目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1~5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CSPR2:0.03 nL/(细胞·d)、CSPR3:0.04 nL/(细胞·d)、CSPR4:0.05 nL/(细胞·d)、CSPR5:0.06 nL/(细胞·d),每组3个重复]的15个TPP管中按100 万个/mL的初始密度接种相同的CHO种子细胞;摇床中,以转速225 r/min、CO_(2)浓度5.0%、湿度80%和温度37 ℃的条件培养细胞;以后每天取细胞样,分别检测活细胞密度(viable cell density, VCD)、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸3-MA半抑制浓度浓度和渗透压。接种3 d起,每天分别从CSPR 1~5的各管中,按0.02~0.06 nL/(细胞·d)的CSPR计E-616452 IC50算所需要更换的细胞悬液体积,将各管中的细胞悬液离心,取出相应体积的上清并补入相同体积的新鲜培养液重悬细Automated Liquid Handling Systems胞后,继续培养。如细胞悬液中的葡萄糖浓度≤3 g/L时,用300 g/L的葡萄糖补至8 g/L。CHO细胞培养约19 d时,结束实验。根据CHO细胞生长、细胞代谢、抗体蛋白滴度(titer)、收获液总体积和抗体蛋白总收量,确定适合本细胞生长和表达的CSPR。结果 在CSPR1~2[0.02~0.03 nL/(细胞·d)]的条件下灌流培养时,最高VCD分别为1 059万、1 298 万个/mL,细胞活率在培养中后期下降较快,抗体蛋白总收量分别为98和112 mg。CSPR3~5[0.04~0.06 nL/(细胞·d)]条件下的最高VCD分别为1 422万、1 523万和1538 万个/mL,细胞活率维持较好,抗体蛋白总收量分别为119、120和107 mg。结论 当CSPR为0.04~0.05 nL/(细胞·d)时,细胞生长和抗体蛋白表达情况较好,为适合本细胞株灌流培养的CSPR。