目前抗原便携快速检测方法种类繁多,其中最为常用的方法就是侧向流动检测(LFT),LFT常用的标记物包括胶体金和乳胶颗粒。胶体金检测技术具备使用快速方便、成本低和标志物稳定Alisertib说明书等优点,但是仍存在着灵敏度低和容易产生假阳性等缺点。因此本论文以免疫夹心“三明治”样结构为基础,在可视化信号传感层面上探索一种能够传感抗原抗体互作信息的新方法。我们将严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-Co V-2)的刺突S1蛋白经捕获抗体固定在芯片表面,接着与具备靶抗原结合活性的铂纳米探针(Pt NPs探针)共同孵育,形成捕获抗体@靶抗原@检测抗体免疫夹心“三明治”结构,接着利用Pt NPs探针催化过氧化氢分解产生气泡这一种新型信号传感方式展示抗原抗体互作的结果。本论文主要分为三个部分:(1)不同粒径的Pt NPs的制备及表征和Pt NPs探针的制备及表征;(2)捕获抗体@靶抗原@检测抗体免疫夹心“三明治”结构的搭建;(3)抗体芯片的制备及新型夹心无酶冒泡抗原检测(EFBAD)平台的搭建。本实验利用硼氢化钠还原氯铂酸的方法合成小粒径Pt NPs。然后,以小粒径Pt NPs为晶核通过L-抗坏血酸还原氯铂酸合成大粒径Pt NPs,并通过紫外可见分光光度计、透射电镜对所制备的Pt NPs表征检测,我们成功制备了直径约4.2 nm和22.3 nm的Pt NPs。本实验接着进行两种制备Pt NPs探针方法的筛选。其一,通过3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰肼(PDPH)将Pt NPs表面酰肼化,并将其与已醛基化的抗体Fc段结合,进而完成Pt NPs探针的制备。其二,通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)将柠檬酸盐封端的Pt NPmedical nutrition therapys与抗体分子上氨基结合,一步法就可完成Pt NPs探针的制备。两种方法制备的Pt NPs探针经ELISA验证,均具备识别和结合刺突S1蛋白的能力,符合本检测体系中对检测探针的要求。比较之下,交联剂为PDPH制备Pt NPs探针检测刺突S1蛋白的线性关系好。为形成捕获抗体@靶抗原@检测抗体免疫夹心“三明治”结构,我们通过类似酶联免疫吸附实验(ELISA)寻找一个抗体对。这个抗体对的两个抗体均能与靶抗原结合,且它们对应的抗原表位之间存在差异使得同一个靶抗原能同时与捕获抗体及检测抗体结合。之后,我们利用Pt NPs探针具有辣根过氧化物酶(HRP)的特性,Pevonedistat试剂通过无酶免疫吸附实验(EFISA)筛选抗体对,确定本论文中所用的捕获抗体和检测抗体,用于刺突S1蛋白的便携式快速检测。经过EFISA筛选我们获得一对符合检测体系搭建要求的抗体对,且相对于传统ELISA本论文所使用的检测体系具备缩短整体实验周期、提高实验的灵敏度和减小非特异性吸附的优点。本论文制备的抗体芯片核心成分是芯片表面固定的抗体,抗体芯片的制备使用了一种硅烷偶联剂,将玻璃表面氨基化修饰,再使用戊二醛醛基化修饰玻璃表面,最后利用抗体分子上氨基与醛基化的芯片化学键合而制成抗体芯片。接下来,抗体芯片经过HRP偶联的抗体和Alexa Fluor 488偶联的抗体检测,验证其具备一般抗体芯片的生物活性,符合本检测体系对抗体芯片的要求。结合抗体芯片和Pt NPs探针,我们成功搭建了刺突S1蛋白的EFBAD检测平台,该平台提供一种新型可视化传感方式,利用Pt NPs催化过氧化氢分解产生气泡,依据气泡产生时间和形成特征来判断待检测样本中是否存在靶抗原。综合上述结果,本论文筛选出合适粒径的Pt NPs,并制备Pt NPs探针及验证了该探针符合使用要求。经过EFISA方法筛选出检测刺突S1蛋白的捕获抗体和检测抗体,建立捕获抗体@靶抗原@检测抗体免疫“三明治”结构。在此基础上,结合制备的抗体芯片捕获靶抗原的能力,最后成功搭建EFBAD平台来检测刺突S1蛋白,提出数据可视化分析方法。该平台以可视化的气泡传感信号来判断样本中是否存在靶抗原。该技术方法检测刺突S1蛋白的实验周期短,对检测环境要求低,为靶抗原的便携式快检技术提供了一个新思路。