近年来，在全球范围内出现了EP402R基因（编码CD2v蛋白）缺失的ASFV突变毒株，因此需要开发一种检测方法来区分CD2v缺失的自然突变株和野生型ASFV毒株。对ASFV国内分离株WUHAN 2019protective immunity-1株的EP402R基因序列，利用生物信息学分析其亲水性，选取可溶性较强部分（232～333 aa），根据大肠杆菌密码子偏嗜性对该段基因进行优化并人工合成，插入原核表达载体pET-28a进行低温表达，获得带有HIS标签的可溶性CD2v胞内区重组蛋白，将其命名为pET-28a-CD2v-IS，大小约15 ku。Western-blot鉴定结果显示，该重组蛋白抗原性良好。利用纯化后的CD2v重组蛋白建立了间接ELISA方法BI 10773使用方法。经反应条件优化，最终确定最佳包被质量浓度为0.5μg/mL，封闭时间为1 h，样本最佳稀释度为1:10，样本最佳孵育时间为1 h，二抗最佳稀释度为1:20 000，最佳孵育时间为45 min，底物孵育最佳时间为5 min；确定建立的间接ELISA方法的S/N临界判定值为1.61。试验灵敏性可达1:1 280；批内变异系数小于4.15%，批间变异系数小于9.84%；只与ASFV全病毒株阳性血清发生反应，与ASFV(CD2v)缺失株、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等其他病毒阳性血清均无交叉反应；在检测46份背景清晰与54份背景未知的血清时，与商用试剂盒符合率分别达selleckchem GW-572016到100%与90.7%。结果表明，本研究建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性与重复性，检测结果与商品化试剂盒和WOAH推荐的间接ELISA方法一致，如果结合其他ASFV结构蛋白制成的ELISA检测试剂盒，可区分ASFV野毒与CD2v缺失株感染。