慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)合并心律失常时,在治疗CHF的同时单纯加用抗心律失常药物具有潜在风险,潜在的风险一方面可能阻碍代偿性血流动力学改变,另一方面也可能导致其他类型的心律失常,进一步恶化CHF。研究发现,真武汤在治疗慢性心力衰竭过程中能够有效改善心律失常,但其抗心律失常的机制并不明确。研究目的:本研究旨在从p38-MAPK通路调控肥大心肌结构重构和电重构角度探讨真武汤治疗心力衰竭相关心律失常的作用机制,为真武汤治疗心力衰竭提供可靠的实验依据,为进一步深入研究其机制提供理论参考,为临床推广应用提供可靠的证据。研究方法:正常大鼠灌胃真武汤颗粒剂(大鼠给药剂量为7.23 g·kg~(-1)·d~(-1),按生药量计)连续7日,从腹主动脉采血,分离灭活真武汤含药血清。采用AnDemand-driven biogas productiongⅡ诱导H9c2心肌细胞构建心肌肥大模型,用CCK-8法测定细胞增殖情况及用Western blot法测定关键蛋白Cx43的表达情况来设置AngⅡ的最佳造模浓度及低中高剂量含药血清的体积分数。根据预实验结果,最佳造模浓度设置为10~(-6)mol/L,真武汤低、中、高剂量的含药血清体积分数分别设置为2%、4%、8%。实验共分六个组:正常组(N)、模型组(M)和真武汤低剂量组(D)、中剂量组(Z)、高剂量组(G)及p38通路抑制剂组(S)。正常组用含有胎牛血清的高糖培养基培养,模型组用含有10~(-6)mol/L浓度的AngⅡ培养基处理,低、中、高剂量组分别予2%、4%、8%体积分数的真武汤含药血清及AngⅡ培养基共同处理,抑制剂组用含有p38MAPK抑制剂SB203580的培养基处理。处理48h后,镜下观察各组心肌细胞的生长情况,通过Elisa法测心肌肥大标志物ANP的含量,用β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老情况,采用Western blot法检测各组心肌细胞Cx43、p38-MAPK、MMP2、MMP9、TIMP1、P53蛋白的表达情况,采用q PCR定量分析各组心肌细胞ANP、Cx43、p-Cx43、p38-MAPK、MMP2、MMP9、TIMP1的m RNA转录水平,免疫荧光检测Cx43蛋白的表达和分布情况。研究结果:高剂量的真武汤能够减轻肥大心肌细胞的表面积,中低剂量无明显效果;真武汤能够降低心肌肥大标志物ANP及其m RNA的水平,且其效果与剂量正相关;真武汤能改善肥大细胞的衰老情况,效果与抑制剂相似;真武汤能够降低肥大心肌细胞Cx43、p38-MAPK、MMP2、MMP9、p53、p-Cx43蛋白的表达水平及Cx43、p38-MAPK、MMP2、MMP9的m RNA转录水平,且能够增加TIMP1的表达水平及其m获悉更多 RNA转录水平,效果与剂量有关;真武汤能够缓解肥大细胞表面Cx43的分布紊乱及减少该蛋白在细PLX3397体内实验剂量胞侧-侧移位分布。研究结论:1.真武汤可能通过调控p38-MAPK信号通路来减缓心肌肥大细胞的衰老和心肌纤维化,并调节MMPs与TIMPs平衡,维持细胞外基质的代谢平衡,改善CHF的结构重构;2.真武汤可能通过调控p38-MAPK信号通路来调控肥大心肌细胞Cx43数量表达、磷酸化水平及其分布定位,改善细胞间的缝隙连接重构,改善电传导;3.真武汤可能通过调控p38-MAPK信号通路来实现对肥大心肌结构重构和电重构的统一调节,从而达到治疗心力衰竭及相关心律失常的目的。