研究背景与目的:外泌体（Exosomes,Exo）是细胞膜向外释放的杯状脂双层膜小泡（直径30-150nm）,广泛存在于各种体液及细胞培养液中。因此,从血液中检测到不TEMPO-mediated oxidation同癌细胞的外泌体对肿瘤的筛查、诊断及治疗有着重要作用。目前,外泌体的检测主要基于外泌体特异性蛋白及免疫亲和原理,抗原抗体相互作用特异性强,但是,抗体制造成本较高,且对储藏要求高,仍需寻找准确度高、可靠、可用于临床应用的抗体替代品。适配体（Aptamer）是经体外筛选技术-指数富集的配体系统进化技术（Systematic Evolution of Ligands by EXponential Enrichment,SELEX）筛选获得的寡核苷酸单链,尺寸较小为30-100 bp（6-26 k Da）。近年来,由于适配体易合成、易储存,低成本及高稳定性的特性且可被多种分子（如荧光染料、酶）进行标记,已被广泛应用于生物传感器领域,用来检测小分子物质、细胞以及外泌体。随着适配体研究的发展,适配GSK126生产商体筛选方法逐渐成熟,尤其结合新型纳米材料发展的筛选技术不仅大大缩短了筛选周期,还提高了适配体的特异性。氧化石墨烯（Graphene oxide,GO）具有极强的距离依赖性荧光淬灭能力,可以通过π-π电子堆积相互作用与单链DNA、RNA连接。GO具有很高的筛选效率,能够简单而清晰地区分selleckchem未结合的和与目标结合的ss DNA。为实现可视化的基于GO的外泌体的适配体筛选程序,本研究通过GO-SELEX筛选方法,以非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC）A549细胞外泌体为靶标,筛选获得能特异识别外泌体的适配体,分析其特异性和亲和力并阐明新型DNA适配体的空间结构。为构建新型的生物传感器提供理论依据,为肺癌液体活检和早期诊断提供技术支撑。材料与方法:（1）NSCLC A549细胞外泌体的分离提取及鉴定本实验中,采用本实验室非小细胞肺癌细胞A549作为制备外泌体的来源。以人乳腺癌细胞MCF-7的外泌体作为负筛选的靶标,制备两种细胞系的外泌体。细胞培养方法严格按照ATCC操作指南,当细胞生长到约50%的覆盖率时,吸去上清液,用1×PBS冲洗两次,加入无血清的培养基培养48 h,然后收集细胞上清液,分别采用超速离心法以及结合超速离心法（Ultracentrifugation,Ult）与试剂盒(Exo Quick TM)的方法（…