式细胞仪分析hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠的脾脏和外周血中的颗粒酶B、γ干扰素和增殖指数Ki-67的水平,以评估hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠是否影响小鼠体内的NK细胞及T细胞的增殖与激活。5.建立MC38结肠癌小鼠模型,采用腹腔注射的给药方式,分别给hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO荷瘤小鼠以及B细胞功能正常的hPD-1/hPD-L1荷瘤小鼠腹腔注射M7824,观察两种小鼠肿瘤体积及体重的变化情况。6.采用Elisa法检测小鼠血清中M7824类似物和抗M7824类似物抗体水平,以评估B细胞缺失小鼠是否能避免M7824的免疫原性影响,同时显示出M7824的抗肿瘤效应。结果:1.PCR结果显示:与野生型C57BL/6小鼠相比,hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠中仅能检测到人PD-1、人PD-L1以及Igh-J,鼠PD-1及鼠PD-L1检测不到。2.流式细胞术结果显示:(1)野生型C57BL/6小鼠可检测到小鼠Ig M和Ig D,但在hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠中检测不到。(2)野生型C57BL/6小鼠仅可检测到鼠PD-1,hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠中仅可检测到人PD-1。(3)野生型C57BL/6小鼠仅可检测到鼠PD-L1,hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠中仅可检测到人PD-L1。3.流式细胞术结果显示:(1)脾脏白细胞亚群分析发现,hPD-1/hPD-L1,IghJ KO小鼠B细胞发育失败,导致该小鼠B细胞缺失,T细胞、粒性白细胞和单核细胞所占比例显著增加(P(27)0.001),其他细胞如树突状细胞、巨噬细胞等由于细胞含量较少,未检测到细胞比例变化情况。(2)脾脏T细胞亚群分析发现,hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠的CD8+T细胞百分率、CD4+T细胞百分率、调节性T细胞百分率与C57BL/6小鼠相似,未有明显改变。(3)在淋巴结和血液中得到类似的结果。4.流式细胞术结果显示:(1)与未接受聚肌苷酸胞苷酸的小鼠相比,经聚肌苷酸胞苷酸刺激后的hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠及hPD-1/hPD-L1小鼠中,其外周血及脾细胞中NK细胞分泌的颗粒酶B以及γ干扰素水平显著升高(P(27)0.01)。(2)与未接受抗CD3ε抗体刺激的小鼠相比,经抗CD3ε抗体刺激后的hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO小鼠及hPD-1/hPD-L1小鼠中,其脾细胞中CD4+T细胞及CD8+T细胞分泌的颗粒酶B、γ干扰素及Ki-67水平显著升高(P<0.01)。5.体内药效实验结果显示:(1)相同给药条件下,与B细胞功能正常的hPD-1/hPD-L1荷瘤小鼠相比,M7824在hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO荷瘤小鼠中显示出显著的抗肿瘤效果(TGI=69.2%),而M7824在hPD-1/hPD-L1荷瘤小鼠上未显示出抗肿瘤效果。(2)与对照组相比,hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO荷瘤小鼠在给药前后体重变化与B细胞功能正常的hPD-1/hPD-L1荷瘤小鼠保持一致,无明显差异。6.体外检测结果显示:(1)在hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO荷瘤小鼠中,能够检测到血清M7824类似物,且血药浓度随着给药次数增加而增加,同时小RP56976采购鼠血清中未检测到抗M7824类似物抗体。(2)hPD-1/hPD-L1荷瘤小鼠在给药第10天后,不能检测到血清M7824类似物,且所有小鼠血清在第6天均能够检测到抗M7824类似物抗体。结论:1.B细胞缺失小鼠(hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO mice)可用作肿瘤免疫药物的有效筛选动物模型,其保留了用于免疫治疗评估的重要免疫细胞类型,同时不会对抗药物抗体产生过敏反应。2.B细胞缺失小鼠(hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO mice)仅B细胞缺失,而小鼠体内的NK细胞及T细胞的增殖和激活未受到影响,因此该小鼠模型可用于NK细胞及T细胞相关的免疫疗法的研究。3.B细胞缺失小鼠(hPD-1/hPD-L1,Igh-J KO mice)模型可以有效降低甚至避免免疫原性的产生,可为抗体药物的筛选及药效评价等研究提供帮助。

目的：探究益补胃宝汤联合质子泵抑制剂(PPI)治疗幽门螺杆菌(Hp)阳性慢性胃溃疡(GU)的效果。方法：选取2017年1月—2022年12月本院收治的65例Hp阳性GU患者，采用随机数字表法将其分为两组，对照组(33例)采用PPI治疗，观察组(32例)采用PPI联合益补胃宝汤进行治疗。intestinal immune system连续治疗4周后，评估两组患者临床疗效及中医症状评分，检测患者治疗前后胃蛋白酶原(PG)水平，并比较两组治疗方法的安全性。结果：观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后两组中医症状评分(主症、次症及总评分)均降低，且观察组均低于对照组(P<0.05);治疗后两组PGⅠ水平升高，PGⅡ水平降低，且观察组PGⅠ水平高于对照组，PGⅡ水平低于对照组(P<0.05);两组不良反应总发生selleck LY-188011率比较差异无统计学意义(P>0.购买Pevonedistat05)。结论：益补胃宝汤联合PPI能够提高Hp阳性GU患者的疗效，改善中医症状及PG水平，且用药安全性良好。

目的 探讨应用改良式密闭回血法对降低维持性血液透析患者动静脉内瘘血栓形成风险的作用。方法 选取2021年11selleck Pidnarulex月—2022年10月接受规律性血液透析患者50例为研究对象。2021年11月—2022年4月采用传统密闭式双向回血法为对照组，2022年5月—2022年10月采用改良式密闭回血法为改良组，比较2组患者下机后的血压、下机内瘘穿刺点按压时间、内瘘渗血率、血栓发生率、透析器内红细胞的残余量、回血总时间、回血生理盐水量。结果 改良组下机回血量、overwhelming post-splenectomy infection下机回血时间、下机后血压、下机内瘘穿刺点按压时间、内瘘渗血率、下机回血的生理盐水量、内瘘血栓发生率、血液透析管路残余红细胞数均少于或低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05更多)。结论 改良式密闭回血法可以缩短下机回血的时间，减少0.9%氯化钠溶液的需要量，降低了内瘘渗血率，缩短内瘘下机按压时间，减少下机后血液透析管路里红细胞的残余，等量生理盐水回血的同时充分降低了内瘘局部的血液黏滞度。

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型，ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中Autoimmune retinopathyIL-6的含量。体外培养MH-S细胞，在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下，再加入IL-6(10 ng/mL～500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后，采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况；Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后，小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加，MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强，Arp2、 FZ-IETD-FMK使用方法–TGF-beta/Smad抑制剂actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后，p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后，IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失，IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。

十字花科根肿病是一种世界性的土传病害,也是影响大白菜产量和品质的主要病害之一。该病造成严重的经济损失,并且被根肿菌污染的土壤会持续对十字花科作物造成危害。因此利用分子生物学技术探究根肿病的发病机制,培育抗性品种尤为重要。本研究通过对大白菜‘CRBJN3-2’分别接种根肿菌Pb1(抗性)和Pb4(敏感),对接种后8,23和37 d的根组织进行代谢组和转录组测序,分析大白菜在不同根肿菌胁迫下代谢物和基因的动态变化,解析大白菜响应根肿菌胁迫的核心代谢途径和关键基因功能验证。探究核心途径中葫芦巴碱及其合成基因Br NANMT的新功能,并筛选Br NANMT互作蛋白。为根肿病抗性育种提供了理论基础,也为十字花科抗根肿病研究提供了新方向。主要研究结果如下:1.基于广靶代谢组共检测到Etoposide346种已知注释代谢更多物,差异最显著的是次级代谢产物生物碱。抗病组中核苷酸及其衍生物、脂类、生物碱、类黄酮等,感病组中氨基酸及其衍生物,维生素类物质显著增加。根肿菌侵染初期抗病组中类黄酮(五羟黄酮衍生物和丁香亭-3-O-葡萄糖甙)和感病组中生物碱(葫芦巴碱)显著增加。2.接种8 d,抗病组中共thyroid cytopathology检测到1,358个基因上调和1,290个基因下调。接种23 d差异基因数量最大(6248个基因),其次是37 d(2989个基因)。差异基因KEGG富集分析发现植物激素信号转导,MAPK信号通路,氧化磷酸化,氨基糖和核苷酸糖代谢,糖酵解/糖异生,半胱氨酸和甲硫氨酸代谢,淀粉和蔗糖代谢,苯丙烷生物合成和甘油磷脂代谢显著富集。参与细胞分裂素介导的信号转导B型ARRs在所有三个感染阶段的抗病组中均高度表达。对差异基因进行WGCNA分析,确定根肿病抗性枢纽基因SNC1、FLA2、ABCG33和BGLU32,敏感枢纽基因ABCE1、GIP、CRK18、EXT2和TIF211。3.基于代谢组-转录组联合分析,确定了三条大白菜响应根肿菌胁迫的核心代谢途径,包括烟酸烟酰胺、酚胺和类黄酮途径。4.外源葫芦巴碱显著提高拟南芥的发病率及发病指数。拟南芥异源过表达Br NANMT株系内源葫芦巴碱含量显著上升,其发病率及发病指数显著增加;nanmt突变体几乎不能合成葫芦巴碱,根肿病发病延迟,发病率和发病指数降低。5.大白菜外源施用葫芦巴碱显著提高了根肿病的发病率及发病指数。大白菜过表达Br NANMT植株发病等级显著增加,基因编辑植株根瘤明显减小。6.酵母双杂交筛选到与Br NANMT互作的60个蛋白,其中互作频率最高的线粒体外膜蛋白孔蛋白2(VDAC2),经酵母共转化验证确定Br NANMT与VDAC2蛋白在体外存在互作关系。

声动力治疗(SDT)作点击此处为新兴的肿瘤治疗方式,以超声刺激为基础,搭载声敏剂,通过超声照射,触发内在机制使得肿瘤细胞凋亡。与传统治疗方式相比,SDT以其穿透力强、能达到深部组织、无创伤性、治疗效果好等优点,受到广大科学家的青睐。然而,以往的研究也揭示其存在一定的局限性。如:大部分声敏剂水溶性较差、单线态氧量子产率不高、无法找到合Navitoclax IC50适的载体来运输、难以改变肿瘤部位的乏氧状态,无法达到较好的治疗效果。研究人员在提纯碳纳米管的时候,在提取工作中发现了这一种全新的荧光纳米材料,即碳点(CDs)。随着深入研究,人们发现CDs可以作为一种优良的纳米载体,并且其可以增加搭载药物的稳定性,也能增加药物在肿瘤部位的富集。结合以上所述的局限性,本论文设计开发了一种多功能纳米平台(KO@CD-Pp IX、CD-Pp IX),选择了较为稳定和单线态氧产率较高的原卟啉(Pp IX)作为声敏剂,以碳点作为载体,将声敏剂接枝到载体之上,作为超声触发的控制开关,并且负载产氧剂过氧化钾。超声照射后,CD-Pp IX、KO@CD-Pp IX上接枝的声敏剂被激活,产生单线态氧来氧化细胞损伤,同时产氧剂释放氧气,改善肿瘤微环境的乏氧状态,从而提高声动力的治疗效果。本文的主要研究结果如下:(1)采用水热法成功制备了CDs,同时通过酰胺反应接枝声敏剂Pp IX,成功负载过氧化物产氧剂,旨在改善肿瘤微环境的乏氧状态。利用TEM、AFM、荧光分光光度计对CDs-Pp IX、KO@CDs-Pp IX进行一系列表征,发现所制备的纳米平台具有优异的荧光性能和超声响应性能。(2)采用CCK-8来评价CD-Pp IX、KO@CD-Pp IX的细胞毒性,研究发现经过处理的H22细胞依然保持65%以上的存活率,证明所设计的纳米药物载体对组织和器官没有明显的毒性。(3)构建小鼠模型来评价CD-Pp IX、KO@CD-Pp IX的生物相容性,研究发现其各项血液指标都在正常范围值内,重要器官的组织切bioactive molecules片也未见任何异常情况,表现出较为优异的生物安全性。(4)采用H22肝癌细胞构建小鼠肿瘤模型,进行15天的治疗评价期,研究发现同其他对照组相比,材料联合超声治疗组(CD-Pp IX+US、KO@CD-Pp IX+US)的肿瘤体积最小,具备较为优异的治疗效果。

目的:对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)因其镇痛和解热特性成为临床上解热镇痛最常用的药物之一,其在推荐剂量下是安全有效的,而过量使用可能导致肝毒性和急性肝功能衰竭(Acute liver failure,ALF)。n-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC),一种已知的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)清除剂,被美国食品和药物管理局推荐作为唯一一种有效的临床治疗APAP诱导的急性肝损伤的药物;然而这种药物有明显的局限性,副作用明显、治疗窗口狭窄。因此,需要开发在有效性和治疗时间框架方面优于NAC的新药。大量研究表明,APAP诱导的肝细胞坏死常伴有炎症,人参皂苷Rc(Ginsenoside Rc)作为人参中最具代表性的特异性生物标志物之一,具有良好的抗氧化应激、抗炎症、神经保护及调节糖脂代谢和护肝等生物活性作用,但对于对乙酰氨基酚过量导致急性肝损伤的治疗作用尚不明晰。因此本研究以肝脏代谢调控的关键靶点FXR(Farnesoid X Receptor)核受体为基础,进一步研究对乙酰氨基酚诱导的急性肝细胞损伤、氧化应激和炎症反应,以及FXR对APAP诱导的急性肝损伤的保护作用。方法:1.WT(Wild Type)小鼠及原代肝细胞验证人参皂苷Rc对于APAP诱导肝损伤分子作用机制在C57BL/6的小鼠原代肝细胞以及小鼠体内体外建立APAP急性肝损伤模型并且给药。小鼠肝脏原代肝细胞分为5组(n=4):Control组、模型组(APAP)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 50μM)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 25μM)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 12.5μM)组,各给药组及损伤模型组分别加入10m M APAP,空白对照组加入等体积DMSO溶媒,诱导24h。小鼠模型通过选取SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(n=8),包括正常对照组、APAP(300mg/kg)肝损伤造模型组、APAP(300mg/kg)+Rc低剂量组(5mg/kg/d)、APAP(300mg/kg)+Rc高剂量组(10mg/kg/d)。各组按照剂量给予人参皂苷Rc腹腔注射给药,正常对照组给予等体积生理盐水。连续给药10d,每天1次。配置浓度为30mg/ml的APAP标准注射液,用l ml注射器迅速吸取标准液注射小鼠腹腔,除正常对照组外,其余各组小鼠腹腔注射APAP(300mg/kg)诱发小鼠急性肝损伤。对照组按照体重给予等容量的生理盐水。用q PCR、Western Blotting、ELISA和免疫荧光等方法检测肝细胞中和APAP代谢、凋亡、氧化、炎症等相关基因的表达变化,试剂盒检测肝细胞/肝脏中ALT、AST等肝损指标,HE染色检测肝组织形态中的变化情况,以TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,GSH和SOD试剂盒检测小鼠肝脏抗氧化的表达情况。2.探讨FXR(Nrlh4)敲除小鼠及原代肝细胞验证Rc对于APAP诱导肝损伤作用机制利用分子对接验证人参皂苷Rc是否能和FXR对接,在FXR~(-/-)小鼠原代肝细胞以及FXR~(-/-)小鼠上建立APAP急性肝损伤模型并且给药Medical countermeasures。FXR~(-/-)小鼠肝脏原代肝细胞分为3组(n=4):Control组、模型组(APAP)、人参皂苷Rc+APAP组(Rc 50μM),各给药组及损伤模型组分别加入10m M APAP,空白对照组加入等体积DMSO溶媒,诱导24h后,进行下一步实验。FXR基因敲除小鼠随机分为3组(n=8),包括正常对照组、APAP(300mg/kg)肝损伤造模型组、APAP(300mg/kg)+Rc组(10mg/kg/d)。各组按照剂量给予人参皂苷Rc腹腔注射给药,正常对照组给予等体积生理盐水。连续给药10d,每天1次。配置浓度为30mg/ml的APAP标准注射液,用l ml注射器迅速吸取标准液注射小鼠腹腔,除正常对照组外,其余各组小鼠腹腔注射APAP(300mg/kg)诱发小鼠急性肝损伤。对照组按照体重给予等容量的生理盐水。用qPCR、Western Blotting、ELISA和免疫荧光等方法检测肝细胞/肝脏中和APAP代谢、凋亡、氧化、炎症等相关基因的表达变化,试剂盒检测肝细胞中ALT、AST等肝损指标,HE染色检测肝组织形态中的变化情况,以TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,GSH和SOD试剂盒检测小鼠肝脏抗氧化的表达情况。比较各组间差异并进一步验证Rc肝保护作用PLX5622分子量通路。结果:1.小鼠肝脏原代细胞中,人参皂苷Rc处AZD1152-HQPA理有效地改善了APAP诱导的炎症和ROS的产生,缓解了APAP诱导的小鼠肝脏原代细胞MPHs细胞凋亡和NAPQI的积累。Western blotting结果显示APAP模型组中,细胞凋亡基因Bcl2/Bax m RNA相对表达水平是上调的,人参皂苷Rc处理可以逆转Bcl2/Bax m RNA相对表达水平。人参皂苷Rc处理后TUNEL染色比较损伤模型组红色荧光标记阳性凋亡细胞数量明显减少。2.在APAP急性肝损伤模型的小鼠中,人参皂苷Rc的给药明显减弱了肝脏毒性,表现为给药组小鼠存活率的提高和肝脏功能障碍的修复。(1)ALT、AST试剂盒结果显示人参皂苷Rc给药后血清ALT和AST水平显著降低,肝脏损伤程度显著降低。(2)HE染色显示,人参皂苷Rc给药后肝脏坏死区域明显减少,明显改善了肝细胞的凋亡。(3)GSH试剂盒显示Rc处理增强了GSH血清水平的表达,m RNA显示增强了抗氧化基因的表达。3.人参皂苷Rc可以上调WT小鼠肝脏原代细胞以及WT小鼠中FXR的m RNA表达;结合分子对接以及KEGG结果表明,人参皂苷Rc可能通过介导FXR蛋白来发挥相关作用。FXR敲除后,人参皂苷Rc对于APAP诱导的炎症反应、细胞凋亡及氧化应激失去保护作用;人参皂苷对FXR~(-/-)MPHs细胞失去抗炎抗氧化的调控作用。结论:从人参中分离得到的化合物人参皂苷Rc可以改善APAP诱导小鼠肝脏及其原代细胞的细胞凋亡,并改善其氧化应激状态,减轻炎症。同时,人参皂苷Rc通过FXR核受体激活依赖性地发挥对APAP诱导肝损伤的保护作用。人参皂苷Rc对肝脏的保护作用因FXR的敲除而失去作用,推测人参皂苷Rc可能是通过介导FXR来发挥上述作用。

抗精神病药物诱发癫痫发作(epileptic seizure)是临床应用过程中需关注的问题。现有证据显示，第1代抗精神病药物诱发癫痫发作的风险较低，但氯丙嗪(cBMS-907351半抑制浓度hlorpromazine)除外；第确认细节2代抗精神病药物中氯氮平(clozapine)诱发癫痫发作的风险最高，而奥氮平(olanzapine)、利培酮(risperidone)、喹硫平(quetiapine)、齐拉西酮(ziprasidone)及阿立哌唑(aripiprazole)风险较低。多种因素会影响抗精神病药物诱发癫痫发作的阈值，例如癫痫发作史、同时服用其他降低发作阈值的药物、合并其他慢性疾病(如器质性脑部疾病)、个体易感性及年龄等，其中抗精神病药物血药浓度与癫痫发作次数的增加关系最为密切。为减少癫痫发作，抗精神病药物起始治疗阶段应从小剂量开始缓慢滴定，监测血药浓度，并保持在最低有效剂量。服用抗精神病药物期间可伴随脑电图改变，但脑电图异常率与癫痫发作风险关系并不明确。虽然大量证据表明抗精神病药物可降低癫痫发作阈值，但Anthocyanin biosynthesis genes部分抗精神病药也可以发挥抗癫痫作用。该文对既往探讨抗精神病药物与癫痫发作相关文献作简要综述。