目的:本研究以络病学说中“肾络病”理论为基础,采用血清药理学方法进行体外实验,探究“补、清、消肾络”法含药血清通过JAK2/STBelnacasan研究购买AT1信号通路对血管紧张素Ⅱ诱导人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell,HMC)增殖的抑制作用,探究“补、清、消肾络”法防治Ig A肾病的作用靶点以及作用机制,为“肾络病”理论治疗Ig A肾病的深入研究提供理论依据和实验数据支持。材料与方法:1.含药血清制备:将40只SD级雄性大鼠随机分成5组,即正常组、西药组、中药高剂量组(高剂量“补、清、消肾络”法组Stormwater biofilter方)、中药中剂量组(中剂量“补、清、消肾络”法组方)、中药低剂量组(低剂量“补、清、消肾络”法组方),每组8只。大鼠适应性饲养3天,计算生药量和灌胃量,“补、清、消肾络”法组方由辽宁中医药大学附属医院中药局煎药室制备,连续灌胃7天,末次给药后各组腹主动脉采血。将各组血液转移至离心机离心,离心后取上清液,转移至56℃水浴箱灭活30min,经过滤除菌后置于-20℃冰箱储存备用。2.人肾小球系膜细胞培养和分组:将人肾小球系膜细胞从液氮罐中取出,接种至培养瓶中,向瓶中加入RPMI-1640培养液(含10%胎牛血清),将培养瓶放置在37℃、5%CO_2培养箱进行培养,定期换液。通过血管紧张素Ⅱ的诱导作用,促进人肾小球系膜细胞增殖,将细胞分组,分别为正常组、西药组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,药理血清干预西药组和各中药组。3.检测方法:MTT法检测各组系膜细胞48h的增长情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血管紧张素Ⅱ诱导的各组系膜细胞p JAK2、STAT1含量;实时荧光定量PCR法检测血管紧张素Ⅱ诱导的各组系膜细胞STAT1m RNA、SOCS1m RNA、IL-1βm RNA相对表达水平。结果:1.MTT法结果显示:对比正常组,模型组系膜细胞显著增殖(p<0.01),表明以血管紧张素Ⅱ作为刺激因子成功诱导HMC增殖。与模型组相比,中药中、高剂量组系膜细胞数量减少(p<0.05)。2.实时荧光定量PCR法结果显示:(1)SOCS1m RNA表达:模型组SOCS1m RNA表达较正常组明显降低(p<0.01);对比模型组,各中药组均升高(p<0.05)。各中药组相比,中药低、中剂量组与高剂量组间差异明显(p<0.01),低剂量组与中剂量组对比无明显差异(p>0.05)。(2)STAT1m RNA表达:模型组STAT1m RNA表达较正常组明显升高(p<0.01);对比模型组,西药组和各中药组均降低(p<0.05)。各中药剂量组之间比较,中药低剂量组与中剂量组、高剂量组间差异显著(p<0.01)。(3)IL-1βm RNA表达:模型组IL-1βm RNA表达较正常组明显升高(p<0.01);对比模型组,西药组和各中药组均降低(p<0.05)。各中药组相比,中药低剂量组与中剂量组、高剂量组间差异明显(p<0.01)。3.ELISA结果显示:(1)STAT1表达:模型组STAT1表达较正常组明显升高(p<0.01);各中药组对比模型组均降低(p<0.05)。各中药剂量组之间比较,中药低剂量组与中剂量组、高剂量组间差异明显(p<0.01)。(2)p JAK2表达:模型组p JAK2表达较正常组明显升高(p<0.01);各中药剂量组之间比较,中药低剂量组与中剂量组、高剂量组间差异显著(p<0.01)。结论:1.“补、清、消肾络”法MLN4924抑制剂组方可以显著抑制AngⅡ刺激靶细胞(人肾小球系膜细胞)引起的细胞增殖,有效的作用靶点可能为JAK2、STAT1、SOCS1、IL-1β。2.“补、清、消肾络”法组方作用机制可能是抑制p-JAK2激活,减少STAT1生成,抑制JAK2/STAT1通路活化,促进HMC中SOCS1生成,同时使IL-1β含量减少,加速异常增殖细胞凋亡,减轻并修复Ig AN导致的病理损害,以达到防治Ig AN的效果。3.阐明“补、清、消肾络”法组方作用于Ig AN的机制,丰富“补、清、消肾络”法在防治Ig AN中的应用。