植物在其生长发育过程中常常会遭受病原微生物的攻击,为了应对这种胁迫,植物进化出一套精细的免疫应答调控机制。植物基于对“非我”识别的先天免疫系统可以分为两个层面:第一个层面是通过细胞表面的模式识别受体对病原物保守的相关分子模式进行识别而引发的免疫反应,称为分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)触发的免疫,即PTI(PAMP-triggered immunity);第二个层面是由抗病基因编码的抗性蛋白(resistance protein,R protein)直接或间接识别病原微生物分泌的效应子(effector),进而激发较强的防卫反应,称为效应子触发的免疫,即ETI(effector-triggered immunity)。基因表达的转录调控在其响应胁迫的过程中起重要作用,转录因子不仅可以在植物抗病反应中起正调控作用,也可以起负调控作用。EAR(ERF-associated amphiphilic repression)基序作为主动抑制子的抑制结构域存在于ERF等转录因子家族成员中,具有非常保守的氨基酸序列。含有EAR基序的转录因子通过负调控生长发育、非生物胁迫及生物胁迫应答相关基因的表达,从而使植物在不同环境下保持正常的生理状态。前期研究中发现,两个含有EAR基序的转录因子DEAR1(At3g50260)和DEAR5(At4g06746)在拟南芥体内能够被病原菌诱导表达,因此我们推测DEAR1和DEAR5在调控拟南Docetaxel NMR芥免疫应答进程中可能发挥着一定的功能。为了探究DEAR1和DEAR5是否在调控拟南芥免疫应答进程中可能发挥功能,我们分别构建了DEAR1和DEAR5两个转录因子的组成型和诱导型表达载体并通过遗传转化的方法获得过表达植株p MDC32-2×35S:DEGSK J4AR1-2HA、p MDC32-2×35S:DEAR5-2HA、p ER8-Est:DEAR1-HA以及p ER8-Est:DEAR5-HA。同时基于CRISPR/Cas9技术对基因DEAR1和基因DEAR5进行双位点敲除,获得了实验所需的突变体植株。通过使用flg22、PEP1、PIP1、Pst DC3000(hrc C~–)、Pst DC3000(Avr Rpt2)以及Pst DC3000(Avr Rpm1)对上述获得的植株进行处理,通过测定乙烯积累量和植保素的产量探究DEAR1和DEAR5在调控拟南芥免疫应答进程中的功能及作用机制。我们总结发现,在Pst DC30Imported infectious diseases00(Avr Rpt2)的处理下,突变体植株的乙烯积累量和植保素的产量与野生型植株无明显差异,过表达植株的乙烯积累量和植保素产量增高;在Pst DC3000(Avr Rpm1)的处理下,与野生型植株相比,突变体植株的乙烯积累量和植保素的产量无明显差异,过表达植株的乙烯积累量无显著差异,植保素产量增加;而在Pst DC3000(hrc C~–)、flg22、PEP1以及PIP1的处理下,过表达植株的乙烯积累量及植保素的产量会发生明显的增高,突变体植株的乙烯积累量和植保素的产量会降低。由此我们得出结论,基因DEAR1和DEAR5能够通过参与病原相关分子模式触发的免疫反应来调控植物免疫应答进程,同时DEAR1和DEAR5能够通过调控乙烯和植保素的合成来增强植物抗性。总体而言,本文初步揭示了两个含有EAR基序的转录因子DEAR1和DEAR5能够在病原相关分子模式激活的信号通路中参与调控植物免疫,为下一步探究DEAR1和DEAR5参与调控免疫反应的分子机制提供参考。