1目的通过临床研究观察芪黄健脾滋肾颗粒(QJZG)对系统性红斑狼疮(SLE)血小板减少患者的临床疗效及血小板相关指标的影响,并探讨其可能机制。通过动物实验研究,基于lncRNA GAS5调控PI3K/AKT/B ax细胞凋亡通路探讨QJZG改善SLE血小板减少的可能作用机制。2方法2.1临床研究一选取来自2020年10月～2022年10月在安徽中医药大学第一附属医院风湿病科门诊及住院部的64例SLE女性患者(门诊35例,住院部29例)作为研究对象。另选取30例来自体检中心健康女性作为健康组。检测血小板相关指标、免疫炎症指标、抗体水平、lncRNA GAS5/PI3K/AKT/B ax信号轴相关因子表达水平。利用Spearman或Pearson相关分析将血小板计数与其他指标进行相关性分析。2.2临床研究二将选取的64例SLE女性患者按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组32例。对照组予以醋酸泼尼松片和硫酸羟氯喹片口服,观察组在对照组的基础上加芪黄健脾滋肾颗粒口服。两组疗程均为Baf-A1说明书12周。观察治疗前后血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)、血小板平均体积(MPV)、促血小板生成素(TPO)、抗dsDNA抗体、肾功能指标[血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白定量(24hPro)]、SLE疾病活动度(SLEDAI)、炎症指标[血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)]、中医症状评分、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、补体3(C3)、补体4(C4)、血清炎症因子[白介素10(IL-10)、白介素17(IL-1Medicaid prescription spending7)、白介素23(IL-23)、干扰素γ(IFN-γ)]、血小板表面抗体(PAIgG、PAIgA、PAIgM)的变化。2.3实验研究将24只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组(MC)、芪黄健脾滋肾颗粒组(QJZG)、醋酸泼尼松组(PRED)、PI3K抑制剂组(LY294002),每组各6只;将6只C57BL/6小鼠作为空白对照组(NC)。NC组及MC组予以10ml·kg-1·d-1生理盐水灌胃,1次/d;QJZG组:予以12.6g·kg-1·d-1 QJZG溶液灌胃,1次/d;PRED组:予以5mg·kg-1·d-1醋酸泼尼松溶液灌胃,1次/d;LY294002组:予以10ml·kg-1·d-1生理盐水灌胃,另腹腔注射1mg/kg LY294002溶液,2次/w。各组连续用药8w。检测小鼠外周血中PLT、抗ds-DNA抗体、ANA抗体、C3水平;RT-qPCR法检测血小板悬液 GAS5、(PI3K、AKT、Bax、Bcl-2)mRNA 表达量;Western Blot 法检测血小板悬液PI3K/AKT/B ax信号轴相关蛋白的表达水平;流式细胞术检测血小板细胞凋亡率。3结果3.1临床研究一结果3.1.1 SLE组与健康组PLT、ESR、CRP、IgG、C3的比较与健康组比较,SLE组PLT、C3显著降低(P<0.01或P<0.05),ESR、CRP、IgG水平显著升高(P<0.01)。3.1.2 SLE组与健康组血小板悬液GAS5表达和PI3K/AKT/B ax通路蛋白的比较与健康组比较,SLE组血小板悬液中GAS5表达量显著降低(P<0.01),PI3K、AKT、Bax蛋白水平显著升高(P<0.01)。3.1.3 SLE 组 SLEDAI、ESR、CRP、TPO 与 PLT 相关性分析SLE组患者PLT与SLEDAI、ESR、CRP、TPO水平均呈负相关(P<0.01)。3.1.4 SLE组患者IgG、IgA、IgM、C3、C4、抗dsDNA抗体与PLT相关性分析SLE组患者PLT与IgG、IgA、IgM、dsDNA抗体呈负相关(P<0.05或P<0.01);PLT与C3、C4水平呈正相关(P<0.05)。3.1.5 SLE组患者GAS5、PI3K、Bax、Bcl-2、Caspase-3与PLT相关性分析SLE组患者GAS5与PLT呈正相关(P<0.05),PI3K、AKT与PLT无相关性(P>0.05),Bax、Caspase-3 与 PLT 呈负相关(P<0.01 或P<0.05),Bcl-2 与 PLT呈正相关(P<0.05)。3.2临床研究二结果3.2.1两组临床疗效比较两组治疗后,观察组总有效率(87.50%)显著高于对照组(68.79%)(Z=-2.288,P=0.022),观察组临床疗效优于对照组。3.2.2两组治疗前后PLselleck PexidartinibT、PCT、MPV的比较两组治疗后,PLT、PCT、MPV均显著高于治疗前(P<0.01);观察组治疗后PLT显著高于对照组治疗后(P<0.01);PCT、MPV升高不明显(P>0.05)。3.2.3两组治疗前后TPO、抗dsDNA抗体的比较两组治疗后,TPO、抗dsDNA抗体均明显下降(P<0.01);观察组治疗后TPO、抗dsDNA抗体均显著低于对照组治疗后(P<0.05或P<0.01)。3.2.4两组治疗前后BUN、Scr、24hPro的比较两组治疗后,BUN、Scr、24hPro均显著降低(P<0.01),观察组治疗后BUN、Scr、24hPro均显著低于对照组治疗后(P<0.05或P<0.01)。3.2.5两组治疗前后SLEDAI、ESR、CRP的比较两组治疗后,SLEDAI、ESR、CRP均显著低于治疗前(P<0.01),观察组治疗后SLEDAI、ESR、CRP均显著低于对照组治疗后(P<0.01)。3.2.6两组治疗前后中医症状评分的比较两组治疗后,倦怠乏力、红斑、脱发评分均明显降低(P<0.05或P<0.01),观察组治疗后倦怠乏力、脱发、腰膝酸软、畏寒喜暖、食少纳呆评分均显著低于对照组治疗后(P<0.05或P<0.01)。3.2.7两组治疗前后IgG、IgA、IgM、C3、C4水平的比较两组治疗后,IgG、IgA、IgM均显著下降(P<0.01),C3、C4显著上升(P<0.01);观察组治疗后IgG、IgA显著低于对照组治疗后(P<0.05或P<0.01),C3显著高于对照组治疗后(P<0.01)。3.2.8两组治疗前后血清炎症因子的比较两组治疗后,IL-10显著升高(P<0.01),IL-17、IL-23、IFN-γ显著降低(P<0.01),观察组治疗后IL-10显著高于对照组治疗后(P<0.05),IL-17、IL-23、IFN-γ显著低于对照组治疗后(P<0.05或P<0.01)。3.2.9两组治疗前后PAIgG、PAIgA、PAIgM的比较两组治疗后,PAIgG、PAIgA均显著降低(P<0.01),观察组治疗后PAIgG、PAIgA、PAIgM均显著低于观察组治疗前(P<0.01)。3.3实验研究结果3.3.1 QJZG 对 MRL/lpr 狼疮小鼠外周血中 PLT、anti-dsDNA、ANA、C3 的影响与空白组,模型组PLT、C3水平显著降低(P<0.01);anti-dsDNA、ANA水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,QJZG组、PRED组、LY294002组PLT、C3水平显著升高(P<0.01或P<0.05),anti-dsDNA、ANA显著降低(P<0.05)。3.3.2 QJZG 对 MRL/lpr 狼疮小鼠 GAS5、(PI3K、AKT、Bax、Bcl-2)mRNA 表达量的影响与空白组比较,模型组中GAS5相对表达量显著降低(P<0.01),(PI3K、AKT、Bax)mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA相对表达量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,QJZG组、PRED组、LY294002组GAS5相对表达量均显著升高(P<0.01),且QJZG组升高更明显;QJZG组、PRED组、LY294002组(PI3K、AKT、Bax)mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01)。3.3.3 QJZG对MRL/lpr狼疮小鼠PI3K/AKT/B ax通路相关蛋白水平的影响与空白组比较,模型组PI3K、AKT蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05),P-PI3K、P-AKT、Bax、Caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,QJZG组、PRED组、LY294002组PI3K、AKT蛋白水平变化不明显(P>0.05),P-PI3K、P-AKT、Bax、Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。3.3.4 QJZG对MRL/lpr狼疮小鼠血小板细胞凋亡率的影响与空白组比较,模型组血小板细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与模型组比较,QJZG组、PRED组、LY294002组血小板细胞凋亡率均显著降低(P<0.01)。其中PRED组血小板细胞凋亡降低程度最明显。4结论4.1 SLE血小板减少患者PLT与疾病活动度、免疫炎症指标成负相关;PLT与GAS5表达量、PI3K/AKT/B ax凋亡通路相关蛋白存在显著的相关性,提示SLE血小板凋亡可能参与了血小板减少的机制。4.2 QJZG干预SLE血小板减少后,可以显著升高PLT,降低体内炎症反应,调节免疫功能,改善肾功能和血小板表面抗体,临床疗效高于对照组,且安全性高。4.3 QJZG能明显升高狼疮小鼠C3、PLT,降低anti-dsDNA、ANA水平,有效改善机体免疫功能,升高PLT。QJZG可能通过lncRNA GAS5调控PI3K/AKT/B ax凋亡通路信号轴,下调促凋亡因子Bax、Caspase-3,上调抗凋亡因子Bcl-2,抑制血小板细胞凋亡,从而改善血小板减少。