戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染是一种与公共卫生密切相关的世界性疾病,除了人之外已经报道在多种动物发生感染。禽戊型肝炎病毒(Avian Hepatitis E virus,aHEV)被认为是引发鸡大肝大脾病(Big liver and spleen disease,BLS)或肝炎脾大综合症(Hepatitis-Splenomegaly,HS)的主要病原,给家禽养殖业造成巨大的经济损失。目前,全世界范围内已经报道了多种不同基因型的aHEV,流行病学调查显示近年来aHEV在我国已经广泛存在。由于缺乏有效的HEV体外培养NN2211体内系统,导致HEV生命周期背后的分子机制尚不清楚。本研究首次从自然界中分离到一株细胞适应性aHEV(YT-aHEV),围绕病毒体外感染特性和体内致病性两个方向展开研究,包括aHEV在LMH细胞中的复制规律、对SPF鸡的致病性,感染宿主和宿主细胞后引发炎症反应的情况。本研究主要分为以下三部分:1、首次利用体外培养系统分离到一株aHEV山东省更多某白羽肉鸡群病死鸡剖检观察到肝脏肿大和出血现象,采集肝脏进行检测。RT-PCR结果显示为aHEV核酸阳性。利用LMH细胞进行病毒分离,结合间接免疫荧光分析,表明从该肝脏中分离得到一株aHEV,命名为YT-aHEV(YT株)。为进一步确认病毒分离结果,将YT株接种LMH细胞,经过扩增、浓缩与纯化后利用透射电镜拍摄病毒粒子,电镜观察病毒粒子符合典型的aHEV特征。进一步通过引物扩增测序与拼接后获得了YT株全基因组序列,同源性比较与遗传进化分析结果显示YT株与Gen Bank中已知的所有基因型aHEV的全基因组序列同源性为81.4～97.4%,其中与CaHEV株的同源性最高(97.4%)且两者处于进化树同一分支,属于aHEV基因3型。综上,Cytogenetics and Molecular Genetics本研究利用LMH细胞分离鉴定到一株aHEV,为开展该病毒致病性与致病机制研究奠定了基础。2、YT株体外感染特性与体内致病性研究为了进一步确定YT株在体外感染的生物学特征,该研究首先评估了YT株感染对LMH细胞的影响。结果显示YT株感染未造成明显细胞病变,未显著影响细胞活性和细胞增殖等。关于细胞上清中病毒和细胞内病毒在感染后的特定时间内的产生情况:细胞内病毒RNA拷贝数在感染后前4 d增加,第4 d达到高峰并开始下降。细胞上清中病毒RNA拷贝数则在感染后6 d内持续上升。使用TCID_(50)的方法测定的连续十个代…