iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤

背景与目的:随着全球经济的发展以及人类饮食结构的改变,代谢性疾病的发生越来越常见并且严重危害人类健康。糖尿病(DM)的患病率迅速攀升,据统计2021年世界糖尿病确诊人数已达到5.37亿,国际糖尿病联盟(IDF)推测到2045年,糖尿病患者人数将达到新一高峰,突破7.83亿。糖尿病肾病(DN)是糖尿病的主要并发症之一,并已成为全世界终末期肾脏疾病(ESRD)的主要病因。DN作为一种典型的微血管并发症,临床上常表现为肾小球滤过率下降以及大量蛋白尿。既往大多数研究将肾小球作为糖尿病肾病发病机制的研究热点,但最近相关研究发现,肾小管损伤加速了DN的发展进程。由此可见探究肾小管上皮细胞的受损机diABZI STING agonist细胞培养制对于DN的治疗有重要意义。铁死亡是一种铁依赖的细胞程序性死亡方式,在细胞死亡过程中伴随大量活性氧堆积和脂质过氧化。铁死MRTX1133溶解度亡是许多病理过程中不可或缺的参与者,包括癌症、神经系统疾病、缺血再灌注损伤等。由此可见,深入探究调控铁死亡的具体机制,并且以此为突破口治疗相关疾病显得尤为重要。钙离子非依赖型磷脂酶A2β(i PLA2β)是一种新发现的铁死亡调节因子,能够参与膜磷脂的代谢,保护各种细胞免受氧化应激损伤。越来越多的研究表明铁死亡在DN的发生发展中发挥重要作用。本课题旨在探究i PLA2β在高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达,观察i PLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用,观察i PLA2β对高糖诱导的HK-2细胞铁死亡以及氧化应激相关指标的改善作用,为DN的治疗提供新的思路。方法:体外实验:选取人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)作为实验对象。实验分组:正常组(NC)、甘露醇对照组(MG)、高糖组(HG)、高糖+空载体组periprosthetic infection(HG+Vectors)、高糖+i PLA2β过表达组(HG+i PLA2β+OE)、高糖+铁死亡抑制剂组(HG+Fer1)。用30m M葡萄糖刺激HK-2细胞,i PLA2β质粒转染构建过表达模型,铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)和铁死亡激活剂erastin作为铁死亡对照组。干预36h后,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、铁含量,DCF免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot法检测铁死亡指标ACSL4、GPX4、LPCAT3、TFR1的表达。结果:Western blot结果表明高糖刺激最佳时间为36h。免疫荧光结果显示高糖刺激HK-2细胞内i PLA2β表达降低。Western blot和Real-time PCR结果显示高糖刺激HK-2细胞内KIM-1、ACSL4、LPCAT3、TFR1表达增高,GPX4表达降低。试剂盒检测结果显示高糖刺激HK-2细胞内ROS、MDA水平升高,GSH、SOD水平降低。Fer-1干预后上述指标改善。过表达i PLA2β后,可降低KIM-1表达,减轻HK-2细胞损伤。进一步研究发现,过表达i PLA2β后可减轻高糖诱导的HK-2细胞氧化应激和铁死亡损伤,另外,erastin减弱了i PLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用。结论:i PLA2β能够通过调控铁死亡和氧化应激减轻高糖诱导的HK-2细胞损伤。