恩格列净对造影剂相关急性肾损伤的作用和机制研究

目的:拟探讨恩格列净(empagliflozin)对造影剂相关急性肾损伤(contrast-associated acute kidney injury,CA-AKI)的作用和机理。方法:本实验主要包括SD大鼠、小鼠和细胞实验,所有实验动物均在适应性喂养1周后开展相关实验。第一部分实验:将雄性SD大鼠分配为如下4组:对照组、恩格列净组、模型组以及模型+恩格列净组。对照组大鼠,生理盐水VX-445(1.5 mg/kg)灌胃治疗,1次/日,恩格列净组给与等immediate allergy量恩格列净(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,两组连续灌胃7日;模型组禁水16小时后,建立造影剂相关急性肾损伤(contrast-associated acute kidney injury,CA-AKI)模型;模型+恩格列净组,造模前连续7天恩格列净(1.5 mg/kg.d)灌胃,禁水16小时后建立CA-AKI模型。注射碘海醇造模后继续进食和饮水喂养,12小时后对所有大鼠实施安乐死,并收集双肾和血清标本。利用ELISA方法测定血清肾功能相关指标,HE染色检测肾脏病理损伤及评分,利用蛋白印迹实验和免疫组织化学染色试剂对凋亡相关蛋白表达率进行定MLN8237采购量分析,并利用TUNEL细胞凋亡染色荧光显影测定,进而评估大鼠肾脏细胞的凋亡阳性率;第二部分实验,为了研究恩格列净对CA-AKI发生发展的具体机制,采用了小鼠及细胞实验展开研究,将健康的C57 BL/6J雄性小鼠,随机分配到以下对照组、模型组、模型+生理盐水组和模型+恩格列净组4组。模型组小鼠禁水18小时,在腹腔内注射碘海醇造影剂,进而建立CA-AKI小鼠模型;模型+生理盐水组小鼠实验干预,CA-AKI造模前7天,持续予以生理盐水(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,模型+恩格列净组小鼠,持续7天予以恩格列净(1.5mg/kg)灌胃,1次/日,两组小鼠均禁水18小时后CA-AKI造模;对照组小鼠不接受缺水、速尿、碘海醇和恩格列净处理,在正常环境下养育。碘海醇注射12小时后收集标本。通过ELISA、HE染色评估肾功能及肾脏病理损伤,通过蛋白印迹检测凋亡相关蛋白,并通过TUNEL细胞凋亡染色荧光显影测定技术对小鼠肾脏的组织进行染色反应,以了解及判定组织细胞凋亡阳性率;各组组织经包埋、制片等处理,经线粒体透射电镜视野观察,了解线粒体的外观及细微结构的变化情况;通过免疫组织化学染色实验,对各组解偶联蛋白2(Uncoupling protein 2,U…