清肺通络方调控Caspase-1对肺炎支原体诱导人正常肺上皮细胞BEAS-2B焦亡的干预作用

【目的】探讨清肺通络方(桑白皮、地骨皮等)对肺炎支原体(MP)诱导人正常肺上皮细胞BEAS-2B由半胱氨酸天冬Blebbistatin说明书氨酸蛋白酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路介导的细胞焦亡的干预作用。【方法】建立MP感染的BEAS-2B细胞模型,分别给予清肺通络方、Caspase-1抑制剂干预。制备过表达Caspase-1质粒,转染MP感染的BEAS-2B细胞,给予清肺通络方干预。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖活性,Western Blot法检测细胞焦亡关键蛋白pro-INCB28060体外Caspase-1、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)、消皮素D-N端片段(GSDMD-N)的表达水平,酶联免疫吸附分析(ELIInfluenza infectionSA)检测细胞因子白细胞介素(IL)-1β和IL-18水平,生化法检测乳酸脱氢酶(LDH)和Na~+-K~+-ATP酶活性,流式细胞术检测细胞焦亡。【结果】MP感染BEAS-2B细胞增殖活性明显降低,细胞焦亡关键蛋白pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N表达水平均明显升高,下游细胞因子IL-1β和IL-18水平也显著升高,LDH活性明显升高,Na~+-K~+-ATP酶活性明显下降,细胞焦亡率显著上升。应用清肺通络方、Caspase-1抑制剂干预MP感染BEAS-2B细胞,及应用清肺通络方干预过表达Caspase-1质粒转染的MP感染BEAS-2B细胞后,细胞增殖活性均升高,细胞焦亡关键蛋白pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N表达水平降低,下游细胞因子IL-1β和IL-18水平均显著降低,LDH活性明显降低、Na~+-K~+-ATP酶活性明显上升,细胞焦亡率明显下降。【结论】MP感染BEAS-2B细胞后,激活Caspase-1/GSDMD通路,促进炎症因子释放,使细胞结构受损,最终导致细胞焦亡。清肺通络方可以抑制Caspase-1/GSDMD通路的激活,减轻炎症反应,减轻细胞损伤,抑制细胞焦亡。