研究背景胃癌是全球癌症的第三大死亡原因。免疫检查点阻断剂(Immune checkpoint blockade,ICB)的出现,为多种实体肿瘤的癌症治疗提供了新的思路,但晚期胃癌患者对ICB的应答有限。肿瘤免疫微环境(tumour immune microenvironment,TME)被认为是ICB耐药性的重要原因之一。其中肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是TME中最为丰富的细胞类型,已被证明具有高度的异质性。目前有研究表明,在TME中CAFs能够影响免疫细胞浸润、肿瘤内迁移、CD8+T细胞耗竭、巨噬细胞极化等多个方面。既往的胃癌单细胞转录组测序研究中,我们将成纤维细胞群分为四个亚群,其中与细胞外基质相关的CAFs亚群(extracellular-matrix,eCAFs)与巨噬细胞的关系尤为密切。目前研究认为 TME 中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)与 ICB 应答呈显著的负相关性。故我们推测eCAFs可能通过影响巨噬细胞,从而影响胃癌患者的ICB疗效。研究方法我们首先在胃癌患者组织标本中利用免疫荧光染色鉴定eCAFs是否存在。随后在TCGA-STAD和22例真实世界接受免疫治疗的胃癌患者中,评估eCAFs和ICB疗效的相关性。后续我们基于TCGA-STAD进行eCAFs相关的免疫浸润分析,并选取95例胃癌患者手术标本探究eCAFs与巨噬细胞的关系。随后,我们提取两种胃癌细胞系的外泌体,并在体外构建eCAFs模型。在体外实验中,将POSTN基因进行过表达及敲低,以探究eCAFs中MC3POSTN的表达水平对巨噬细胞的趋化作用及信号通路的影响。在裸鼠胃癌皮下移植模型中,我们在体内实验验证干扰POSTN对巨噬细胞趋化的影响。最后,我们在TCGA数据库和接受免疫治疗的多种类型实体瘤患者的组织标本中探索了 eCAFs与ICB疗效的关系。本研究中所有统计分析均使用R语言软件(v.4.0.2)进行。(具体实验流程见下图所示)(?)研究结果我们首先在TCGA-STAD和真实世界胃癌患者标本中证实eCAFs与免疫治疗的客观反应率(overall responseGDC-0068细胞培养 rate,ORR)呈显著负相关。同时在TCGA-STAD的免疫浸润分析及95例胃癌患者手术标本中,均发现eCAFs与巨噬细胞的浸润呈现显著正相关。随后,我们在体外利用胃癌细胞系(AGS和GC803)外泌体建立高表达POSTN和FAP的eCAFs模型。在体外实验中,POSTN过表达的CAFs能够显著促进巨噬细胞趋化,反之亦然。同时体内实验的裸鼠胃癌皮下移植模型也同样证实了上述结论。Western Blot结果显示过表达POSTN的CAFs能够上调巨噬细胞中Akt蛋白的磷酸feathered edge化,反之亦然。并且Rescue实验同样证实使用Akt抑制剂能够明显削弱过表达POSTN的CAFs促进巨噬细胞趋化的作用。最后,我们在TCGA数据库和多种类型实体瘤患者的组织标本中验证了 eCAFs与ICB疗效不佳的显著相关性。研究结论在胃癌的肿瘤微环境中,eCAFs通过分泌POSTN激活巨噬细胞内Akt蛋白的磷酸化,促进巨噬细胞的趋化。胃癌及多种类型实体瘤组织中POSTN的高表达可能提示ICB疗效欠佳。POSTN有望成为提高ICB疗效的潜在联合治疗靶点。