大豆EIL3蛋白多克隆抗体制备及其在幼苗中的表达

乙烯与大豆花器官发育及产量密切相关，乙烯不敏感蛋白基因（ethylene insensitive 3, EIN3）及其同源基因EIL3(EIN3-like 3)可能是参与大豆产量调控的关键节点基因之一，但还缺乏充足的证据。本研究通过原核表达大豆EIL3并制备其编码蛋白（Glyma.15G031800）的多克隆抗体，以及在大豆幼苗中进行EIL3蛋白的免疫组织化学检测，验证制备的多克隆抗体的有效性和初步探索EIL3蛋白的生物学功能。结果表明PLX5622分子量：将EIL3蛋白（Glyma.15G031800）编码区（第486-590个氨基酸）片段克隆到大肠埃希菌（Escherichia coli Rosetta）中，EIL3蛋白以包涵体的形式获得表达；用纯化后的EIL3蛋白对日本大耳兔进行免疫，得到2个多克隆抗血清，稀释81 确认细节000倍时吸光度值远大于0.4，说明血清效价较好，infectious organisms其对抗原的检测下限均为1 ng。EIL3的表达受1-氨基环丙烷-1-羧酸的强烈诱导，eil3突变体会减少EIL3蛋白的积累及生长抑制，因而有利于幼苗长高、下胚轴的伸长与侧根发育。本研究为在蛋白水平上研究大豆EIL3的生物学功能提供了便利条件。