氟喹诺酮类药物是一类细菌感染性疾病的治疗药物,有强抗菌能力、高效率、低成本、低交叉耐药性、结构简单、组织通透性强等特点。然而,在生产养殖过程中超量、超范围的使用,会导致某些致病菌产生耐药性、治疗效果也大幅降低。同时残留的氟喹诺酮对人体的中枢神经系统和肝肾器官也有一定的危害和毒性,因此需要建立快速、灵敏的检测方法。本试验制备单克隆抗体和胶体金免疫层析试纸条,建立了一种针对动物源性食品中残留二氟沙星快速检测的方法。(1)将二氟沙星与蛋白结lipid mediator合成人工抗原,测定可知免疫抗原、包被抗原浓度分别为2.5 mg·m L~(-1)、PLX-4720化学结构1.8 mg·m L~(-1)。采用腹部给药的方式对小鼠进行免疫,通过血清筛选,最终选择血清效价较高的4号小鼠,取其脾脏进行细胞融合。(2)提前培养骨髓瘤细胞、小鼠巨噬细胞,确证细胞融合能顺利进行。骨髓瘤细胞SP2/0与小鼠脾细胞以1:5的比例融合培养后,经过初筛得到30个阳性孔,复筛后选择了4株克隆细胞进入亚克隆阶段,最终选择杂交瘤细胞购买STM2457株4A11-G2-C12-A10注入小鼠体内进行腹水的制备。(3)利用胶体金作为信号输出载体制备免疫层析试纸条。通过肉眼观察和透射电子显微镜对胶体金进行观察判断,确定胶体金与抗体结合最佳条件。对已制成二氟沙星胶体金试纸条进行灵敏度、交叉反应、稳定性、样品加标试验,表明试纸条灵敏稳定,可用于牛奶中残留二氟沙星的检测。综上所述,本研究建立了一种可以检测牛奶中残留二氟沙星的方法,可应用于奶产品的快速检测。本方法应用前景广阔,有望应用于其它食品现场筛查。