目的:化疗抵抗是导致胃癌患者不良预后的重要因素,YAP1通过调控其下游基因的表达,广泛参与调控包括化疗抵抗在内多种促癌进程,并在胃癌的Nucleic Acid Purification发生发展中发挥重要作用,然而其机制尚未完全阐明。有研究表明CPNE3在多种癌症发生发展中密切相关,但在胃癌中的功能及机制仍不明确。本研究旨在筛选YAP1下游潜在新靶基因,并通过体内及体外实验探究CPNE3在促胃癌生物学功能及其机制。方法:1.使用m RNA测序技术对YAP1下游潜在靶基因进行筛选。2.通过RTq PCR、WBlebbistatin采购estern Blotting及荧光素酶报告基因实验检验YAP1对CPNE3转录活性的调控作用。3.通过CCK-8、Transwell侵袭迁移、克隆形成实验探究CPNE3对胃癌细胞恶性生物学行为及化疗耐药的影响。4.通过Crisp-Cas9基因编辑技术构建稳定敲除CPNE3的BGC-823细胞系,并进一步通过细胞系异种移植模型(CDX)探究敲除CPNE3对胃癌肿瘤在体内生长的影响。结果:1.双荧光素酶报告实验显示YAP1和TEAD1-4能够协同激活CPNE3启动子活性。2.实时荧光定量PCR和免疫印迹实验结果显示在胃癌细胞中下调YAP1可抑制CPNE3 m RNA和蛋白的表达,过表达YAP1则相反。3.免疫印迹实验表明在胃癌细胞中敲低CPNE3抑制YAP1表达,过表达CPNE3则相反。4.细胞功能实验结果表明CPNE3能够促进胃癌细胞侵袭迁移及化疗耐药。5.胃癌CDX模型显示敲除CPNE3显著抑制了肿瘤的https://www.selleck.cn/products/SB-203580.html生长。结论:本研究发现并验证CPNE3是YAP1的下游调控靶基因,经YAP1诱导激活后可进一步正反馈调控YAP1通路,促进胃癌细胞增殖,侵袭迁移及化疗耐药。CPNE3可作为胃癌的治疗新的靶点。