miR-26a-5p对H2O2诱导的EA.hy926血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨miR-26a-5p对过氧化氢(H2O2BI 10773抑制剂)诱导的EA.hy926内皮细胞焦亡和血栓因子(TF)的影响及其机制。方法 MTT法检测不同浓度H2O2(0,100,300,4Flow Antibodies00,450,500,700μmol/L)刺激EA.hy926内皮细胞后的存活率。为了研究H2O2对EA.hy926内皮细胞的影响,分为control组(0μmol/L H2O2)和450μmol/L H2O2组;为了研究miR-26a-5p对过氧化氢(H2O2)诱导的EA.hy926内皮细胞损伤的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系,分为miR-26a-5p mimic+H2O2组,mimic NC+H2O2组,miR-26a-5p inhibitor+H2O2组,inhibitor NC+H2O2组。使用流式细胞术检测活性氧水平(ROS),Western blot检测焦亡关键物Caspase-1蛋白水平和血栓指标TF以及PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测焦亡指标Caspase-1、IL-18、IL-1β和血栓指标TF的mRNA水平。为了检测miR-26a-5p转染效率,分别转染带Fam荧光的mimic NC,miR-26a-5p mimic, inhibitor NC,miR-26a-5p inhibitor后,荧光显微镜下观察Fam荧光分布情况,RT-qPCR检测转染后miR-26a-5p mRNA表达情况。结果 MTT结果显示随着H2O2浓度升高,EA.hy926内皮细胞存活率呈下降趋势(P<0.05)。与control组相比,450μmol/L H2O2ZD1839试剂组ROS水平、Caspase-1、TF蛋白表达增加(P<0.05),Caspase-1、TF、IL...