研究背景:在全球癌症相关死亡中,肺癌是最常见的原因之一。其中非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)在所有肺癌病例中约占比85%。人脱嘌呤/嘧啶内切酶1(Apurinic endonuclease 1/redox factor-1,APEX1/Ref-1)是在DNA修复和转录因子的氧化还原调节中具有双重功能的分子。它在肿瘤的发生和进展中的重要性亦引发了非常多的研究和关注;然而,APEX1在NSCLC中的调控机制尚不完全清楚。小分子RNA是APEX1相当重要的转录后调控机制之一,到目前为止,人类基因组编码超过两千种微小RNA,它们调节着基因组中约三分AZD6738溶解度之一的基因。然而,在NSCLC中APEX1的临Molecular phylogenetics床意义、上下游调控机制及在肺癌进展中的作用尚不明确。研究目的:探究hsa-miR-338-3p/APEX1在NSCLC发生发展中的作用、作用机理及其对人NSCLC细胞的生物学影响,为肺癌的早期诊断和治NSC125066作用疗提供新的理论基础和实验支持。方法:通过生物信息学的方法分析APEX1的表达谱及其诊断价值、预后价值。利用高通量筛选出其上游调控小分子RNA,并分析APEX1与Wnt/β-catenin通路下游相关基因表达的关系;通过免疫组织化学检测肺癌石蜡组织中各分子的水平以及检测小鼠异种移植瘤瘤体的各分子的水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)用于检测肺癌患者手术后样品及模型鼠肿瘤组织中APEX1和细胞增殖、侵袭、凋亡相关分子:KI-67、PCNA、MMP-1、Caspase-3的蛋白表达,及各种细胞模型中APEX1分子对Wnt/β-catenin信号分子的调控作用;利用荧光定量PCR(RT-q PCR)研究hsa-miR-338-3p、APEX1对Wnt/β-catenin途径中癌基因的表达调控;APEX1及Wnt信号分子的胞内定位及改变探索采用免疫荧光法;Transwell小室试验验证APEX1对NSCLC细胞侵袭迁移的作用;CCK-8和Edu实验用于研究APEX1对NSCLC细胞的增殖影响;流式细胞学研究APEX1在NSCLC细胞凋亡中的作用;8×GTIIC荧光素酶报告基因(Dual-Luciferase Reporter)系统、RT-q PCR证实hsa-miR-338-3p、APEX1的直接结合关系;细胞系来源的移植瘤小鼠实验用于验证APEX1在NSCLC中的生物学功能。结果:利…