背景:原发性干燥综合征(p SS)是一种以淋巴细胞增殖和外分泌腺进行性损伤为特征的Cardiac Oncology慢性自身免疫性疾病,目前治疗以对症治疗为主,出现系统病变时使用激素及包括生物制剂在内的改善病情抗风湿药,控制活动期炎症,尚未获得满意的治疗效果,因此,亟需寻找一种安全有效的治疗策略。p SS病因尚不清楚,可能与遗传、环境、免疫等多种因素有关,研究表明CD4~+T淋巴细胞在p SS发病早期起关键作用。间充质干细胞(MSCs)作为一种多能干细胞,被广泛应用于自身免疫性疾病、血液系统疾病,心血管疾病等多项研究中,但MSCs作为细胞疗法,具有毛细血管堵塞、成瘤以及异位成骨等局限性。近年来研究发现MSCs的免疫调节及组织修复能力主要源自其旁分泌作用,唇腺来源的间充质干细胞外泌体(MSC-Exos)可抑制Th17细胞的分化,增加干燥综合征小鼠唾液流率,改善干燥样症状,降低自身抗体水平,减少淋巴细胞浸润灶。与其他来源的MSC-Exos相比,脐带来源的间充质干细胞外泌体(UCMSC-Exos)来源广泛,取材方便,无道德伦理限制,但目前暂无关于UCMSC-Exos在SS中的研究,那么UCMSC-Exos能否改善NOD小鼠干燥样症状,对SS发病早期的关键环节CD4~+T细胞有何作用。目的:1.研究UCMSC-Exos对NOD小鼠干燥样症状的作用。2.研究UCMSC-Exos对NOD小鼠CD4~+T细胞的免疫调节作用。方法:1.实验分组及干预方案:购买NOD模型小鼠和C57BL/6小鼠,C57BL/6小鼠为正常对照组,NOD-PBS组为空白对照组,NOD-UCMSCs组和NOD-Exos组为干预组,于8周和9周分别给药1次(各组给药情况:C57BL/6-PBS组100μL PBS,NOD-PBS组100μL PBS,NOD-UCMSCs组1×10~6/100μL UCMSCs,NOD-Exos组100μg/100μL UCMSC-Exos),12周处死,留取外周血、脾脏和颌下腺。2.UCMSC-Exos对NOD小鼠干燥样症状的作用:评估小鼠一般状况(体重、唾液流率),收集小鼠外周血,ELISA法检测免疫球蛋白(Ig A、Ig G、Ig M)和自身抗体(抗SSA抗体、抗SSB抗体)水平,收集小鼠颌下腺,HE染色观察淋巴细胞浸润情况。3.UCMSC-Exos对NOD小鼠CD4~+T分化的调节作用:免疫组化法检测颌下腺和脾脏CD4~+T细胞的分SBE-β-CD细胞培养化情况。4.UCMSC-Exos对NOD小鼠CD4~+T细胞相关炎性因子的影响:收集小鼠外周血,ELISA法检测CD4~+T细胞相关炎性因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-10及TGF-β)水平。结果:1.UCMSC-Exos对NOD小鼠干燥样症状的作用:(1)一般状况:与NOD-PBS组比较,NOD-UCMSCs及NOD-Exos组小鼠体重增加,NOD-UCMSCs与NOD-Exos组小鼠体重无明显差异;与NOD-PBS组比较,NOD-UCMSCs组小鼠唾液流率有增加趋势,但无统计学差异;与NOD-PBS组比较,NOD-Exos组小鼠唾液流率增加,NOD-UCMSCs与NOD-Exos组小鼠唾液流率无明显差异。(2)与C57BL/6-PBS组相比,NOD-PBS组Ig A、Ig G水平明显升高,且差异具有统计学意义,NOD-PBS组、NOD-UCMSCs组及NOD-Exos组相比,Ig A水平无明显差异;与NOD-PBS组相比,NOD-UCMSCs组及NOD-Exos组Ig G明显下降,且差异具有统计学意义,C57BL/6-PBS组、NOD-PBS组、NOD-UCMSCs组及NOD-Exos组相比,各组Ig M水平无明显差异。与C57BL/6-PBS组相比,NOD-PBS组小鼠血清抗SSA抗体水平较高,且差异具有统计学意义,与NOD-PBS组相比,NOD-UCMSCs组及NOD-Exos组小鼠血清抗SSA抗体明显下降,且具有统计学差异。C57BL/6-PBS组、NOD-PBS组、NOD-UCMSCs组及NOD-Exos组相比,各组小鼠血清抗SSB抗体水平无明显差异。(3)与NOD-PBS组比较,NOD-UCMSCs组小鼠颌下腺淋巴细胞浸润灶有减少趋势,但无统计学差异,与NOD-PBS组比较,NOD-Exos组小鼠颌下腺淋巴细胞浸润灶明显减少;NOD-UCMSCs组与NOD-Exos组比较,小鼠颌下腺淋巴细胞浸润灶无明显差异。2.UCMSC-Exos对NOD小鼠CD4~+T细胞的免疫调节作用(1)与NOD-PBS组相比,NOD-UCMSCs组及NOD-Exos组小鼠颌下腺IFN-γ和IL-17A阳性细胞比例降低,IL-4和TGF-β阳性细胞比例升高;NOD-UCMSCs组与NOD-Exos组比较,小鼠颌下腺IFN-γ、IL-4、IL-17A、TGF-β阳性细胞比例无明显差异。与C57BL/6-PBS组相比,NOD-PBS组小鼠脾脏IFN-γ和IL-17A阳性细胞比例升高,IL-4和TGF-β阳性细胞比例降低;与NOD-PBS组相比,NOD-UCMSCs组及NOD-Exos组小鼠脾脏IFN-γ和IL-17A阳性细胞比例降低,IL-4和TGF-β阳性细胞比例升高;NOD-UCMSCs组与NOD-Exos组比较,小鼠脾脏IFN-γ、IL-4、IL-17A、TGF-β阳性细胞比例无明显差异。(2)与C57BL/6-PBS组相比,NOD-PBS组IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-17F、IL-22的表达水平升高,IL-10、TGF-β表达水平降低;与NOD-PBS组相比,NOD-UCMSCs组IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-17F、IL-22表达水平降低,IL-10、TGF-β表达水平升高,IL-2、IL-4表达水平无明显差异;与NOD-PBS组相比,NOD-Exos组IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6、IL-17A、IL-17F、IL-22表达水平降低,IL-10、TGF-β表达水平升高,IL-4表达无明显差异。NOD-UCMSCs组与NOABT-263D-Exos组比较,IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-10及TGF-β等细胞因子表达水平无明显差异。结论:1.UCMSC-Exos可增加NOD小鼠体重及唾液流率,改善干燥样症状,降低Ig G及抗SSA抗体水平,减少颌下腺淋巴细胞浸润灶。2.UCMSC-Exos可调节T细胞分化,抑制CD4~+T细胞相关的促炎细胞因子分泌,促进抗炎细胞因子分泌。