为评估猪多杀性巴氏杆菌(Pm)毒力蛋白Dot诱导小鼠产生的免疫保护效果，本研究根据GenBank登录的A型Pm CS株dot基因序列设计特异性引物，以CS株基因组DNA为模板经PCR扩增dot基因片段，PCR产物测序后利用生物信息学软件进行序列分析。结果显示，dot基因长729 bp，编码含242 aa的膜蛋白；该蛋白的N端有一个24 aa组成的信号肽，具有重复Sel 1结构功能域，属于四肽重复超家族；抗原表位分析显示，PmGW4869 Dot蛋白含有6个抗原表位；序列同源性分析显示，不同血清型Pm Dot蛋白氨基酸序列的同源性达99%以上。将dot基因克隆至原核表达载体p ET-28a(+)中构建重组表达质粒p ET-dot，转化大肠杆菌BL21 (DE3)，经IPTG诱导表达重组蛋白，采用His纯化柱纯化后，经SDS-PAGE检测并采用western blot鉴定。结果显示，重组Dot蛋白(rDot)正确表达，且纯化效果较好，具有较强的反应原性。取40只4周龄BALB/c小鼠随机均分为5组进行免疫保护实验，3个实验组分别于0、2周、4周对小鼠通过背部皮下多点注射弗氏不完全佐剂(IFA)+10μg r DJAK/STAT抑制剂ot (低剂量组)、IFA+30μg r Dot (中剂量组)、IFA+50μg r Dot (高剂量组)。两个对照组分别注射等量生理盐水和IFA。共免疫3次，每次间隔2周，小鼠于免疫前和攻毒前，均经尾静脉采血并分离血清，采用ELISA检测血清中Ig G抗体水平。第3次免疫后2周，通过腹腔注射10×LD50的A型Pm CS株攻击小鼠，观察攻毒后小鼠的临床症状及死亡情况。结果显示，生理盐水和IFA组小鼠抗体水平无显著差异；实验组小鼠二免后2周和三免后2周Ig G抗体水平均极显著高于两个对照组(P<0.01)。攻毒后3 d，对照组小鼠全部死亡，低剂量、中剂量、高剂量组小鼠存活率分别为12.5%(1/8)、50%(4/8)、62.5%(5/8)。攻毒后5 d存活小鼠逐渐恢复并正常采食。本研究表明，r Dot具有很好的免bio depression score疫原性，可诱导小鼠产生部分免疫保护力。该研究为Pm Dot亚单位疫苗的研究积累了基础资料。