目的本研究通过对比血清外泌体mi RNAs在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者与健康对照者之间,以及在NSCLC的肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者与肺鳞状细胞癌(lung squamous-cell carcinoma,LUSC)患者之间表达水平的差异,筛选出可以用于NSCLC早期诊断,以及LUAD和LUSC鉴别诊断的血清外泌体mi RNAs,从而发掘有利于NSCLC临床研究的生物标志物。方法选取2020年7月～2022年6月青岛大学附属医院接收的47例经病理组织切片检查确诊为NSCLC患者(26例LUAD和21例肺LUSC)和47例同期来进行健康体检的健康对照者作为研究对象。(1)从TCGA数据库下载两套mi RNAs表达谱数据和相应临床数据,利用R语言的Limma包,对NSCLC组和健康对照组以及LUAD组和LUSC组mi RNAs表达数据进行差异分析,筛选出差异表达的mi RNAs各5个。(2)运用超速离心法分离NSCLC患者与健康对照者的血清外泌体,使用透射电镜(transmAlpelisib供应商ission electron microscope,TEM)观察外泌体的外观形态。(3)采用蛋白质印迹法(Western blot)检测外泌体标志性表面蛋白分子CD9和CD63。(4)实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-q PCR)分析TCGA数据库选出的10个mi RNAs,从中初筛出NSCLC组和健康对照组以及LUAD组和LUSC组差异显著的血清外泌体mi RNAs各3个;(5)将筛选出来的差异显著的6mastitis biomarker个血清外泌体mi RNAs作为检验对象,在纳入研究的所有受试者中展开验证,通过RT-q PCR定量检测,进一步验证选出的血清外泌体mi RNAs准确性。(6)将验证PF-07321332抑制剂的6个血清外泌体mi RNAs分别做受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,判断其对NSCLC诊断和区分LUAD和LUSC的价值。结果(1)对TCGA数据库下载的NSCLC患者与健康对照者比较,观察到306个差异表达的mi RNAs,其中上调表达的mi RNAs118个,下调表达的mi RNAs188个,筛选出差异表达显著的5个mi RNAs,分别是mi R-1269a、mi R-6788-3p、mi R-210-3p、mi R-31-5p和mi R-4732-3p(|log2FC|>1,P<0.05);对LUAD患者和LUSC患者比较,观察到77个mi RNAs既在LUAD中表达上调又在LUSC中表达上调,83个mi RNAs既在LUAD中表达下调又在LUSC中表达下调,筛选出在两组同时上调或下调且差异表达显著的5个mi RNAs,分别是mi R-205-5p(↑)、mi R-147b(↑)、mi R-210-3p(↑)、mi R-1269a(↑)和mi R-139-3p(↓)(|log2FC|>1,P<0.05)。(2)透射电镜(TEM)观察外泌体外观形态为不规则椭圆形,其外缘可观察到膜结构。(3)采用Western blot检测外泌体膜表面标志性蛋白分子CD9和CD63,发现CD9和CD63均为阳性,说明收集到的样本为外泌体。(4)通过RT-q PCR定量分析,初筛NSCLC患者和健康对照者的血清外泌体mi RNAs,发现5个mi RNAs中有3个mi RNAs差异有统计学意义,分别是mi R-1269a、mi R-6788-3p和mi R-4732-3p(P<0.05),而mi R-210-3p和mi R-31-5p差异无显著意义;初筛LUAD患者和LUSC患者的血清外泌体mi RNAs,表达量差异显著的为mi R-205-5p、mi R-147b和mi R-139-3p(P<0.05),而mi R-210-3p和mi R-1269a无显著差异。(5)所有样本RT-q PCR定量分析结果验证,血清外泌体mi R-1269a、mi R-6788-3p和mi R-4732-3p在NSCLC患者和健康对照者中的表达差异显著(P<0.05);血清外泌体mi R-205-5p、mi R-147b和mi R-139-3p在LUAD患者和LUSC患者中的表达差异显著(P<0.05),两组结果均与初筛结果一致。(6)通过计算两组血清外泌体mi RNAs ROC曲线下面积AUC发现,外泌体mi R-1269a对NSCLC诊断的曲线下面积AUC=0.942,95%CI为0.894～0.990;外泌体mi R-4732-3p对NSCLC诊断的曲线下面积AUC=0.888,95%CI为0.825～0.951;外泌体mi R-205-5p对LUAD与LUSC鉴别诊断的曲线下面积AUC=0.914,95%CI为0.837～0.990。结论(1)通过外泌体的提取和鉴定,验证了NSCLC患者与健康对照者的外泌体mi RNAs存在差异表达。(2)血清外泌体mi R-1269a和mi R-4732-3p可以作为NSCLC早期诊断的潜在生物标志物。(3)血清外泌体mi R-205-5p可以作为LUAD和LUSC鉴别诊断的潜在生物标志物。