目的 通过双荧光素酶报告技术验证piRNA-DQ566704对smad2基因的靶向调控作用。方法 从小鼠肝星状细胞基因组中获取smad2基因的3′UTR序列，分别合成包括piRNA-DQ566704结合位点在内的smad2基因的3′UTR的野生型(WT)和突变型(MUT)基因片段，构建野生型(pGL6-miR-smad2-3′UTR-WT+pRL-TK)和突变型(pGL6-miR-smad2-3′UTR-MUT+pRL-TK)smad2双荧光素酶报告基因载体。将smad2野生型与突变型双荧光素酶报告基因载体分别与piRNA-DQ566704 mimic、piRNA-DQ56Fer-1化学结构6704 inhibitor和阴性对照(NC)等各组共转染293T细胞，检测各组相对荧光素酶活性，观察piRNA-DQ566704对smad2基因表达的影响。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和Western blot验证小鼠肝星状细胞转染piRNA-DQ566704 mimic、inhibitor、mCCRG 81045imic NC后，小鼠肝星状细胞中smad2 mRNA和smaage- and immunity-structured populationd2蛋白的表达。结果 携带piRNA-DQ566704 mimic和smad2-3′UTR-WT的构建体的相对荧光素酶活性明显下降(P<0.001),而对smad2-3′UTR-MUT的构建体的相对荧光素酶活性无抑制作用(P>0.05)。在小鼠肝星状细胞中过表达piRNA-DQ566704后，mimic组smad2 mRNA和smad2蛋白的表达明显降低(P<0.001)。结论 piRNA-DQ566704可以靶向调控smad2基因的表达，smad2是piRNA-DQ566704的直接靶基因。