目的:以瓦尼木层孔菌为研究对象,采用单因素Plant stress biology结合响应面优化瓦尼木层孔菌多糖的提取工艺,为进一步评价瓦尼木层孔菌多糖的体外活性,本实验选定小鼠单核巨噬细胞RAW264.7为模型,通过LPS(脂多糖)诱导建立炎症模型,进而评价瓦尼木层孔菌多糖的抗炎作用。方法:本实验首先采用热水浸提法对瓦尼木层孔菌多糖进行提取,采用单因素法对提取温度、提取时间、料液比等进行提取工艺考察,随后通过响应面法确定最佳提取工艺。在体外实验评价过程中,本文设定低、中、高3个不同梯度瓦尼木层孔菌多糖给药浓度,通过测定炎症因子IL-6、TNF-α为指标评价其抗炎活性;采用PCR法观察IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA表达量;最终通过Western blot实验验证瓦尼木层孔菌多糖所介导激活的信号通路,确定瓦尼木层孔菌多糖的抗炎作用及机制。结果:最终确定其最佳提取工艺条件为提取温度75℃、提取时间2h、料液比1:16 g/ml;体外细胞实验结果表明,瓦尼木层孔菌多糖明显抑制了炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α 的含量及mRANA的表达,不同程度下调了P65Elexacaftor配制、P38、ERK、JNK、AKT的磷酸化蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:本文通过对瓦尼木层孔菌多糖的提取工艺的优化,利用单因素结合响应面法最终确定最佳提取工艺为提取温度75℃、提CHIR-99021化学结构取时间2h,料液比1:16 mg/ml;采用体外细胞实验证实了瓦尼木层孔菌多糖可激活NF-κB、AKT、MAPK信号通路,为瓦尼木层孔菌多糖的工艺制备及活性评价提供理论基础。