疫苗接种是防治人类和动物类传染病的最有效、最经济的手段,然而安全高效的疫苗需配伍良好的佐剂。与传统乳剂相比,纳米乳具有安全性高、稳定性强、免疫效果良好等优势,现已成为了兽用疫苗佐剂研究的重点方向。新型疫苗,特别是基于病毒样颗粒的基因工程疫苗,因其更高的免疫原性和安全性已受到CCS-based binary biomemory广泛关注。然而,这种亚单位抗原通常不具有足够的免疫原性来诱导保护性免疫,更需要与有效的佐剂结合以确保强烈的免疫反应。目前,口蹄疫疫苗中使用较多的ISA206佐剂免疫效果好,但是长期依赖进口,存在贸易壁垒等风险,因此,选择合适的化合物成分,开发既安全又能刺激全面免疫反应的针对FMDV-VLPs疫苗的佐剂显得尤为迫切。本研究采用伪三元相图法和相转变法,制备了两种新型纳米乳佐剂,对其理化性质进行了表征。选择自制佐剂,以口蹄疫病毒样颗粒为抗原乳化制备疫苗,以实验动物为模型,对其生物相容性及免疫增强效果等进行了相关研究,以期为疫苗佐剂的进一步深入研究和应用提供一些思路与依据。(1)黄芪多糖纳米乳的制备及佐剂效果评价黄芪多糖纳米乳(APSN)由白油、Span80、Tween80、1,2-丙二醇和黄芪多糖溶液组成。通过粒径分析仪检测其平均粒径为83.7nm、电位为-15.6m V、多分散指数为0.196。透射电镜下APSN为大小均一的类球型,粒径在80-100nm之间,与粒径分析仪检测结果一致。将APSN分别置于室温(25℃)和37℃中避光保存180天,其微观形貌、粒径、zeta电位、PDI、p H等没有明显变化,证明该佐剂稳定性良好。对小鼠注射一定剂量的APSN后,小鼠采食饮水正常,活动自如,精神状况良好,注射部位未出现红肿、脱毛和溃烂等现象,一月之内体重增长正常。通过组织病理切片检测,重要脏器均未出现明显的病理损伤,由此表明APSN配方安全、毒性小,生物安全性好。将APSN作为佐剂乳化制备口蹄疫病毒样颗粒疫苗,免疫小鼠、豚鼠、猪,评价其免疫增强效果。结果表明APSN能显著CH-223191溶解度提高4周内小鼠特异性抗体水平、Ig G1和Ig G2a的水平以及细胞因子IFN-γ和IL-1β的分泌水平。4周内豚鼠的特异性抗体和中和抗体显著增加,同时脾淋巴细胞增殖也得到了促进。单剂量的APSN-VLPs疫苗免疫豚鼠后,28天进行攻毒实验,APSN-VLPs组的保护率达到了100%,高于ISA206对照组。APSNVLPs疫苗免疫猪后,特异性抗体水平、中和抗体水平也高于ISA206-VLPs疫苗对照组,其细胞因子IL-1β、IL-4及IFN-γ的含量也高于ISA206-VLPs疫苗对照组。(2)含CpG的新型纳米乳(SNA)的制备、安全性评价及免疫增强效果研究SNA由Span85、Tween60、角鲨烷、聚乙二醇-400和CpG组成。常温下,新鲜制备的SNA呈淡黄色透明乳液状;透射电镜观察SNA为大小均一的圆形;通过粒径分析仪测得SNA的平均粒径为95 nm,约75%的纳米乳液颗粒集中在68～105 nm之间,粒径分布范围窄,平均电位为-25.76 m V,多分散性指数为0.4。经过一系列实验证明SNA具有良好的抗离心性能、热稳定性、长期保存稳定性和生物相容性。以SNA为佐剂乳化制备口蹄疫病毒样颗粒疫苗,免疫实验动物,评价免疫效果。与对照组相比,SNA-VLPs能增加细胞因子的分泌,BMS-354825半抑制浓度促进淋巴细胞增殖,免疫动物后诱导产生了更强的细胞免疫应答与体液免疫应答反应,攻毒保护效果理想。本研究结果证实,APSN和SNA两种新型纳米乳能显著提高机体对口蹄疫的免疫应答反应,能刺激更强烈的细胞免疫反应,显示出了比ISA206更全面的免疫增强效果,是有效的口蹄疫病毒样颗粒疫苗佐剂,APSN有望成为商品化的兽用佐剂,本研究也为后续兽用疫苗佐剂研究及应用提供了试验依据。