目的:支气管哮喘简称哮喘,此网站是一种以可逆性气道阻塞和气道高反应性为特点的慢性炎症性疾病,其主要特征是慢性炎症和气道高反应性导致的发作性喘息,咳Air Media Method嗽和呼吸困难。气道重塑、气流受限和黏液分泌过多是已知的哮喘病理症状。黏液高分泌是哮喘面临的首要难题,过多的黏液产生导致许多患者的发病和死亡,特别是那些患有更严重疾病的患者,气道黏液堵塞一直被认为是哮喘患者死亡的主要原因。故抑制黏液高分泌对哮喘的治疗起到关键作用。内质网(ER)应激是Entinostat生产商对细胞器应激的主要反应者。ER功能稳态的丧失会触发ER应激反应,大量证据表明,内质网应激与多种疾病的发病机制有关,如神经退行性疾病、代谢紊乱、心血管疾病、恶性肿瘤和呼吸系统疾病等。内质网(ER)应激被认为是调节黏液高分泌的一部分,它可能通过TBK1信号通路激活下游因子,促进基因表达。TBK1是一种多功能丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与多种细胞信号通路,是炎症IFN信号转导和选择性自噬的中心激酶。在先天免疫信号中,TBK1作为受体可介导病原体检测的整合子信号导致I型IFN介导的T细胞反应。TBK1与炎症反应密切相关,有证据表明,TBK1信号通路参与了肺部的过敏性炎症反应。然而,ER应激是否通过TBK1途径促进气道黏液分泌的具体机制尚不清楚。因此我们的目标是探索屋尘螨(HDM)诱导的过敏性哮喘中内质网应激是否通过激活非经典TBK1信号通路促进MUC5AC黏液高分泌。方法:本实验分为细胞实验部分和动物实验部分。首先实验使用HDM构建哮喘模型小鼠,免疫印迹检测P-TBK1、STAT6、P-NF-κB、MUC5AC蛋白的表达水平,免疫荧光分析STAT6、P-NF-κB的核易位情况。苏木精和伊红(HE)和过碘酸希夫(PAS)染色分析小鼠气道炎症及黏液分泌情况;接着使用人支气管上皮BEAS-2B细胞并使用si-NC、si-TBK1慢病毒载体转染以敲低TBK1基因的表达。根据具体实验分为普通BEAS-2B细胞组,普通BEAS-2B细胞+HDM组,慢病毒转染si-NC组、si-TBK1组、以及si-NC+HDM、si-TBK1+HDM组,其中HDM浓度为(200μg/ml),处理转染细胞24小时后进行后续实验;然用TBK1磷酸化抑制剂Amlexanox(25μM)或内质网应激抑制剂4-PBA(10 m M)处理细胞。将实验分为对照组(PBS)、实验组(HDM)、单纯给药组(Amlexanox或4-PBA)、哮喘治疗组(H…