禽白血病(avian leukosis,AL)是一种禽传染性肿瘤疾病,在全球多个地区均有该病的发生,禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)是AL的病原,可分为A~K共11个亚群。自1999年以来禽白血病特别是J亚群禽白血病(avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)的流行给我国养鸡业造成了重大经济损失。由于还未研制出针对禽白血病的有效药物与疫苗,所以只能依靠种群净化即淘汰阳性鸡的办法防治该病,而检测技术是实现Liproxstatin-1作用净化的重要技术支撑。目前,该病主要通过病原学检测、病理学检测、血清学检测、分子生物学检测方法诊断。本研究的主要目的是分离一株新出现的ALV-J病毒株,针对该病毒p27基因制备抗体,并以此为基础建立一种可用于检测ALV衣壳蛋白p27的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。为建立可靠的AL诊断方法提供技术支持。通过对湖北鸡场疑似感染禽白血病的新杨黑鸡进行临床检测,确诊该鸡群患有ALV-J感染引发的禽白血病。通过病毒分离技术分离一株ALV-J病毒,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对该毒株进行前病毒全基因分段克隆,并测序分析病毒全基因。利用原核表达系统对ALV-J p27蛋白进行原核表达并纯化。利用纯化的His-J-p27重组蛋白免疫动物,制备兔抗p27多克隆抗体并利用杂交瘤技术制备鼠抗p27单克隆抗体,通过免疫印迹试验(western VP-16小鼠blot,WB)和免疫荧光技术(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测抗体特异性。利用制备的兔多克隆抗体和鼠单克隆抗体建立ALV ELISA检测方法。结果表明成功从病鸡中分离出一株ALV毒株,命名为JZ2021017,同源性分析结果表明该毒株属于ALV-J。与其他ALV-J参考株相比,JZ2021017株gag、pol、gp85、gp37、LTR、U5与R基因与参考株相比仅存在细微差异,均无明显突变,与SD07LK1、HN17ZZ02株具有较高同源性,但在U3区存在转录元件缺失和数量改变。成功原核表达并纯化出针对JZ2021017株p27基因的GST-J-p27蛋白和His-J-p27蛋白,并利用His-J-p27蛋白免疫动物,成功制备兔抗ALV-J p27多克隆抗体;成功制备鼠抗ALV-J p27单克隆抗体6A1,鉴定出该单抗识别的表位为1PVVIKTEGPAWT12;WB检测结果显示两种抗体均能特异性识别ALV-J p27抗原;用制备的鼠单克隆抗体6A1对感染了ALV-A/B/J病毒的DF-1细胞进行IFA检测,证实鼠抗ALV-J p27单克隆抗体可用于多种亚群ALV病毒检测,证明该单克隆抗体具有较好特异性和应用性。初步建立了以兔多抗为包被抗体,鼠单抗为检测抗体的禽白血病ELISA检测方法。综上所述,本试验成功从病例中分离出一株ALV-J毒株JZ2021017,针对该毒株p27基因原核表达出GST-J-p27蛋白和His-J-p27蛋白,制备出能特异性识别ALV p27抗原的鼠抗ALV-J p27单克隆抗体6A1和兔抗ALV-J p27多克隆抗体,并利用两种抗体初步建立了检测ALV-J injury biomarkersp27蛋白的ELISA方法,为ALV基因研究和AL检测提供理论与技术支撑。