牛结节性皮肤病病毒L1R蛋白膜外区的可溶性表达及免疫原性鉴定

本研究截取Necrotizing autoimmune myopathy牛结节性皮肤病病毒(LSDV)L1R基因膜外区序列人工合成至原核表达载体pET15b上,转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达和亲和层析纯化获得重组LSDV-L1R-His蛋白,进行了SDS-PAGE鉴定和抗原性鉴定,并对其作为间接ELISA诊断原料的应用前景进行了评价。此外,本Bemcentinib配制研究进一步制备了该重组蛋白的多克隆抗体,分别采用重组抗原和灭活病毒建立的间接ELISA检测多抗效价,并评估了该多抗在间接免疫荧光检测中的应用。结果显示,本研究成功获得了可溶形式的重组L1R蛋白,大小约为27kD。抗原性鉴定结果显示,该抗原能够有效识别LSDV和羊痘的灭活阳性血清ZD1839 molecular weight,与阴性血清和其他羊病血清无交叉反应;利用L1R间接ELISA检测临床羊血清,检测结果与IDvet试剂盒的符合率为93.48%;制备的多抗以重组L1R蛋白检测效价高达1:20 480 000,以灭活病毒检测效价为1:1600;间接免疫荧光结果显示,该多克隆抗体能够特异性识别羊痘疫苗毒AV41。本研究结果表明L1R蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,是LSDV和GTPV间接ELISA诊断方法的重要候选靶标。