胰腺癌细胞外泌体通过激活线粒体凋亡途径促进β细胞凋亡

目的:探讨胰腺癌细胞分泌的外泌体(exosome)对胰岛β细胞存活率和功能的影响及作用机制。方法:采用外泌体提取试剂盒提取小鼠胰腺癌细胞Pan02和MPC-83上清液外泌体,经磷钨酸染色后于透射电镜下鉴定形态;外泌体经荧光标记后与小鼠胰岛瘤MIN6细胞共孵育48 h,检测外泌体分泌水平和MIN6细胞的摄取水平;MTT和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)实验分别检测各组细胞的存活率和胰岛素分泌功能;q PCR检测微小RNA-204(miR-204)和Bcl-2 mRNA的表达;Western blot检测线粒体凋亡信号通路相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和细胞色素C(Cyt-C)的表达。结果:透射电镜结果显示2种胰腺癌细胞均能分泌外泌体,且Pan02细胞分泌更多。荧光标记此网站的外泌体与胰岛β细胞共孵育结果显示,β细胞能够大量摄取胰腺癌细胞分泌的外泌体。MTT和GSIS实验结果显示,antibacterial bioassays外泌体处理组的MIN6细胞Naporafenib配制存活率和高糖刺激的胰岛素分泌量显著低于未处理组(P<0.01)。q PCR结果显示胰腺癌细胞分泌的外泌体富含miR-204,且外泌体处理后的MIN6细胞内Bcl-2的mRNA表达显著下调(P<0.01)。Western blot结果显示,外泌体处理的MIN6细胞内Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05),Bax、cleaved caspase-3和Cyt-C蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:胰腺癌细胞能够分泌外泌体,且该外泌体能够被胰岛β细胞摄取。胰腺癌细胞分泌的外泌体可以降低β细胞存活率和β细胞胰岛素的分泌功能,其机制可能通过外源性上调β细胞内miR-204的表达,进而抑制Bcl-2的mRNA和蛋白表达,最终激活β细胞内线粒体凋亡信号通路。